促红细胞生成素对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓神经元保护的作用及其分子机制研究

促红细胞生成素对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓神经元保护的作用及其分子机制研究李凯-《吉林大学》-2015【摘要】目的:臂丛神经根性撕脱伤后脊髓神经元大量死亡，神经再生缺乏“原动力”，严重影响术后肢体功能的恢复。促红细胞生成素（EPO）是调节红细胞生成的常用药物，也对多种中枢及外周神经系统损伤有治疗作用。本研究旨在，利用全臂丛神经撕脱伤模型，研究伤后即刻，皮下注射低剂量EPO对根性撕脱伤后神经元的保护效果、副作用及其与JNK/c-Jun凋亡信号通路间的关系。方法:成年Wistar雄性大鼠180只，随机等分为对照组（C组，根性撕脱+隔日皮下注射生理盐水1mL）和促红细胞生成素组（EPO组，根性撕脱伤+隔日皮下注射EPO1000U/kg）。两组分别在术前（0天）、术后1、2、4、7和14天留取脊髓C5-T1段。H-E，尼氏体染色法观察神经元状态；TUNEL和c-PARP检测神经元凋亡情况；免疫组化法，Westernblot和RealtimePCR分别检测p-JNK和c-Jun在脊髓神经元内的蛋白及mRNA表达变化。结果:1．存活神经元计数：与损伤前相比，C组和EPO组损伤后1、2、4天神经元数量均无明显变化，7、14天数量急剧减少。两组比较，EPO组存活神经元数量在第7、14天明显高于C组。2．脊髓神经元TUNEL情况：C组和EPO组伤后第2~14天可见凋亡细胞。两组比较，EPO组TUNEL阳性IOD值低于C组，在第4、7天差异具有统计学意义。3．脊髓神经元c-PARP含量：其免疫组化的IOD值，与损伤前相比，伤后第2~14天升高明显，C组第4天达峰值，EPO组第7天达峰值。两组间比较，第2、4天，EPO组明显低于C组。4．两组血常规组间比较：相同时间点，EPO组与C组的血红蛋白量、红细胞数、血细胞压积，均无显著性差异。5．脊髓神经元c-Jun蛋白及mRNA：组内比较，撕脱后第2~7天升高明显，第2天达到峰值。组间比较，EPO组第2~7天，c-Jun明显低于C组。6．脊髓神经元p-JNK蛋白表达：组内比较，撕脱后1~7天升高明显，第2天达峰值。组间比较，EPO组第1~4天，p-JNK含量明显低于C组。7．梯度离心法能够提高脊髓神经元的提取数量和特异性，为后续的实验奠定基础。结论:1．改良全臂丛神经根性撕脱伤动物模型撕脱确切、副损伤小、符合实际致伤机制；2．臂丛神经根性撕脱伤可导致脊髓神经元凋亡，EPO可减少神经元凋亡、增加神经元存活数量，发挥其保护神经的作用；3．臂丛神经根性撕脱伤后可引起脊髓相应节段神经元p-JNK，c-Jun蛋白表达上调，而应用EPO则可抑制神经元内该蛋白的表达；4．隔日皮下注射EPO1000U/kg几乎不影响血常规结果。