光散射仪操作规程

18角度激光光散射仪凝胶色谱操作规程1、开机前准备：水：屈臣氏蒸馏水，有机溶剂：色谱纯。缓冲盐溶液：配置完成后过2层0.22um滤膜。流动相需准备充足。2、系统平衡：根据需要选择凝胶柱以及需要连接的检测器。开启脱气机，泵、柱温箱、检测器以及电脑开关。点击quickstartpump进行流速设置，点击ASTRA进行实验方法设置。提前一天将流速调至试验所需流速进行系统平衡，其中注意流动相过渡问题，待检测器冲平后可进行进样分析。3、进样：第一针建议标准样品归一化处理，用于激光18角度校正，建议进样前进行该处理。多糖需用3-5mg/mL分子量为五万以下的右旋糖酐进行激光，蛋白质以2-4mg/mL的BSA作为归一化样品。所以样品离心后取上层清液过0.45um滤膜。手动进样器扳至load状态进行进样，一般需进3-5倍进样环体积以清洗进样环，点击软件中运行后将进样器扳至Inject状态进行数据采集。4、数据分析：数据采集后需进行定基线、峰等数据处理，依据实验需要提前实验数据。所有数据可以通过图表中邮件中edit进行数据导出。5、关机：色谱柱和系统清洗-流动相冲洗2-3个小时，根据流动相性质选择合适溶剂过渡，如缓冲盐流动相冲洗后需用万分之二叠代钠清洗一晚上后换20%甲醇冲洗足够时间后，进行色谱柱保存，关闭仪器电源。实验完成后做好登记工作。6、注意事项：粘度检测器内部管理非常细，耐压性差，仪器开机后配有自动保护功能，故而使用粘度检测器时需先开机后启动泵。进样后需用进样针清洗接头对进样器进行清洗。仪器配置：1）18角度激光检测器：DAWNHELEOS103-109Da,分子尺寸10-500nm,激光波长：658nm；2）粘度检测器：ViscoStarII1-3mL/min；4-60℃温度可调；池体积：33μL/bridgearm必须在线测试，连接GPC；3）RI检测器：OptilabrEX绝对折光指数范围（RIU）：1.2-1.8；4）柱温箱，脱气机等。