免疫学技术

1.免疫：是动物（人）机体对自身和非自身的识别并清除非自身的大分子物质，从而保持机体内外环境平衡的一种生理学反应。2.血清学反应：是指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应。由于抗体主要存在于血清中，进行这类反应时一般都要用含有抗体的血清作为实验材料，所以把体外的抗原、抗体反应称为血清学反应。这类反应是根据抗原、抗体具有高度特异性的原理来进行实验的，即用已知的一方来检测另一方的存在。既可定性，又可定量。可用已知抗体来检测未知抗原，如鉴定病原微生物；也可用已知抗原来检测未知抗体，如协助诊断某种疾病。3.抗原提呈细胞：是指具有摄取、处理及提呈抗原能力的细胞,又称为辅佐细胞。现已知辅佐细胞在机体的免疫应答过程中起着十分重要的作用，能摄取、加工、处理抗原并将抗原信息提呈给T淋巴细胞，故又称为抗原提呈细胞（APC）。通常所说的抗原提呈细胞多指的是单核-巨嗜细胞、树突状细胞、B淋巴细胞等能表达MHCⅡ类分子的细胞，即所谓的专职性的抗原提呈细胞。其他细胞，如内皮细胞、纤维母细胞、各种上皮及间皮细胞等也具有一定的抗原提呈功能，又称这类细胞为非专职性抗原提呈细胞。4.表位：又称抗原决定簇，是存在于抗原分子的表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团。5.抗原：是能刺激机体产生抗体和效应淋巴细胞，并能与之结合引起特异性结合反应的物质6.单克隆抗体：是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞产生的针对单一抗原决定簇的抗体。7.免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。8.干扰素：是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。9.DNA疫苗：是指将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注射到动物体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答。该疫苗既具有减毒疫苗的优点。同时又无逆转的危险，因此越来越受到人们的重视，被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。10.凝集反应：一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。11.免疫电泳：是将琼脂电泳和双向琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定性方法。先将抗原加到琼脂板的小孔内进行电泳，然后在琼脂板中央挖一横槽，加入已知相应的免疫血清，两者经一定时间相互扩散后，就会在抗原、抗体比例最适处形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和外形，参照已知抗原、抗体形成的电泳图，即可分析样品中所含成分。此方法样品用量少、特异性高、分辨力强。但所分析的物质必须有抗原性，而且抗血清必须含所有的抗体组分。12.放射免疫分析：使用以放射性同位素作标记的抗原或抗体来测定抗体或抗原量的技术。例如，以未知量的无标记抗原（被检物），加于已知量的标记抗原和抗体的反应系时，依靠测定无标记抗原对标记抗原同抗体结合的竞争性抑制达到如何程度，从而可以测定被检物的数量。13.主动免疫：也自动免疫。利用抗原刺激，使机体产生抗体的方法，而非直接自体外引入抗体。主动免疫对随后的感染有高度抵抗的能力。可通过疾病病原体本身或通过免疫接种产生。免疫须经几天，几个星期或更长时间才出现，但能长久甚至终生保持，且通过注射所需抗原很容易再活化。14.被动免疫：机体被动接受抗体、致敏淋巴细胞或其产物所获得的特异性免疫能力。它与主动产生的自动免疫不同，其特点是效应快，不需经过潜伏期，一经输入，立即可获得免疫力。但维持时间短。按照获得方式的不同，可分为天然被动免疫和人工被动免疫。把已经获得免疫性的动物的血清注射到未经免疫的机体所产生的短时期的免疫,机体中的抗体不是自己产生而是从外界获得的。15.用于抗体标记的荧光素应具备那些条件？（1）有与蛋白分子形成稳定共价键的化学基团，且不形成有害产物。（2）荧光效率高，与蛋白结合的需要量小。（3）标记后不影响抗体的活性（4）性质稳定，易保存（5）激发的荧光与背景颜色有良好的反差。（6）标记简单，能形成商品16.用于抗体标记的酶应具备那些条件？1活性高，分解底物的能力强2特异性强，作用于特异底物3与抗体结合不影响相互活性4与底物作用可显色5可溶性好，性质稳定6来源方便，价格适中17.简述免疫酶技术的原理。用夹心ELISA检测禽流感病毒的基本步骤。1、原理：免疫酶技术是根据抗原抗体反应的特异性和酶催化反应的高敏感性而建立的免疫检测技术。酶是有机催化剂，微量的酶可催化大量的化学反应，如果产物为有色可见物，则极为敏感。E+S→(ES)→E+P如果产物没有颜色，则可通过供氢体显色，来显示反应的发生。E+S→(ES)，(ES)+D1→E+P+D2D1为供氢体，无色，底物水解时，D1由还原型变为氧化型D2，呈现颜色反应。2、基本步骤（1）抗AIV多抗包被（2）洗涤3~5次，每次3~5min（3）封闭含1%OVA的PBS（pH7.2，浓度为10mmol）（4）洗涤同上（5）加待检抗原，置湿盒中，37℃作用1~2h（6）洗涤同上（7）加酶标记抗AIV单抗，置湿盒中，37℃作用1~2h（8）加底物显色，测OD值结果判定：P/N≥2.1判为阳性实验中，要设置阳性对照、阴性对照、空白对照。实验时，先用空白对照孔调零。18.免疫球蛋白基本结构。酶解片段、功能区。1、Ig的基本结构是由四条对称的多肽链构成的单体，Ig单体包括两条相同的分子量较大的重链和两条相同的分子量较小的轻链。•重链（heavychain,H链）由420~440个氨基酸组成，分子量为50000~70000，可分为一个可变区（variableregion，VH）和三个恒定区（constantregion,CH）。VH：自氨基端起到第110个氨基酸，有4个超变区（hyperviaribleregion），分别位于31~37、51~58、84~91、101~110氨基酸区域，其余区域为骨架区，氨基酸序列的变化较小。根据Ig重链抗原性的差异，免疫球蛋白可分为五类，即IgG,IgM,IgA,IgD,及IgE，其相应重链类型分别称为γ、μ、α、δ及ε•轻链（lightchain,L链）由213~214个氨基酸组成，分子量为22500，有一个可变区（VL）和一个恒定区（CL）。VL：自氨基端起到第109位氨基酸，内有3个超变区，分别位于26~32、48~55、90~95氨基酸区域，其余为骨架区。根据抗原性不同，可以分为κ、λ两种其他结构•J链（joiningchain,J链）•分泌片段（secretorypiece,SP）2、免疫球蛋白的功能区Ig的H、L链每隔110个氨基酸残基即由链内二硫键连接并经β片层折叠（β–sheetfold）形成一个能行使特定功能的球形单位，称为Ig的功能区或称结构域（domain）:•VH-VL抗原结合位点•CH-CL遗传位点•CH2-CH2补体结合位点•CH3-CH3细胞结合位点•绞链区3、酶解片段（一）木瓜蛋白酶的水解作用木瓜蛋白酶（papain）使Ig在绞链区重链间二硫键近N端处切断，形成3个水解片段：•两个相同的单价抗原结合片段（fragmentofantigen-binding）简称Fab段•一个可结晶的片段（crystalizablefragment）Fc段（二）胃蛋白酶的水解作用胃蛋白酶（pepsin）可使Ig于绞链区重链间二硫键近C端处断开，形成一个具有与抗原双价结合F（ab’）2片段和无生物活性的小分子多肽碎片(pFc)。