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单克隆抗体的产生过程从用抗原X免疫的小鼠体内分离脾细胞抗原X混合的脾细胞，包括一些产生anti-X抗体的脾细胞融合突变的骨髓瘤细胞系；不能生长在HAT选择性培养基；不产生抗体未融合细胞和融合细胞的混合在HAT培养集中体外选择仅仅融合的细胞（杂交瘤细胞）能够生长分离衍生自单个细胞的克隆筛选上清来鉴定出每个含anti-X抗体的克隆，并扩增阳性克隆产生单克隆抗体的杂交瘤细胞小鼠单克隆抗体产生过程（详见于善谦免疫学导论p.144）•用某一特定抗原（例如抗原X）免疫小鼠。•取出免疫小鼠的脾脏，分离脾细胞，这样的脾细胞群中已含有能产生anti-X抗体的脾细胞。•将分离的脾细胞群与突变的骨髓瘤细胞融合，并在HAT培养基中筛选，仅仅融合的细胞才能在HAT培养基上生长。•分离并筛选阳性克隆•将筛选的阳性克隆扩增培养，以得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，并将这些细胞进一步扩增以制备大量单克隆抗体。第三节免疫系统第六章补体系统Thecomplementsystem•补体的发现与功能•补体的组成•补体的活化•补体系统的调节•补体的功能与生物学意义•补体缺陷本章主要内容补体的发现:1890年J.Bordet(博尔代)1890年，体液免疫系统的重要一年：抗体发现，补体发现溶菌现象：37℃新鲜免疫血清+相应细菌细菌溶解加热处理的血清+相应细菌细菌不溶解加热处理的血清+不含直接对抗细菌的抗体的新鲜免疫血清+相应细菌细菌溶解新鲜免疫血清包含热稳定的组分（抗体），对热不稳定的组分（杀菌素，alexine)PaulEhrlich,命名这类物质为补体（completes）,即完善抗体作用的血清活性后来的发现显示，补体为一大类复杂蛋白系统组成的系统，它们的功能也远非仅是最初观察到的抗体介导的细胞裂解。补体系统的功能可能被抗体启动也可能被天然免疫成分启动在血液或体液内除Ig分子外，另一类参予免疫效应的大分子。在天然和适应性免疫中都其关键作用。主要作用：对病原的识别与破坏。这种主要作用是基于对病原相关分子模式（PAMPs）的识别，而非基于抗体的特异性。补体级联的活化可能被一些正常血清中的蛋白所起始。这类蛋白称为急性期蛋白（actuephasepoteins）,它们拥有模式识别能力，并在炎性反应期间无浓度改变。补体系统的功能裂解调理活化清除补体的组成•化学本质：可溶蛋白和糖蛋白•主要合成于肝细胞，另外血液单核细胞、组织巨噬细胞和胃肠道及泌尿生殖道上皮细胞也能产生•占血清球蛋白的5-10%•大多数在血清中以失活的酶原形式存在•命名原则1）通常编号命名（如C1-C9），按照发现顺序；2）当分解成新片段，通常小片段加a，大片段加b，如C3分解为C3a(小)和C3b（大），但C2是一个例外，恰好相反3）当不同片段合成新的复合物，则将各组分数字代号及小写英文字母写在C后，如C4b和C2a形成C4b2a；当这一复合物有酶活性时，则在小写英文字母和数字上加一横线，如补体成分的功能特性补体活化•活化的前期阶段：经典途径(Classicalpathway)凝集素途径(Lectinpathway)旁路途径(Alternativepathway)•活化的后期阶段补体的溶膜途径形成溶膜复合体（membrane-attackcomplex,MAC）补体活化的通路参与补体系统的蛋白成分起始者转化酶活化剂和酶介质调理素过敏毒素溶膜复合体补体受体调控蛋白经典途径起始于抗原抗体的结合•经典途径的活化通常源于可溶性的抗原-抗体复合物的形成，或者在合适的靶标（如：细菌）上发生的抗原-抗体的结合。•激活经典途径的抗体类别有IgM和IgG亚类（IgG1,IgG2，IgG3)。C1是经典途径活化的识别单位经典活化途径：1）C1经典活化途径：2）C4和C2经典活化途径：3）C3经典活化途径：4）C5经典活化途径：5）C6和MAC旁路活化途径不依赖于抗体•旁路活化途径不必有抗体的参与，但抗体对旁路途径的活化有重要作用。•旁路活化途径从C3开始，有B、D、H、I及P诸因子的参与，不需要经典途径中的C1，C2，C4的参与。•旁路途径的活化需要有Ca2+的参与旁路途径的活化物质旁路活化途径补体活化的凝集素途径起始于结合在微生物表面的宿主蛋白三条途径汇合于MAC的形成MAC区分微生物和自身被动调控机制：所有通路包含了高度易变的组分，这些组分如果不与别的组分反应而变得稳定，就会经历自发的失活一系列的调控蛋白：失活不同的组分补体系统的调控区分微生物和自身被动调控机制：所有通路包含了高度易变的组分，这些组分如果不与别的组分反应而变得稳定，就会经历自发的失活一系列的调控蛋白：失活不同的组分调控补体系统的蛋白补体系统调控蛋白调控蛋白对补体系统的调控：在转化酶活性装配前调控蛋白对补体系统的调控：在转化酶装配后调控蛋白对补体系统的调控：在MAC装配水平补体结合的受体补体激活的生物学意义补体系统的功能裂解调理活化清除细胞裂解微生物对补体介导损伤的逃避C3b是主要的补体系统调理素C4b和iC3b也有调理活性补体易化调理(Opsonization)清除免疫复合物课后作业请翻译PPT7页补体系统的功能，周四上课前交给班长。