免疫诊断防治.

1免疫诊断P241（一）抗原抗体反应的基本原理1.特异性：2.可逆性：非共价可逆结合反应条件：亲和力;温度、PH、离子浓度3.可见性：抗原抗体比例适当第一节抗原或抗体的检测23(二)抗原或抗体的检测方法：1.凝集反应：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在有电解质存在时，比例适当，形成肉眼可见的凝集团块。凝集沉淀标记技术4直接凝集反应（1）直接凝集：玻片法：定性检测未知抗原如ABO血型鉴定、细菌鉴定试管法：定量检测未知抗体如肥达氏反应5（2）间接凝集：载体颗粒（RBC、乳胶等）间接凝集：包被已知抗原，如Coombstest反向间接凝集：包被已知抗体已知6间接凝集抑制反应：妊娠乳胶试验(HCG)标本72.沉淀反应：可溶性抗原（血清蛋白、细胞裂解液等）与相应抗体结合后，在有电解质存在时，比例适当，出现肉眼可见的沉淀物。半固体琼脂凝胶为介质。8原理:检测抗原⑴单向免疫扩散：Ab+琼脂制板打孔AgNSAgAg加样观察（含量）9沉淀环Ag扩散Ab固定于琼脂单向免疫扩散10（2）双向免疫扩散：琼脂AbNS11(3)对流免疫电泳：方法和原理：双扩＋电泳NSAgAb12（4）免疫电泳原理：电泳后双扩应用：血清蛋白种类分析133.免疫标记技术：标记物：荧光素、酶、放射性核素等特点：敏感性高，定性、定位、定量14（1）免疫荧光法：FITC、PE应用：检测CD分子；传染病和自身免疫病诊断。15FITC标记16（2）酶免疫测定：HRP、AP*酶免疫组化法：测定组织中或细胞表面抗原*酶联免疫吸附试验（ELISA）：测定可溶性抗原或抗体17ELISA原理：将已知抗原或抗体吸附于固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤液将游离成分洗去。18方法：*双抗体夹心法：检测抗原Ag底物包被标本洗涤酶标抗体19*间接法：检测抗体洗涤洗涤洗涤标本观察结果20*生物素-亲和素系统（BAS）ELISA：生物素标记抗体，酶标记亲和素*抗原竞争抑制法：标本21（3）放射免疫测定法（RIA）：131I、125I标记，微量物质测定或放射自显影22（4）免疫印迹WesternBlot覆盖转印→硝酸纤维素膜（去垢剂）将分子大小不同的蛋白质分开412412023稀释的抗凝血淋巴细胞分离液淋巴细胞分离液第二节淋巴细胞的测定外周血单个核细胞（PBMC）分离：密度梯度分离法血浆血小板PBMC红细胞粒细胞单核细胞淋巴细胞90%24淋巴细胞亚群的分离与鉴定：尼龙毛分离法：E花结实验：CD2/LFA-225利用表面标志分离淋巴细胞亚群免疫荧光26流式细胞术：样品进入孔待分离单细胞悬液＋荧光标记抗体产生散射光光电倍增管发射荧光根据细胞表面电荷27Lc功能测定：1.淋巴细胞增殖/转化试验：原理：有丝分裂原等非特异刺激T、B细胞向淋巴母细胞转化、增殖。方法：MTT法：线粒体琥珀脱氢酶MTT（噻唑盐）甲臜颗粒（紫蓝色）28氚标记的胸腺嘧啶核苷放射能丝裂原淋巴细胞增殖实验3H-TdR掺入法MTT用酶标仪测定细胞培养OD值292.T细胞介导的细胞毒试验：CTL待检杀伤靶细胞标记303.B细胞溶血空斑实验：RBC表面AgAb溶血空斑补体1～3小时检测：B细胞的抗体产生功能31溶血空斑溶血空斑实验32免疫预防特异性免疫的获得方式：1.自然免疫：2.人工免疫：主动、被动免疫自然主动免疫自然被动免疫33一、人工主动免疫•概念：用具有免疫原性的物质接种机体，使之产生特异性免疫，从而预防感染的措施。疫苗（一）传统疫苗：1．灭活疫苗（死疫苗）：2．减毒活疫苗：3．类毒素：34灭活疫苗和减毒活疫苗的特性比较死疫苗活疫苗性状死活接种次数和剂量多（2-3次）、大少（1次）、小途径皮下皮下、自然感染途径等效果弱、维持时间短强、维持时间长稳定性稳定、易保存不稳定、不易保存安全性安全毒力“返祖”机制体液免疫体液、细胞、局部免疫常用疫苗霍乱、伤寒、狂犬卡介苗、麻疹、脊灰35（二）新型疫苗：1．亚单位疫苗：保留有效免疫原成分2．结合疫苗：TI-Ag+载体→TD-Ag3．合成肽疫苗：4．基因工程疫苗：重组抗原疫苗：重组载体疫苗：DNA疫苗:转基因植物疫苗：编码有效免疫原的基因36二、人工被动免疫概念：给人体注射含有特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。常用制剂：（一）动物免疫血清:外毒素抗毒素类毒素脱毒刺激中和刺激37（二）人免疫球蛋白制剂1.丙种球蛋白：紧急预防甲肝、麻疹、脊髓灰质炎2.人特异性免疫球蛋白：如抗乙肝病毒免疫球蛋白（三）细胞因子制剂：IL-2、IFN等（四）单克隆抗体制剂：人血清丙种球蛋白胎盘丙种球蛋白恢复期病人血清免疫志愿者的血清3839免疫治疗免疫增强疗法：免疫抑制疗法：特异性免疫治疗：非特异性免疫治疗：主动免疫治疗：被动免疫治疗：40（一）抗原类制剂：疫苗、瘤苗、自身抗原（二）抗体类制剂1.免疫血清：2.抗淋巴细胞丙种球蛋白：3.抗肿瘤抗体制剂：靶向治疗•常用细胞毒物质：放射性核素、化疗药物、毒素•存在问题：鼠源性抗体；对实体肿瘤穿透力差；特异性不高。4.抗细胞因子抗体：如用抗IL-1治疗RA。41（三）免疫细胞类制剂：1．造血干细胞移植：骨髓移植、脐血转输2．过继免疫疗法：CIK：cytokineinduceskillercells.细胞因子诱导的杀伤细胞。主要源于NK（外周血淋巴细胞）。TIL：tumorinfiltratinglymphocytes,肿瘤浸润性淋巴细胞。源于实体瘤组织，更强的杀伤活性。42（四）生物应答调节剂：BRM，具有促进或调节免疫功能的制剂，通常对免疫功能正常者无影响，对免疫功能异常尤其是免疫功能低下者有促进和调节作用。1.BCG、短小棒杆菌、细菌或真菌的多糖成分2.胸腺肽：3.转移因子：4.免疫核糖核酸：43（五）免疫抑制剂：化学合成：环磷酰胺，硫唑嘌呤微生物制剂：环孢素或环孢菌素CsA；FK-506；雷公藤制剂44抗原补体免疫细胞MHCCK、CD等抗体免疫应答B细胞T细胞体液免疫细胞免疫复习:生理：病理的免疫应答：超敏、肿瘤、移植免疫诊断、防治：APC第十章123MEDICALIMMUNOLOGYAPCT细胞LFA-1CD2LFA-3TCRCD28B7CD4MHC－Ⅱ肽CD40LCD40ICAM-11246作用：以IgG为代表:结合抗原的部位遗传标记所在部位结合补体、结合胎盘部位结合细胞部位47复习思考题一、名解：凝集反应、沉淀反应、ELISA、（凝集效价、对倍稀释）、自然免疫、自然被动免疫、人工主动/被动免疫、死疫苗、活疫苗、类毒素、抗毒素、BRM二、简答题：1.人可以通过哪些方式获得特异性免疫力？2.比较死、活疫苗的特点。3.比较人工主动和被动免疫的特点。48下周上试验课（在东5楼）必须穿工作服，带实习指导历时4周试验成绩15分