伯劳特-培训资料HP

幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒简要介绍及实验操作过程深圳市伯劳特生物制品有限公司地址：深圳市南山区科技创业中心715邮编：518052电话：[phone]传真:26978719Email:[e-mail]网址:幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒简要介绍及实验操作过程深圳市伯劳特生物制品有限公司地址：深圳市南山区科技创业中心715邮编：518052电话：[phone]传真:26978719Email:[e-mail]网址:深圳市伯劳特生物制品公司医疗器械注册证2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司医疗器械产品生产制造认可表2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司生物制品检定报告书2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司前言20世纪医学界的一个重要事件，一个医学工作者怀疑和寻求了一个多世纪的微生物——幽门螺杆菌终于被发现了！幽门螺杆菌的发现和分离培养成功是科学敏锐性和勤奋、幸运相结合的结果。这一事件成为胃肠病研究史上的一次革命，一个里程碑。从此以后，胃肠病学进入了一个新纪元。2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司幽门螺杆菌的发现幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,简称HP）HP是一种需氧菌，弧形、革兰氏阴性菌，菌体宽0.5～1.0um，长2.5～4.0um，有4～7条鞭毛。是1983年由BarryMarshall和RodinWarrem在澳大利亚首先分离出来的。大量临床研究证明：HP感染是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡和胃癌的重要致病因素，1994年世界卫生组织（WHO）已将其列为第一类（即肯定）的生物致癌因子。2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司在临床上HP可分为两种类型：Ⅰ型,为产细胞毒素HP菌株，其检出率约占总HP的50％～60％，应用免疫印迹技术，显示其免疫活性蛋白区带有128、116、110、95、91、66、60、54、50、33和30KD等。其中细胞毒（CagA）蛋白与128、116和110KD区带有关，空泡毒素(VacA)蛋白与95和91KD区带有关，尿素酶蛋白与66、60、33和30KD区带有关，鞭毛蛋白与54和50KD区带有关。这类菌株能使胃上皮细胞出现空泡、变形和损害，易引起溃疡和诱发癌变。Ⅱ型，是不产生细胞毒素的HP，即CagA(-)和VacA(-)株，这一类HP菌株毒性较小，感染后一般只是引起慢性浅表性胃炎而无临床症状。世界上超过半数的人感染HP，但并不是所有的HP都产生空泡毒素，只有50%—60%具有空泡毒素活性的HP才是产毒菌株。因此对指导HP感染的治疗具有重要的意义。HP分型的意义2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP与慢性胃炎的关系HP与慢性胃炎的关系95%100(38/40)7559%(17/29)50256%(2/31)0正常慢性胃炎活动性胃炎图1、HP与胃炎间的关系（选自Marshall&Warren)有HP的病人%2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP的致病作用HP感染与胃、十二指肠溃疡之间有密切关系10077%755041%50%250胃溃疡正常胃炎100%55%53%58%十二指肠溃疡图2、HP与内窥镜诊断间的关系（选自Marshall&Warren)有HP的病人%胆汁反流食道异常十二指肠炎2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司胃癌与萎缩性胃炎和肠上皮化生有密切关系，这种病理学变化一直认为是癌前病变。Eurogast研究小组认为，100%伴有HP感染的人群中胃癌的危险性比无HP感染的人群增加近6倍。1994年，世界卫生组织（WHO）已将HP列为第一类生物致癌因子。HP的致病作用2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司临床常用HP检测方法比较方法取材方式所需时间辅助设备能否同时分型敏感性特异性组织学法胃镜数小时或数天病理检查设备否较高高细菌培养胃镜数天HP培养设备否较高高尿素酶法胃镜数分钟不需要否较高较高PCR胃镜数小时PCR检测设备否高高UBT吹气数小时质谱仪放射物质检测仪否较高较高金标法取血数分钟不需要否较高较低ELISA取血数小时酶标仪否较高高IBT取血数小时不需要能高高2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司免疫印迹简介印迹技术是本世纪分子生物学领域三大发现之一。它与内切酶的发现和PCR基因扩增技术，给人类生物工程带来了革命性进展。它的基本原理是将凝胶电泳与固相免疫结合起来，主要有三个工序：将蛋白质经凝胶电泳按分子量大小不同依次分离；将分离的组分转印到印迹膜上；对转印到印迹膜的蛋白成分进行免疫学检测。免疫印迹简介2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP抗体免疫印迹检测之基本原理本试验是将标准的HP产毒株【CagA(+)和VacA(+)】的各种抗原成分提取出来，用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小不同依次分开，再将其转印至印迹膜上，如果被检者血清有相应抗体，应用酶联免疫反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，据此可判断出被检血清中各种HP抗体。根据抗体的不同可推断HP类型，根据显色带的强弱、消长可观察治疗效果，预测溃疡有无复发的可能性。HP免疫印迹检测的基本原理2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司•各种胃、十二指肠疾病：包括胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃癌和胃淋巴瘤等；•非溃疡性消化不良；•缺铁性贫血口服铁剂治疗效果不佳者；•儿童消化不良或不明原因的生长发育迟缓者。适应症2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司本检查无任何禁忌症，不需要空腹可随进采血检测。禁忌症2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司本检查安全可靠，无任何副作用，尤其适用于儿童、孕妇HP感染的检测。实验安全性2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP抗体免疫印迹试剂盒特点非创伤性HP检测技术；能直接观察HP血清学反应全貌，包括了CagA、VacA和尿素酶亚单位；国际上公认的HP标准株和质控血清确保了检测的可靠性；方法简单，不需任何辅助设备；检测快速，整个时间仅需2小时；标本需要量少，仅需10微升被检血清；特异性强（96.0%）；敏感性高（98.4%）。2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司试剂盒组成（按40人份计）浓缩洗涤液2×25ml酶联试剂0.5ml显色剂A液25ml显色剂B液25ml终止液25ml印迹薄膜(置反应槽内)5×8条说明书(含《标准带》)一份2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤实验要准备的材料：蒸馏水若干；1000ul可调加样枪一支、10ul加样枪一支及相应的加样枪吸嘴若干；500ml量杯一个、500ml量筒一个；摇床或温箱一台；废物桶一个等。2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司1在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按1：10的比例稀释成洗涤应用液。2每槽加入洗涤应用液1ml，再加入待测血清或全血10ul，放在摇床上摇动30分钟。（或摇动混匀1分钟后，置37℃温箱中孵育30分钟）3取出反应槽，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上将其倒置经磕以拍干剩余液体，每槽加入洗涤液1ml，摇动洗涤1分钟，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上将其倒置经磕以拍干剩余液体，重复洗涤3—4次；幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司4每槽加入洗涤应用液500ul，再加入酶联试剂10ul，放在摇床上摇动30分钟。（或摇动混匀1分钟后，置37℃温箱中孵育30分钟）5同（3）洗涤。6加入显色剂A和B各0.5ml，5—10分钟观察结果。7待阳性带显色清晰，即加终止液0.5ml，2分钟后弃去液体，用自来水冲洗后取出印迹膜，等干后对比《标准带》判断结果。幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP免疫印迹结果判断HP抗体免疫印迹检测之结果判断常见抗体显色区带HP特异性抗体CagA抗体128和116KDVacA抗体95和91KDUreB抗体66KDUreA抗体30KD非特异性抗体鞭毛抗体54和50KD123456789起始线123456789起始线幽门螺杆菌免疫印迹检测标准带2020/1/7深圳市伯劳特生物制品公司HP免疫印迹实物图