保加利亚乳酸杆菌的分离纯化

酸奶中保加利亚乳酸杆菌的分离纯化一、实验目的提取分离酸奶中的保加利亚乳酸杆菌得到纯培养。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或者某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法主要有以下两种：1、平板划线分离法，2、稀释涂布平板法。分离微生物根据不同的材料，可以采取不同的方法，将待培养菌液经过适当稀释，涂布在平板上，经过培养后再平板上形成肉眼可见的菌落，由于待培养菌液样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自两个或多个细胞，因此其最终目的是要在培养基上出现欲分离的微生物的单个菌落，再对单菌落进一步分离纯化，在稀释平板法分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。三、材料用具1、样品：酸奶10ml2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）3、溶液试剂：10%的酚，盛有90ml水的三角烧瓶，用三角烧瓶装的100ml水。4、仪器用具：三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，培养皿，试管，接种环，1ml移液管，10ml移液管，酒精灯，电子天平，高压蒸汽灭菌锅等等。四、实验步骤1、培养基的制备：根据牛肉膏蛋白胨培养基的配方比例，准确称取0.6g牛肉膏，2g蛋白胨，1g氯化钠，3~4g琼脂，200ml水溶解在三角烧瓶中，调节pH在7.0~7.2左右。取两支试管，将培养基注入约1/5试管高度的，用塞子塞好。2、高压灭菌：将盛有90ml水的三角烧瓶，装有100ml水的三角烧瓶，两支注入培养基的试管，试管，平皿，移液管等放入高压蒸汽灭菌锅内，用0.1MPa,121℃高温灭菌20分钟。3、倒平板：灭菌结束取出后，待培养基冷却至55~60℃时，无菌操作倒入5个已灭菌的平皿中约15ml，加盖后轻轻摇匀培养基使其分布在平皿底部，平置于桌面上，待凝后即为平板。将注入有培养基的试管倾斜使其中的培养基成斜面约占试管的一半左右，保持倾斜待凝后即制成培养斜面。4、杆菌稀释液的制备：取5支试管分别准确加入9ml无菌水，再量取10ml酸奶，加入已灭菌的盛有90ml无菌水的三角烧瓶中即制成10﹣1稀释液，接着用无菌移液管吸取1ml稀释液加入装有9ml无菌水的试管中制成10-2稀释液，以此类推制成10-3、10-4、10-5、10-6几种稀释度的稀释液。5、涂布：将凝固好的平板在底部用标签记好稀释度标记，然后在近火焰的无菌区用1ml的无菌移液管分别由10-4、10-5、10-6的试管中吸取0.1ml稀释液对号放入标好稀释度的平板中，用无菌涂布棒在各培养基表面涂布均匀，室温下静置5-10分钟。6、划线：在近火焰的无菌区用接种环蘸取10-2、10-3的稀释液在平板上划线，室温下静置5-10分钟。7、培养：将上述平板倒置于37℃温箱中培养3~5天。8、挑菌落：取出培养基观察单菌落的生长情况，根据菌落特点选择保加利亚杆菌菌落用接种环挑取少许菌团接种到先前准备好的斜面上，放在培养箱中培养一周之后检查其特征形态是否一致，若不一致，即发现杂菌，则需要继续分离纯化直至获得纯培养。保加利亚乳酸杆菌：菌落较大，透明，灰白色，镜检为杆状，乳糖发酵为阳性