仪器使用方法

常用仪器使用方法1、旋蒸仪擦净借口——套上蒸馏烧瓶（小卡在上，大卡在下）——开冷凝水——开旋蒸仪——调节转速——几分钟后关闭真空阀——旋蒸，结束——开真空阀——关旋蒸仪——关冷凝水。2、pH计根据测定物质的pH大致范围，选择合适的校正溶液（确定上下限），再测定样品。3、高速分散器转速：数显*1000rpm，时间：0-9.9min4、紫外扫谱配置合适浓度的药物PBS溶液，并用PBS溶液作为空白，并在确定范围，检测样品，print——桌面新建image——粘贴图谱。5、小型ATS(高压均质机)红色开关——RUN——低压（0/-xbar）排空乙醇——用蒸馏水冲洗2遍——加样品（料斗中药液不得低于凹槽，防止进空气）循环——逐步加压——中途取样，必须关注料斗中的液面，药液体积≥40ml.6、薄层色谱薄层板的制备1．玻璃板用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。如果找不到平整均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。用前先将玻璃用肥皂和水洗干净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。玻璃板大小有各种规格，一般有20×20、20×10、20×5厘米，也有更小的，可根据需要自行设计。宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少1.5厘米，玻板长度一般要满足展开10厘米的距离。点样的起点应距底边至少1.5厘米的距离。2．吸附剂应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分不含粘合剂的硅胶H，氧化铝H和含有粘合剂熟石膏的硅胶G，氧化铝G，如市售硅胶G含13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。吸附剂的粒度范围最好在180－200目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。如不合要求，应过筛。3．薄层板的涂布最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚0．25毫米的玻璃条或有机玻璃条（或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅胶G，加4~6毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的一块薄层板。不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根据情况摸出规律。为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的涂布。为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加薄层的硬度。一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取CMC-Na1克溶于100毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。涂成之后先把玻板放在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何，合格的上烤箱110℃加热30分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不一致引起的Rf值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂即有各种类型的薄层板出售。三、薄层板的使用1．点样将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直径不要超过0.3厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响展开后的斑点形状。每两个样点之间相距至少1.5厘米。点样的起点距薄板底边至少1.5厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。2．展开根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如17×10×6厘米的标本缸可容纳下15×9厘米的玻璃板。采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应（即两边缘的点走得快）和同一物质Rf值不一致现象。一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。先不使溶剂浸湿薄层板，饱和10~15分钟后再进行展开，展开溶剂沿着薄层板向上移动。对加粘合剂的涂板可以近于垂直的状态进行展开，而对未加粘合剂的薄层板则必须以倾斜状态（15度角）进行展开。为了防止产生“边缘效应”和展开溶剂不饱和现象。还可采用夹心式展开容器，其方法是将薄层板的左右两侧各刮去5~10毫米，垫上条状玻璃或塑料，盖一块与薄层板同样大小的玻璃，用夹子将两边夹好，插入展开溶剂中进行展开，并能取得良好效果。3．显色薄层展开后，凉干。如含粘合剂，即可直接喷显色剂，使之显色，有的还需经紫外线（254nm）照射后方能显色；对不含粘合剂的薄板，在喷显色剂时应尽量远离薄层板，否则会连吸附剂一起吹掉，应予以注意。TLC操作要点CMC-Na溶液制备：羧甲基纤维素纳溶液一般浓度为0.3％～0.5％，配制时先称取适量CMC-Na，然后用相应浓度体积的热蒸馏水溶解，抽滤，滤液中加入几滴甲醛，标记常温保存。（注意点：1.cmc-Na在热水中也很难一下子溶解，要煮沸大概30分钟或更久的，其实这个过程很慢。2.如CMC-Na溶解后未抽滤，则用时应取上清液；3.长期不用会发黄，并可能有霉菌生长，因此需加几滴甲醛以防霉变；4.最好提前几天配好，以澄清透明为宜。）硅胶和CMC-Na溶液的比例：根据所分离物质的不同，以及所需薄层板的软硬程度不同，可自我灵活加以调节。（注意点：1.一般溶液体积和硅胶重量的比例为2.5～3:1(v/g)；2.千万不要太粘稠，要不铺板时会马上固化，不易铺平；最好有一定的流动性，这样不易马上干掉，而且铺好后水平放置时他会自然变得平整。3.如果显色剂中含浓硫酸，建议不要用羧甲基纤维素钠配制，或用低浓度的羧甲基纤维素钠配制，以免影响薄层展开效果。4.CMC-Na溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞，或者晾干时会出现许多裂缝。）研磨：研磨时要顺着一个方向，速度不宜快，要顺着研钵的边缘，观察仔细，一定要把气泡赶尽杀绝。研磨好的因改是均匀的，没有气泡，没有固体的粉末类异物，溶液有一定的粘性。（注意点：如果有气泡除不去，可以加入少量的乙醇或者丙酮。）铺板：倒时要注意不能引入小气泡，可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上；可以双手10个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使得硅胶分摊匀称。尤其是4个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。不宜久颠，以保证颠好后硅胶还有一定的流动性，放置到平台时仍可以靠自身流动修正颠板及移动所产生的不均。（注意点：1.玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4个角要“健全”；2.如果下边缘不齐，则可适当刮去部分以使下边缘整齐。3.制备板一般应适当铺厚些，分析板应适当薄些；化学药一般要适当增加厚度；中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度。5.载板要求平滑清洁，在使用前一定要处理干净，用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干；）活化：铺好的板，要找个干净的地方放置自然晾干，这个过程也是耐心的等着，不可过急，干燥后再活化，否则板会开裂。自然干燥后，最好先于50~60摄氏度烘1~2h，然后升温于105摄氏度左右烘0.5~1h，干燥器中保存备用。点样：除另有规定外，按规定用微升毛细管(或其它符合要求的点样的工具)分别吸取供试液或对照液．以垂直方向小心接触薄层板面，做点状点样或条带状点祥。点样基线与底边距离，现所用板的大小，相距l一2cm，多数品种采用长度为10cm的板，故点样距底边1cm为宜。样品原点之间的距离视情况为1、1．5或2cm，原点宣径应不太子3mm(高效板原点宜径应更小)；如点样量较大或为了改善分离度，也可点成1—2mm狭细的窄长条带(长度视情况而不同)，点样时须注意尽量不要损伤薄层板面，如条带点样，应注意条带的均匀；预制板或加固的自制板，用专门的条带点样器械(如喷雾状条带点样器)，可保证点佯的质量。展开剂配制：第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。第二、点不能点得太浓,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变成一个点了。第三、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只有两者比较合适才能有一个交好的分离效果。选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷己烷苯乙醚THF乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleumether/Ethylacetate,Petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,Petroleumether/CH2Cl2,CH2Cl2/ethylacetate,ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后，最后才找到petroleumether/THF这类不常见的混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里在利用TLC跟踪反应时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每种难挥发的原料各点一个点B,C,D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点一个混合点X，这些点在板上的位置如图所示：AXBCD这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层份的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于，方便观察，因为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应等等，使得判断不易。利用TLC判断物质的纯度时，往往要和NMR相结合，因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是，由于HNMR可鉴别的纯度也就在95%左右，有时候HNMR现示较纯的东西，一点板就会发现有几个点。所以，两者要结合使用。但是自己以前的样品，则可以只通过点板来判断纯度。标准品购买在目前研发状态下，杂志谱的研究要求越来越严，几乎成为了药物研发中最为关键的环节，这就涉及到各种杂质、各种杂质中间体等对照品的使用。但是基于历史原因和研发水平，目前在国内能购买到的对照品很少。现就工作中购买对照品/标准品的渠道做一下总结，希望大家补充。一、直接从中检所购买直接从中检所购买，也包括一些省一级的药检所，如上海药检所，南京药检所等。对于对照品的有效期，一般当中检所新出批号时，上一批号对照品基本可认为已过期。二、UPS/EP/BP对照品可以直接从UPS/EP等官方网站上订购；USP对照品可发电子邮件至[e-mail]询问和订购；EP/BP对照品可发电子邮件至[e-mail]询问和订购。三、国外精细化学公司处购买对于英语比较好的同学，可直接从国外精细化学公司网站询问和订购，如：3.1西格玛奥德里奇sigma-aldrich，网址