3无菌检查法(薄膜过滤法)操作程序

第1页共3页贵州明湖药业股份有限公司GMP文件文件名称无菌检查法（薄膜过滤法）操作程序文件类别技术标准制订部门质量保证部起草人日期原编号------修订人日期修订后编号SOP-QUD-0115-2006审核人日期页数共3页批准人日期实施日期2013年6月1日颁发部门贵州明湖药业股份有限公司分发部门质量保证部目的建立无菌检查法。依据国家药品监督局《药品生产质量管理规范》(2010年修订)第七十五条范围本标准适用于抗菌药物注射液。责任人试剂配制人及QA负责人、化验员对本标准实施负责。内容1概述无菌检查是检查药品是否染有活菌的一种方法。2仪器、设备和用具2.1恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。2.2显微镜、蒸汽灭菌器、标准pH比色器(0.02％酚磺酞指示液和澳钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。2．3三角瓶、刻度吸管(1、5、10m1)、玻璃器皿、移液管、试管。2．3．1移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管衙内或牛皮纸袋内盖严，灭菌备用。2.3.2试管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2／3处，用皮纸格管口(包括塞子)包扎严,灭菌备用。2.3.3将注射器、针头(8—9号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。2.4无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。2.5真空泵。第2页共3页2.6用具的灭菌将包扎妥的用具(除另有规定外)，在(121土0．5)℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。3试液3.175％乙醇溶液配制酒精棉球用。3.2碘配溶液配制碘酒棉球用。3.3新洁尔灭(1：1000)溶液。3.43-5％甲酚溶液或其他适宜消毒溶液。3.50.02％酚磺酞指示液pH6.8-8.4系列比色液管3.6溴甲酚蓝指示液pH6.0-7.6系列比色液管。3.72mol/L盐酸溶液。3.82mol/L氢氧化钠溶液。4培养基4.1一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。4.2新鲜配制的培养基，应按中国药典2005版规定的处方，对培养基的原材料要进行挑选，化学药品均需用CP试剂规格。5操作人员用肥皂、水清洗双手，关闭紫外光灯，进入缓冲间，换拖鞋，再用碘酒棉、75％乙醇棉球擦手，穿载衣、帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸，移入无菌间，每次试验中所用物品必须计划好，并有备用物。6供试品外部消毒用75％L醇棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用灭菌撬瓶器剔去铝盖，再用75％L醇棉球擦拭瓶塞，过火焰数次。7供试品制备注射液可直接用注射器吸取药液。按规定或需灭活的供试品可用灭活剂溶解，将瓶内供试液抽出稀释至规定的浓度。依法接种于上述培养基中。8操作8.1如供试品有抗菌作用，按中国药典2005年版无菌检查法表1规定量取供试品10瓶，照直接接种法供试品制备项下，吸取供试液加入无菌0.9％氯化钠溶液或其他适第3页共3页宜的溶液至少100ml具塞的瓶中，混匀。用薄膜过滤器，通过火焰，将瓶塞打开倒入薄膜滤器内，立即开动真空泵将供试液抽干，然后用无菌0．9％氯化钠溶液或其他适宜的溶剂冲洗滤膜，每冲洗一次需将液体抽干，冲洗次数及冲洗液量依供试品种类及量而异，至阳性对照菌正常生长为度，打开抽气瓶塞中的排气管的螺旋夹，将过滤器从排液管架取下，松动底座的螺母，取下滤膜部分，用灭菌镊将滤膜取出，放入灭菌双碟中，用灭菌剪刀将滤膜剪成3等份，分别加入需气菌、厌气菌和真菌培养基中。采用封闭式过滤器时，将双芯针头插至供试液容器塞上，开动电脑蠕动泵电源，使药液均匀通过3个一组的集茵培养器，待药液排尽，关闭电源，将针头取下插至无菌0.9％氯化钠溶液或其他适宜的冲洗液的容器塞上，冲洗集茵培养器的滤膜，照上述操作要求，冲洗次数及量以阳性对照管细菌生长为度。关闭电源，将集菌培养器上排气孔胶帽取下，套于集菌培养器底部的排液管口上；将连接集菌培养器塑胶管之一用夹子(或止血钳)夹紧，将针头插入含需气菌、厌气菌培养基200ml的容器塞上，启动电源。使该种培养基均匀加至两个集菌培养器中，分别用夹子夹紧与其相连的两个塑胶管，同时开通另一个塑胶管的夹子，将针头插入含真菌培养基lOOmI的容器塞上，启动电源，待真菌培养基全部移入培养器中，关闭电源，取下集菌培养器，用夹子夹紧塑胶管近端，用剪切断塑胶管远端。8．2将已操作完毕的培养基移出，依供试品特性加入相应的对照菌液1m1(抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生抱梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌)，按规定温度与时间培养。阳性对照管细菌应在培养24～48小时，真菌应培养24～72，小时有菌生长。薄膜过滤后，须冲洗。8.3每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作为阴性对照。9结果判断当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长时，可根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取样，别依法复试2次，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。