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海南大学学士论文答辩论文题目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究指导老师：班级：姓名：学号：LOGOContents前言1鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的选择3匀浆法提取鼠尾草酸研究456柱层析法纯化鼠尾草酸总结LOGO前言迷迭香主要分布：法国、西班牙、南斯拉夫、突尼斯、摩洛哥、保加利亚，等主要成分：萜类、黄酮类、酚酸类及其他化学物质抗氧化成分：鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚，等主要作用：抗氧化、抑菌、抗病毒、抗癌及作香料，等1LOGO前言鼠尾草酸（CA）分子式：C20H28O4结构式：主要作用：抗氧化、抗癌、抗炎及美容，等意义：随着科技的不断发展及其市场需求量的不断扩大，对鼠尾草酸的要求不断提高。目前国内对鼠尾草酸的提取率并不理想，因此，对迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究有重大意义。本实验主要是建立一个最佳的提取方法及工艺，以提高迷迭香中鼠尾草酸的提取率。1LOGO色谱条件的建立色谱柱：WatersC18（150×4.6mm,5um）；流动相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（75:25）；流速：1.0mL/min；检测器：紫外检测器；检测波长：230nm；灵敏度:0.16AFUS；柱温:室温（25℃）。鼠尾草酸的分析方法2LOGO标准曲线绘制配1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml混合标准品溶液，溶解液使用甲醇鼠尾草酸的分析方法2LOGO检测，得C1提取液置于60℃烘箱中烘干,取烘干样称量得m2,用无水乙醇溶解、定容于25mL棕色容量瓶,。过滤后进行HPLC检测.得C2鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取量(mg/g)：q=c1×v1÷m鼠尾草酸纯度(%)：p=c2×v2÷m2鼠尾草酸提取率(%)：w=c2×v2÷m注：v1为提取液体积(mL),m为原料(迷迭香)质量(g)；v2为乙醇溶解液体积25mlLOGO实验部分大纲Phase1Phase2Phase3提取方法的选择提取工艺优化分离纯化LOGO不同提取方法各项指标的比较提取方法提取温度/℃提取时间/h提取率/%超声波提取法250.51.194回流提取法8020.947常温浸提法25240.742匀浆提取法250.0671.153准确称取迷迭香干叶10g，加入体积溶剂为80%乙醇溶液200ml置于烧瓶中。其他条件根据下表进行实验，并计算出该方法下所得到的鼠尾草酸提取率。匀浆提取和其它提取方法相比,匀浆提取所用时间短,不需加温,提取率高,因此,匀浆提取在提高产率、节省时间等方面具有明显的优势。LOGO匀浆提取原理图匀浆提取是指生物组织通过加入溶剂进行组织匀浆，以提取活体组织中有效成分的一种提取方法，将植物细胞膜和细胞壁破裂，溶剂便较易进入细胞内部，活性物质便溶解于溶剂中，再由传质扩散作用，进入溶剂主体。所以有效成分的提取实际上是目标成分从细胞内释放、扩散到溶剂中的非稳态非平衡过程。LOGO条件60g迷迭香叶600ml蒸馏水加热2.5小时装置图LOGO乙醇浓度选择匀浆法提取鼠尾草酸研究（单因素实验）4条件10g迷迭香叶150ml不同浓度乙醇匀浆4min（乙醇浓度：50%、60%、70%、80%、90%、100%）结果随着乙醇浓度体积分数的升高，鼠尾草酸溶出程度提取量也随之增加。但当乙醇浓度达到80%时，鼠尾草酸和鼠尾草酚的溶出程度均达到最大值，继续增加乙醇的体积分数时，鼠尾草酸的提取量并无明显升高，反而，鼠尾草酸的纯度明显下降。结论选择体积分数为80%的乙醇作为优化提取溶剂012345650%60%70%80%90%100%乙醇浓度鼠尾草酸提取量mg/g-10.00%5.00%10.00%15.00%20.00%25.00%30.00%35.00%鼠尾草酸纯度鼠尾草酸提取量鼠尾草酸纯度LOGO条件10g迷迭香叶150ml80%乙醇匀浆4min盐酸和氢氧化钠调节PH（PH值：2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0）结果在PH值为3-4的时候鼠尾草酸氧化成鼠尾草酚的量最少，因为酸性条件所提供的质子有助于保护不向鼠尾草酚转化，但是酸性太强对设备的腐蚀性增加。结论选择提取溶剂的PH值为3.0作为最佳提取溶剂的PH值024681012142345678910ph值鼠尾草酸提取量mg/g-1LOGO条件10g迷迭香叶150ml80%乙醇匀浆4min（调节酸种类：盐酸、硫酸、柠檬酸、磷酸）结果使用磷酸作为调节酸时鼠尾草酸转化成鼠尾草酚的量最多，保护作用最差，在达到相同PH值的时候，盐酸的用量最少。结论选择盐酸作为最佳酸性调节物质。LOGO条件10g迷迭香叶80%乙醇匀浆4min盐酸调节PH为3.0（料液比：1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:20）结果随着料液比的增大，鼠尾草酸的提取量也一直在增加，当料液比达到1:12后，再增加料液比，鼠尾草酸的提取量变化量较少。结论选择料液比为1:12优化条件LOGO条件10g迷迭香叶120ml80%乙醇PH为3.0（时间：1、2、3、4、5、6、7min）结果随着提取时间的增加，鼠尾草酸的提取量也不断增加，但在四分钟后基本无明显变化进一步延长匀浆时间，可能会导致某些本不易溶出的杂质成分也被溶剂溶出，从而使鼠尾草酸的纯度有所下降。从提取效率及节能的方面考虑，应选择在最短的时间内，达到近于最好的提取效果。结论选择匀浆时间4min作为优化条件LOGO乙醇浓度（%）B溶剂PH值C提取时间（min）D料液比70231:1080341:1290451:14LOGO鼠尾草酸的提取率%鼠尾草酸的纯度%综合评价因数170231:100.87520.63529.385270341:121.08221.28932.109370451:141.10019.48230.482480241:141.23621.76534.125580351:101.12320.47331.703680431:121.25521.05433.604790251:121.31019.48232.582890331:141.28720.56333.433990441:101.25920.36532.955正交实验结果数据表定义：提取率数值的十倍与纯度的数值之和为综合评价因数LOGO以鼠尾草酸提取率为指标，极差分析表因素ABCDk11.1091.1401.1391.086k21.2051.1641.1921.216k31.2851.2051.1781.208R0.2660.0650.0530.130结论：影响匀浆提取鼠尾草酸的提取率的各因素主次顺序为：乙醇浓度料液比溶剂PH值提取时间LOGO以鼠尾草酸的纯度指标，极差分析表结论：影响匀浆提取鼠尾草酸的纯度的各因素主次顺序为：提取时间乙醇浓度溶剂PH值料液比因素ABCDk120.47220.62720.75120.491k221.09720.77821.14320.611k320.13720.30019.81220.603R0.9600.4781.3310.120LOGO综合评价分析表结论：得出最佳的提取工艺条件A2B2C3D2，即乙醇浓度为80%，溶剂PH值为3.0（HCl调节），提取时间为5min及料液比为1:12。因素ABCDk130.65932.03132.14131.348k233.14432.41533.06332.765k332.99032.34731.58932.680R2.4850.3841.4741.417LOGO标准品谱图样品谱图结果：提取率达到1.35%，平均纯度达到22.3%LOGO柱层析法纯化鼠尾草酸硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。具体流程操作如下图。。迷迭香叶干200g料液比：1：15蒸馏提取精油乙醇浓度：80%溶剂PH：3.0（HCl调节）提取时间：5min料液比：1：12匀浆提取提取液过滤滤液60℃烘干准确称量5g30ml蒸馏水，水洗40℃水域振荡30min过滤沉淀100ml乙醇溶解20g活性碳脱色60℃水域振荡30min过滤滤液50℃减压浓缩60℃烘箱烘干得粗提物硅胶柱层析分段收集流分剂HPLC分段检测回收洗脱剂烘干得产品HPLC检测LOGO柱层析法纯化鼠尾草酸硅胶柱层析柱层析条件的建立柱层析条件的建立洗脱剂：乙酸乙酯洗脱剂比例：乙酸乙酯:正丁烷=4:6硅胶粒度：100-200目硅胶初始含水量：6%径高比：1/10流速：4ml/min负载量：0.3g粗提物:20g硅胶鼠尾草酸洗脱曲线注：接样管容量为10mlLOGO柱层析法纯化鼠尾草酸硅胶柱层析结果柱层析条件的建立产品液相色谱图结论鼠尾草酸产品纯度为76.5%LOGO分析方法的建立提取方法的选择匀浆法提取工艺优化硅胶柱层析法纯化CA盐酸调节PH值为3.0的体积分数为80%乙醇作为提取溶剂，提取时间为5min及料液比为1：12.鼠尾草酸线性回归方程y=2E+07x+2345806总结匀浆提取操作简单、快速、充分，并能达到较高的提取效果浓缩物真空干燥得产物纯度可达到76.5%的鼠尾草酸产品。LOGO感谢…老师老师的悉心指导。感谢…等同学在实验过程中的大力支持和帮助同时论文评阅人和答辩委员会所有老师致以最诚挚的谢意