分子生物学常用培养基配方

1、Ampicillin□组份浓度100mg/mlAmpicillin（100mg/ml）□配制量50mL□配制方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22μm滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。2、IPTG□组份浓度24mg/mLIPTG（24mg/mL）□配制量50mL□配制方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22μm滤膜过滤除菌。4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。3、X-Gal□组份浓度20mg/mLX-Gal（20mg/mL）□配制量50mL□配制方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl□配制量1L□配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10g；YeastExtract5g；NaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.高温高压灭菌后，4℃保存。5、LB/Amp培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NaCl0.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.加去离子水将培养基定容至1L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。7.4℃保存。6、TB培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（V/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4□配制量1L□配制方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6.4℃保存。7、TB/Apm培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（V/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配制方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。6.均匀混合后4℃保存。8、SOB培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract0.05％（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2□配制量1L□配制方法1.配制250mMKCl溶液。在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。2.配制2MMgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gNaCl0.5g4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。7.加入去离子水将培养基定容至1L。8.高温高压灭菌后，4℃保存。9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。9、SOC培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract0.05％（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖□配制量100mL□配制方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。3.4℃保存。10、2×YT培养基□组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）NaCl□配制量1L□配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone16gYeastExtract10gNaCl5g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。4..加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4℃保存。11、Φb×broth培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O□配制量1L□配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone20gYeastExtract5gMgSO4•7H2O5g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。4..加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4℃保存。12、NZCYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract0.1％（W/V）CasaminoAcid1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配制量1L□配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。YeastExtract5gCasaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO4•7H2O2g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。4..加水离子水将培养基定容至1L。5.高温高压后，4℃保存。13、NZYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配制方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。14、NZM培养基□组份浓度1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配制方法NZM培养基除不含YeastExtract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。15、一般固体培养基的配制□配制方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。Agar（琼脂：铺制平板用）15g/LAgar（琼脂：配制顶层琼脂用）7g/LAgarose（琼脂糖：铺制平板用）15g/LAgarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用）7g/L2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。3.待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。4..铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5％（W/V）IPTG0.04mg/mLX-Gal1.5％（W/V）Agar□配制量1L□配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。8.4℃保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（W/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin0.024mg/mLIPTG0.04mg/mLX-Gal1.5％（W/V）Agar□配制量1L□配制方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。8.4℃保存平板。