临床免疫学和免疫检验概论

1概论第01讲概论（一）学习免疫学的基本概念，了解临床免疫学的理论基础，掌握免疫技术的检测原理是学习和研究临床免疫学与免疫技术的重要保障。免疫学简介临床免疫学临床免疫学和免疫检验免疫的概念宿主体内的免疫系统，能识别并清除从外环境中侵入的病原生物及其产生的毒素、内环境中因基因突变产生的肿瘤细胞、自身衰老残损的组织细胞或自身变性抗原，实现免疫防御、免疫自稳和免疫监视的功能，保持机体内环境稳定。免疫系统免疫器官免疫细胞免疫分子中枢外周膜型分子分泌型分子胸腺骨髓脾脏、淋巴结、黏膜伴随淋巴组织淋巴细胞（T细胞、B细胞、NK细胞）免疫辅助细胞（吞噬细胞、树突状细胞等）TCRBCRCD分子粘附分子MHC其他免疫球蛋白补体分子细胞因子免疫系统-免疫器官与组织2中枢免疫器官3免疫系统-免疫细胞T细胞4B细胞第02讲概论（二）免疫系统－免疫分子51.免疫球蛋白2.补体系统63.细胞因子74.黏附分子5.CD抗原人类白细胞分化抗原（HLA）是指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。采用单克隆抗体鉴定识别的自细胞分化抗原称CD抗原。检测CD抗原是实验室识别细胞及不同分化阶段细胞或细胞亚群最主要的方法。8免疫功能生理性（有利）病理性（不利）免疫防御抗感染免疫缺陷病超敏反应免疫自稳清除损伤或衰老细胞自身免疫病免疫监视杀伤和清除异常突变细胞肿瘤持续病毒感染免疫应答☆固有免疫，innateimmunity。★适应性免疫，adaptiveimmunity。----体液免疫应答、细胞免疫应答。临床免疫学临床免疫学是将免疫学基础理论、临床疾病与免疫学技术相结合，用于研究疾病的免疫病理机制、诊断与鉴别诊断、评价治疗效果和判断预后的多个分支学科的总称。免疫病理与免疫性疾病移植免疫学肿瘤免疫学感染免疫学临床免疫学与免疫检验临免疫检验可分为两部分，一部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫相关物质；另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质。【习题】免疫的概念是指机体免疫系统具有A.发现并排除有毒因子的能力B.识别和排除抗原性异物的能力9C.抵抗并清除传染性因子的能力D.发现和消除恶变细胞的能力E.清除体内衰老损伤细胞的能力『正确答案』B『答案解析』免疫的概念是指机体免疫系统具有识别和排除抗原性异物的能力。机体免疫自稳功能低下，可导致A.免疫缺陷病B.免疫增殖病C.自身免疫病D.恶性肿瘤E.超敏反应『正确答案』C『答案解析』免疫自稳是清除损伤或衰老细胞，功能低下时可导致自身免疫病。人体内最大的外周免疫器官是A.胸腺B.骨髓C.脾D.淋巴结E.法氏囊『正确答案』C『答案解析』人体内最大的外周免疫器官是脾。可非特异直接杀伤靶细胞的是A.NK细胞B.Th细胞C.Ts细胞D.Tc细胞10E.TCRαβ＋细胞『正确答案』A『答案解析』NK细胞可非特异直接杀伤靶细胞。新生儿从初乳中获得的Ig主要是A.IgEB.IgDC.IgGD.SIgAE.IgM『正确答案』D『答案解析』新生儿从初乳中获得的Ig主要是SIgA。特异性免疫效应功能不包括A.浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能B.Th细胞分泌细胞因子等效应因子，执行细胞免疫功能C.CTL细胞杀伤靶细胞D.产生记忆细胞E.中性粒细胞吞噬与杀灭细菌『正确答案』E『答案解析』中性粒细胞吞噬与杀灭细菌属于固有免疫，是非特异性免疫。粘膜伴随的淋巴组织主要的功能是A.B、T淋巴细胞栖息和增殖场所B.各种免疫细胞的发源地C.T细胞分化成熟的场所D.B细胞分化成熟的场所E.主要产生IgA及分泌性IgA，执行体液免疫与局部特异免疫作用11『正确答案』E『答案解析』粘膜伴随的淋巴组织主要的功能是分泌性IgA。抗原抗体反应第01讲抗原抗体反应抗原抗体反应抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等体液免疫效应；体外反应则根据抗原、抗体性质的不同和反应条件的差别，在抗原抗体复合物形成后表现为不同的现象。包括：沉淀反应、凝集反应等。★抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的特点影响抗原抗体反应的因素免疫学检测技术的类型12抗原抗体反应的原理一、抗原抗体结合力抗原和抗体的结合为分子间结构互补的特异结合，是一种非共价的结合，不形成牢固的共价键。在抗原抗体特异结合后有四种分子间引力参与并促进其结合。静电引力范德华引力氢键疏水作用力静电引力（electrostaticforces）范德华引力：作用最小。（vanderWaalsinteractions）氢键：最具特异性。（hydrogenbond）疏水作用力：作用最大。（hydrophobicinteractions）二、抗原抗体的亲和力与亲合力亲和性（affinity）13抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位之间结合强度，抗原抗体的亲和性取决于两者空间构型互补的程度。亲合力（avidity）指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度。与亲和性、抗体结合价、抗原的有效抗原表位有关。AvidityTheoverallstrengthofbindingbetweenanAgwithmanydeterminantsandmultivalentAbs三、亲水胶体转化为疏水胶体抗原抗体反应的特点特异性14可逆性比例性阶段性一、特异性抗原与抗体结合反应的专一性分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性。两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应，称为交叉反应。15二、比例性抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系等价带：抗原抗体比例合适。带现象：抗原抗体比例不合适。前带：抗体过量。后带：抗原过量。三、可逆性免疫复合物可在一定条件下解离为游离抗原与抗体影响因素：抗体对相应抗原的亲合力越高，结合越牢固，越不易解离。环境因素对复合物的影响－pH、离子强度。16四、阶段性影响抗原抗体反应的因素一、反应物自身因素1.抗原抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数目均可影响抗原抗体反应的结果。2.抗体抗体的来源、浓度、特异性与亲和性均可影响抗原抗体反应。二、环境因素电解质：生理盐水或缓冲液。酸碱度：pH6～9。温度：15℃～40℃，37℃最适。免疫学检验技术的类型取决于：抗原、抗体的性质反应条件其他参与成分五种主要类型：凝集反应沉淀反应补体参与的反应中和反应标记免疫反应【习题】抗原抗体结合力中作用最大的是17A.静电引力B.范德华引力C.氢键结合力D.疏水作用力E.分子间结合力『正确答案』D『答案解析』抗原抗体结合力中作用最大的是疏水作用力。用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原，是由于抗原抗体反应具有A.特异性B.比例性C.可逆性D.亲和性E.带现象『正确答案』A『答案解析』已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原是由于抗原抗体反应具有特异性。抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为A.前带B.后带C.带现象D.等价带E.等电点『正确答案』C『答案解析』抗原抗体反应比例不合适出现的沉淀物减少的现象称为带现象。有关交叉反应的描述，正确的是A.为非特异性抗原抗体反应18B.由于不同抗原分子上存在共同抗原表位所致C.对免疫学诊断结果判断没影响D.利用交叉反应进行诊断典型例子是肥达试验E.利用交叉反应进行诊断典型例子是库姆试验『正确答案』B『答案解析』交叉反应是由于不同抗原分子上存在共同抗原表位。下列关于抗原抗体反应的特点表述，正确的是A.抗原抗体反应有交叉反应，故抗原抗体反应特异性不强B.抗原抗体反应必须抗体量略大于抗原量C.抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体D.抗体与抗原结合牢固，不易被解离E.抗原抗体反应分为两个阶段，两个阶段之间有明显的界限『正确答案』C『答案解析』抗原抗体反应形成的复合物又可解离为游离的抗原与抗体，这是抗原抗体反应的可逆性。免疫原和抗血清的制备第01讲免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清的制备抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要因素。抗原是制备特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是医学检验中用于疾病诊断和研究的重要物质。免疫原的制备免疫佐剂抗血清的制备抗血清的鉴定和保存抗血清的纯化颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原,制备的方法较简单,通过分离或纯培养即可得到。细胞抗原——绵羊红细胞。细菌抗原——菌体O抗原。可溶性抗原的制备19可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。（一）组织可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的纯化（三）纯化抗原的鉴定（一）组织可溶性抗原的粗提1.组织均浆的制备：高速组织捣碎机法、研磨法；2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法。（二）可溶性抗原的提取和纯化1.超速离心法；2.选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法；3.凝胶过滤法；4.离子交换层析法；5.亲和层析法；6.电泳法。（三）纯化抗原的鉴定主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。半抗原性免疫原的制备半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分子量的药物等。半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。（一）载体1.蛋白质类：牛血白蛋白等；2.多肽聚合物：多聚赖氨酸等；3.大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯烷酮等。（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸葡聚糖、羧甲基纤维素等。2.化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。如碳二亚胺法、戊二醛法等。（三）半抗原性免疫原的鉴定与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。所以，应测定半抗原与载体的比例，方法有：①吸收光谱分析法：②放射性核素标记半抗原渗入法。免疫佐剂指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的物质。佐剂的作用机制20①改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除；②增强APC处理和提呈抗原的能力；③刺激淋巴细胞增殖和分化；④改变抗体的产生类型；⑤诱导迟发型超敏反应。抗血清的制备将制备好的免疫原按照一定的程序，免疫动物，使其产生多克隆抗体。然后采集动物血液，分离含有抗体的血清，即为抗血清。免疫动物的选择1.抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强，免疫效果越好。2.适龄、健康、体重合适。3.对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是山羊和家兔。免疫程序1.免疫原的剂量：由免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间确定。2.免疫途径：初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。3.免疫间隔时间：重要因素。第1次与第2次免疫间隔时间以10～20天为好，第3次及以后的间隔一般为7～10天。动物采血法1.颈动脉采血法2.心脏采血法3.静脉采血法抗血清的鉴定和保存抗血清的鉴定1.抗体特异性的鉴定2.抗体效价的测定3.抗体纯度的鉴定214.抗体亲和力的鉴定抗血清的保存①2～8℃保存：用于短期保存；②冷冻保存：一般可保存5年；③真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，在冰箱中可保存5～10年。抗血清的纯化纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等。【习题】属于颗粒性抗原的是A.脂多糖B.球蛋白C.白蛋白D.DNAE.血小板『正确答案』E『答案解析』颗粒性抗原包括血小板。可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。颗粒性抗原免疫接种方法一般采用A.淋巴结注射B.静脉注射C.皮内注射D.皮下注射E.肌肉内注射『正确答案』B『答案解析』颗粒性抗原免疫接种方法一般采用静脉注射。要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法A.盐析法22B.凝胶过滤法C.离子交换层析法D.免疫亲和层析法E.免疫电泳法『正确答案』A『答案解析』盐析法是组织和细胞中粗提蛋白抗原最常用且简便的分离方法。纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体A.盐析法B.凝