丹宁的测定

高粱中丹宁的测定方法—钨铁钠测定法原理：单宁类化合物在碱性溶液中能将钨酸钠还原发生蓝色反应，蓝色深浅与丹宁含量成正比。标准曲线测制吸取标准丹宁溶液（配制每毫升含.01毫克丹宁的水溶液）0、0.5、1、2、3、4、5毫升分别放入盛有70毫升水的100毫升容量瓶中，加F-D试剂（注一）5毫升和饱和碳酸钠溶液（注二）10毫升，加水至刻度，充分混匀，30分钟后用72型分光光度计在650毫微米波长下测定光密度，并绘制光密度—丹宁含量曲线丹宁的提取与测定取高粱粒10克于锥形瓶中，加水50毫升，于60℃恒温箱中过夜，将清液过滤至250毫升容量瓶中，高粱粒再加30毫升热水，于80℃水浴中在提取20分钟，清液一并过滤于250毫升容量瓶中，依法提取3-4次，用三氯化铁检查，直至不出现蓝绿色为止，定容待测。吸取样品上清液（如不清澈需经离心后再测）2毫升置于盛有70毫升水的100毫升容量瓶中，加入5毫升F-D试剂和10毫升饱和碳酸钠溶液，加入至100毫升，充分摇匀，30分钟后与650毫微米下比色，记录下光密度读数。结果计算从标准曲线上查处相应的丹宁微克数，代入下式，即求出样品由丹宁含量。丹宁（%）=(P*vo/w*v1)*100式中：p-由曲线上查的丹宁微克数，w-提取丹宁所有的高粱样品重量（克），v0-提取液定容体积（毫升）。（注一）750毫升水加入钨酸钠100克，磷钼酸20克及磷酸50毫升，回流2小时，防冷，稀释成1升。（注二）每100毫升水中加入无水碳酸钠35克，在70-80℃下溶解，放置过夜，次日用极少量的结晶碳酸钠作为晶钟，轻轻放入过饱和碳酸钠溶液中，结晶过滤，饱和碳酸钠备用。