乙肝HIV梅毒检测技术2016913

第1页乙肝、HIV、梅毒实验室检验技术甘肃省妇幼保健院临床检验中心：赵翠生第2页综合产前检查服务+检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV检测梅毒检测HIV检测全血细胞计数和其它检测取血样2第3页梅毒的实验室检测3第4页梅毒•病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponemapallidumsubspeciespallidum)苍白亚种梅毒苍白螺旋体地方亚种地方性梅毒极细亚种雅司病密螺旋体属品他螺旋体品他病第5页梅毒血清学试验基本实验室设备检方法检测样本类型必要设备血清血浆全血RPR/TRUST√√水平旋转仪TPPA√√震荡仪ELISA√√酶标仪、洗板机POCT检测√√√无需特殊设备5第6页筛查时间梅毒检测方法•非梅毒螺旋体抗原血清学试验（RPR或TRUST检测）•梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测时间•第一次产检（孕早期）•或下一次产检时•如有必要，孕晚期再次检测•此前无检测结果，则在分娩时检测6第7页梅毒的实验室检测方法•显微镜检测法（诊断技术）：（1）暗视野显微镜检查（2）镀银染色检查•血清学检测法（筛查技术）非梅毒螺旋体抗原血清试验：检测非特异性抗体：抗心磷脂抗体、即非特异性抗体、反应素梅毒螺旋体抗原血清试验：检测特异性梅毒螺旋体抗体第8页梅毒早期诊断的依据之一是病原学检测，即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体：–暗视野显微镜–镀银染色镜检梅毒检测技术8第9页非梅毒螺旋体抗原血清学试验•RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）•TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）•VDRL（性病研究实验室试验）梅毒螺旋体抗原血清学试验•TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）•ELISA（酶联免疫吸附试验）•POCT（胶体金技术，快速检测、一站式检测）梅毒检测技术9第10页围产期梅毒检测方法特点用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒梅毒血清学检测——筛查试验应具有的特点•具有较高的灵敏度和特异度•操作简单、容易获得、便宜•尽可能在“当日”获得结果10第11页非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）非梅毒螺旋体抗体•又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体•随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量升高除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫性疾病11第12页非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验：快速、简便、便宜敏感性和特异性较高硬下疳后1-2周变为阳性可用于–筛查样本–评估对治疗的反应–鉴别复燃还是再次感染12第13页确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验质量的关键点1.按照标准操作程序（SOPs）进行操作2.推荐使用评价特性较好的试剂*3.按照统一的标准报告结果4.开展实验室质控（QC）和参加室间能力验证（PT）*由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供13第14页非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度通常与疾病活动度有关•治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反应•如果用同一种实验，相同试验滴度4倍变化（如从1:16下降到1:4或从1:8上升到1:32）为临床显著变化•有些病人，抗体滴度可始终处于较低水平，有时可持续终生（血清固定）注意：病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法（RPR、TRUST）进行连续多次检测；RPR和TRUST方法均有效，但检测的滴度结果不能直接进行比较14第15页治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度变化的临床意义一期梅毒和二期梅毒：成功治疗，抗体滴度应•3个月后下降2倍•6个月后下降4倍一期梅毒：1年后抗体滴度转阴二期梅毒：2年后抗体滴度转阴晚期梅毒：治疗后抗体滴度缓慢下降50%的病人2年后抗体滴度仍为阳性15第16页梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒螺旋体抗原特异性抗体可用于确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，排除其假阳性阳性结果可持续存在，即使治疗后仍可为阳性。*梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关，不能用于鉴别现症感染还是既往感染，也不能用于判断疗效*一期梅毒治疗病人中，15%-25%可在2-3年后转为血清学阴性16第17页妊娠期梅毒检测所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：–孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以及–如果在分娩前/临产时没有筛查检测结果，在分娩时检测筛查检测可应用以下任何一类方法：–非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或–梅毒螺旋体抗原血清学试验所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗17第18页孕产妇梅毒检测流程非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验孕产妇治疗后，随访监测非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验每3个月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验如果需要进行治疗报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：两种检测均阳性治疗病人报告：梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性报告：梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性阳性反应阴性反应阴性反应阳性反应阳性反应或阴性反应阳性反应阴性反应阳性反应第19页HIV感染病人的梅毒血清学试验一些HIV感染病人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括•滴度超常高或超常低•滴度不断变动如果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑•病灶活检或•暗视野显微镜检查注意：对于大多数HIV感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法19第20页梅毒血清学检测结果的解释非梅毒螺旋体试验梅毒螺旋体试验临床参考意义+-RPR假阳性–考虑其他医学状况*++现症梅毒-+既往感染或极早期梅毒--排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期*包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。20第21页暴露婴儿的梅毒检测21第22页梅毒暴露婴儿先天梅毒检测母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgG抗体可通过胎盘，所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）22第23页先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断标准：梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（+）梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR/TRUST监测随访中，任何一次滴度不下降或反而上升满18月龄后，TPPA检测阳性*IgM抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒，但我国尚不能广泛开展23第24页梅毒暴露婴儿的评估梅毒暴露婴儿：婴儿RPR检测婴儿RPR检测不能使用脐带血，因其易被母体血液污染，从而出现假阳性结果检查先天梅毒临床表现：非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、末端肢体假性麻痹对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查24第25页先天梅毒检测流程婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测梅毒暴露婴儿母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测（应同时进行梅毒螺旋体抗原血清学试验，用于随访诊断）组织或分泌物暗视野显微镜检，有条件进行IgM抗体检测报告母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告暗视野显微镜检或IgM抗体检测结果阳性阴性没有梅毒感染的症状有梅毒感染的症状25第26页梅毒检测小结早期梅毒诊断可根据在组织或分泌物样本中通过显微检测到苍白螺旋体而诊断应用梅毒血清学试验进行梅毒筛查–非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒感染过程中产生的非特异抗体。滴度通常与疾病的活动度有关，因此可用于监测对治疗的反应–梅毒螺旋体抗原血清学试验检测对抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体，可用于确认临床诊断或非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，可反映任何阶段的梅毒暴露先天梅毒的诊断复杂，应根据：1.母亲梅毒感染状态2.母亲梅毒治疗情况3.婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或X线检查结果4.母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较5.随访26第27页HIV和HBV的实验室检测第28页HIV和HBV筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染HIV和HBV•HIV抗体检测•乙肝表面抗原（HBsAg）检测筛查检测应•具有较高的灵敏度和特异度•操作简单、容易获得、便宜•尽可能在“当日”获得结果28第29页何时使用何种检测？HIVHBV检测方法HIV快速检测和/或ELISAHBsAg检测如果有条件，其他乙肝标记物检测检测时间•第一次产检（孕早期）•或下一次产检时•此前未检测，分娩时应检测•第一次产检（孕早期）•或下一次产检时•此前未检测，分娩时应检测29第30页HIV试验和检测30第31页HIV检测：抗体检测一个人感染了HIV病毒后，体内将产生特异性抗体对抗HIV病毒*HIV抗体通常在感染后4–6周出现，但也有时也会在感染后3个月才出现从感染HIV病毒到出现特异的HIV抗体的一段时期称为“窗口期”标准的HIV诊断检测是识别HIV抗体**注意：*与其他大多数疾病不同，HIV抗体没有保护性作用。31第32页HIV抗体检测类型快速检测ELISA免疫印迹（WB）准确性灵敏度特异度非常高几乎100%99%非常高几乎100%99%因为特异度极高，用于检测结果不确定样本的确认试验成本++++++结果报告时间1小时3天10天需要专门实验室设备否是是对检验人员技术要求高否是是32第33页HIV检测：病毒核酸检测这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质，并配备专门设备昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法PCR（多聚酶连反应法）检测HIVDNA定性检测血液中是否含有病毒，用于诊断18月龄内婴儿是否感染HIVHIVRNA定量检测病毒载量，用于监测对抗病毒治疗的反应33第34页HIV筛查检测结果的含义HIV筛查检测结果“阴性(-)”：受检者没有感染HIV或者受检者已经感染了HIV，但处于窗口期：3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果“阳性(+)”：病人可能已经感染HIV,但应再次重复检测、另一种方法复检或确诊检测34第35页HIV确认试验结果的含义如果筛查检测结果阳性，两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性，需要进行确认试验免疫印迹法（WB）确认试验结果：-阳性，病人确认感染HIV–阴性，受检者没有感染HIV–不确定，结果为“不确定”，受检者必须在4周后再次采血，重复前述所有步骤进行检测35第36页中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的HIV检测流程36第37页产时HIV抗体检测流程中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程37第38页儿童HIV检测38第39页HIV暴露婴儿和儿童的HIV抗体检测不是所有HIV感染母亲所生儿童都会感染HIV，但是如果对12-18个月以内的婴儿进行HIV抗体检测，所有HIV感染母亲所生婴儿都有可能是HIV检测结果阳性。即使婴儿并没有感染HIV由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月，所以12-18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。39第40页婴儿感染早期诊断（EID）HIV病毒检测（DNA-PCR）HIV病毒检测（DNA-PCR）检测细胞内的HIV病毒，能够检测低至1–10拷贝前病毒DNA，以及可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断（EID）40第41页应用DNA-P