乳鼠脑内注射操作流程及注意事项

乳鼠脑内注射操作流程及注意事项实验动物：一日龄KM窝鼠。一、操作流程1、在实验台先铺一层保鲜膜，再在上面铺一层垫布。左手固定乳鼠头部使其侧卧于垫布上，酒精消毒眼耳连线中点处，右手持注射器垂直刺入眼耳连线中点硬脑膜下，进针2~3mm，注入20%病毒悬液20~30μl，注射完毕酒精消毒局部。（为了固定进针长度，可用10ultip头做成针套，刚好露出针头斜面即可。在刺入针头时注意避开血管，选择眼耳连线中点区域发白的区域）2、逐日观察。48小时内死亡者为非特异性死亡。3、待其发病垂死前，应立即杀死，取出鼠脑-80℃保存。乳鼠发病症状为消瘦，弓背，后肢麻痹，活动力减弱。取鼠脑的方法为：酒精消毒乳鼠脑部皮肤，用无菌的手术剪刀剪开乳鼠脑部皮肤，再剪开硬脑膜，并朝上翻起，暴露鼠脑。换一套无菌剪刀、镊子，镊子夹住皮肤和硬脑膜，用剪刀的弯头挑起鼠脑，放入无菌EP管中。4、十字研磨器研磨脑组织，用PBS按照20%比例稀释。离心，取上清后再离心一次，尽可能去除杂质后再进行后续实验。二、注意事项：1、乳鼠接种后仍然与母鼠一起喂养。为防止母鼠嗅到乳鼠身上酒精气味而吃掉乳鼠，可先用酒精棉球檫试母鼠鼻部；一旦乳鼠发病，立即取出母鼠，以免母鼠吃掉乳鼠。2、生物安全。登革病毒属于虫媒病毒，不用过于恐慌，但是在实验过程中一定要注意生物安全，保护好自己和环境。不要带着污染的手套到处乱摸。①接种，取脑操作过程中要带口罩、手套。②注意在乳鼠接种和观察过程中防止蚊虫叮咬。③用过的手术器械和材料要及时高压。动物尸体高压后及时送至动物中心指定收集地点。2013-1-16