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1生物选修三易考知识点背诵专题1基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物（微生物）中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端（中心轴线的两侧）和平末端（中心轴线）大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列:他们识别的核苷酸序列不同,但是切点都是在G↓C之间。（4）比较有关的DNA酶（1）DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基（2）DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。注意：使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）、重金属盐的作用下，也可使DNA解旋。（3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。（4）DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来自T4噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。2（2）运载体使用的目的：①是用它做运载工具，将目的基因转运到宿主细胞中去。②是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。（3）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。它有多个限制酶切位位点，可自我复制，也可整合到染色体DNA随染色体同步复制。其上有标记基因如氨苄青霉素抗性基因、四环素抗性基因等。被用做载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行人工改造的。（4）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。来源不同不同，结构、大小、插入片段有很大差别。(二)基因工程的基本操作程序目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定第一步：目的基因的获取1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2.原核基因采取直接分离（即已有物种）获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。3.获得目的基因的方法（一）从基因文库中获取目的基因：基本概念的理解：①将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。②将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后将这些片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。这个群体包含了这种生物的所有基因。这种基因文库叫基因组文库。③有些基因文库比较小，只包含了一种生物的一部分基因，这种基因文库叫做部分基因文库，如cDNA文库（用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体叫做这种生物cDNA文库。）怎样提取：根据目的基因有关信息，例如，根据基因的核苷酸序列，基因的功能，基因在染色体的位置，基因的转录产物mRNA以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。（二）PCR（即多聚酶链式反应，1988年穆里斯发明）技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制基本原理前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物。条件：a..四种脱氧核苷酸b.DNA的两条链为模板c.热稳定DNA聚合酶(Taq酶）d.一对引物（一小段单链DNA或RNA，一般20～30个碱基，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对）e.温度控制和缓冲液（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链（即热变性）第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链（复性）；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶（Taq酶）从引物起始互补链的合成（延伸）。第四步：重复循环此过程以获得大量的目的基因。第二步：基因表达载体的构建1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2.重组载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因3（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端，使转录停止。（3）标记基因：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。3.重组载体的构建方法同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）。第三步：将目的基因导入受体细胞_1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达分子检测个体鉴定：①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法——方法——方法——DNA分子杂交分子杂交抗原-抗体杂交（三）基因工程的应用4一、植物基因工程主要用于提高农作物的抗逆能力（如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等）以及改良作物的品质和利用植物生产药物等方面。（1）、抗虫转基因植物目前防治作物虫害的发展趋势是从某些生物中分离出具有杀虫活性的基因，将其导入作物中，使其具有抗虫性。用于杀虫的基因主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。（2）、抗病转基因植物引起植物生病的微生物称为病原微生物，主要有病毒、真菌和细菌等。抗病转基因植物所采用的基因使用最多的是病毒外壳蛋白基因和病毒复制酶基因；抗真菌转基因植物中可使用的基因有几丁质酶基因和抗毒素合成基因。（3）抗逆转基因植物目前科学家利用一些可以调节细胞渗透压得基因的基因，来提高农作物的抗盐碱和能力；将鱼的抗冻蛋白基因导入烟草和番茄，提高其耐寒能力；将抗除草剂基因导入作物，使作物抗除草剂。（4）利用转基因改良植物品质利用转基因技术可以提高生物中的必需氨基酸的含量（如富含赖氨酸的转基因玉米转入的是富含赖氨酸的蛋白质编码基因）、延长贮存时间、改变花色等，从而提高作物品质。二、动物基因工程（1）提高动物的生长速度——转入外源生长素基因（2）改善畜产品的品质—--将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，使奶牛分泌的乳汁中乳糖含量大大境地而其他营养成分不受影响。（3）转基因动物生产药物—--将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等填空组件重组在一起，通过纤维注射法导入哺乳动物受精卵中进而发育成转基因动物，如从乳汁中提取药物的乳腺生物反应器或乳房生物反应器，表达的药物如抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等。（4）转基因动物作为器官移植的供体---猪油内脏构造与人相似且隐藏的病毒较少，科学家试图用猪来解决人类器官的来源。目前做大的问题是免疫排斥，解决办法是将器官供体基因组导入某种调节因子，以抑制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因，再结合克隆技术培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。三、基因工程药物利用转基因工程菌生产药物如细胞因子、抗体、疫苗、激素等。这些药物用来预防和治疗肿瘤。心血管疾病。传染病、糖尿病等。蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）蛋白质工程的途径是：预测蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。蛋白质工程在基因工程的基础上，是第二代基因工程