人类染色体G显带标本的制备

人类染色体G显带标本的制备一、原理常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。Giemsa染料是噻嗪--曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红（2∶1）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。二、试剂及器材（一）试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水（二）器材：37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头三、实验步骤1、取胰酶25mg，溶解于盛有50ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，以5%NaHCO3调节pH为6.6-7.0。2、待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片（37℃烘箱烤片3-7天）放入胰酶液中，并轻轻摆动，3-7秒后取出，立即自来水冲洗。3、染色：pH7.4磷酸盐缓冲液4.5mlGiemsa原液0.5ml染色8-10分钟。4、自来水冲洗，空气干燥，镜检。四、注意事项1、良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。2、染色体长度应能适应显带分析技术的要求。3、G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。五、实验结果低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。