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1研究课题名称：北五味子木脂素不同提取工艺与分析方法研究课题研究的目的：1．以活性成分木脂素五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素作为考察指标，研究利用微波提取仪提取中药北五味子有效成分木脂素的方法。2．微波提取法以提取剂用量、提取剂的浓度、提取温度、提取时间、提取功率、五味子粒径作为拟定考察因素，在探索单因素的基础上，通过响应面优化法，确定最佳工艺参数。3.进行微波与回流辅助萃取北五味子中有效成分木脂素的比较研究，通过提取方法、提取工艺条件的研究找出优质、高效的提取方法。4.以反相高效液相色谱作为检测方法，准确分析北五味子中木脂素含量。5.探讨萃取剂连续使用的绿色工艺方法。2选题的依据和意义：五味子为木兰科植物五味子(Schisandrachinensis(Turcz.)Baill)的干燥成熟果实。我国五味子资源丰富，分布十分广泛，因此对于其化学成分和药理作用的研究也比较深入。化学研究表明，五味子的主要有效部位有挥发油、木脂素、有机酸、多糖、脂肪油、氨基酸、色素、鞣质等。北五味子是一种多用途、价值极高、药食兼用型经济植物，它既可入药也可用于酿酒、制汁生产饮料,还能用于保健、纺织染料等方面。具有敛肺、涩精、止汗、止泻、生津、益智、安神之功效，主要用于治疗肺虚喘嗽、盗汗、痢疾、神经衰弱、急慢性肝炎、视力减退等症[1]。人们对五味子的木脂素成分、含量及药理等进行了大量的研究，取得了显著的进展，五味子中总木脂素的含量为2~8％，国内外学者已经从五味子科植物中分离鉴定出近两百种木脂素成分，从五味子中分离得到的木脂素类单体化合物也有近四十种，五味子中的木脂素成分大多具有联苯环辛二烯母核，是一类低极性小分子化合物，通常采用的分离方法为药材的氯仿或醋酸乙酯溶解部分采用柱层析洗脱得到[2]。我国北五味子属药用植物资源丰富，五味子油有广阔的开发利用前景，涉及消化系统、心血管系统、中枢神经系统、生殖系统以及抗氧化、抗衰老等各个方面[3]。因此，人们利用各种提取方法，从五味子中提取木脂素。Wang等[4]应用超临界流体提取，水蒸气蒸馏，索氏提取和超声提取法提取五味子挥发油。其常规提取主要有：热提取法(索氏提取法、煎煮法等)和浸泡提取法(渗滤法、冷热浸泡法等)两类。目前，伴随着新技术在药材成分提取中的研究和应用，其新方法不断出现，大体有：超高压提取法、超临界CO2萃取法、微波提取法、闪式提取法、法多索溶剂提取法以及超声波提取法，等都受到了人们的关注[5]。本法是微波提取器提取中药五味子活性成分,微波萃取是微波辐射过程中高频电磁波穿透萃取介质，到达物料的内部维管束和腺胞系统。由于吸收微波能，细胞内部温度迅速上升，使其细胞内部压力超过细胞壁膨胀承受能力，细胞破裂。细胞内有效成分自由流出，在较低的温度条件下萃取介质并溶解。通过进一步过滤，便获得萃取物料。高效液相色谱(HPLC)灵敏度高，利用此方法作为检测手段，同时测定了五味子中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素的含量，确保了实验结果的准确、可靠，从而为工业化生产提供了基础性数据。因此采用以微波提取法提取五味子中的木脂素，应用高效液相色谱方法分析测定木脂素当中各个成分的含量。3国内外研究现状：五味子(Schisandchinensis(Turcz.)Baill)，亦称北五味子，系木兰科五味子属植物。广泛分布于我国的辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古、宁夏、山东和山西等省(自治区)。北五味子是著名的滋补性中药，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故名五味子[6]。又名五梅子、玄及、会及、山花椒等[7]。因主产于我国东北各地，也称为辽五味子[8]。始载于《神农本草经》列为上品，具有益气强阴、养五脏、名目壮筋骨等多种功效[9]。对于五味子的科属问题一直有争议，传统认为五味子归属于木兰科。而刘玉壶[10]将五味子科提升为五味子目；五味子科下设南五味子属和北五味子属。五味子属下隶多蕊五味子亚属、中华五味子亚属、团蕊五味子亚属、重瓣五味子亚属、五味子亚属和少蕊五味子亚属(共6亚属)[11]，因此五味子属于五味子科五味子属。目前我国学者在五味子临床疗效、有效成分提取鉴定、药理作用及植物资源等作了大量的研究。研究多集中在五味子的脂溶性成分方面，从五味子中分离得到的木脂素类单体化合物有近40种，其药理作用研究涉及消化系统、心血管系统、中枢神经系统、生殖系统以及抗氧化、抗衰老等各个方面。我国临床研究发现五味子木脂素能明显降低肝炎患者血清谷丙转氨酶水平，引起研究的热潮，并由此开发出治疗肝炎药物联苯双酯。除有明显保肝作用外，这类化合物还具有抗HIV病毒、抗氧化、保护中枢神经系统作用以及安定作用，引起人们进一步研究的兴趣。由于我国的科研人员在五味子有效成分上的研究取得了巨大进展，日本科研人员也加紧了对五味子木脂素成分的研究工作。据统计，上世纪70年代末到80年代末的十年间，日本先后从五味子分离并鉴定出近40种新的木脂素类成分，并且对这些木脂素类成分做了大量的药理及临床研究工作，申请注册14项有关专利[12]。近几年来，Ikeya等又从五味子果实中分出多种戈米辛类五味子木脂素成分，其中有戈米辛R(gomisinR)、戈米辛S和戈米辛T，并利用化学方法和光谱分析确定了这些成分的化学结构。由此日本在五味子木脂素成分的分离、鉴定和寻找新的植物药成分的研究工作上取得了引人注目的进展[13]。虽然目前国内研究五味子木脂素成分的成绩取得了很大的进展，但是对于复杂的五味子木脂素种类和尚未证明及未发现的功能，我们的认识还是很有限的，特别在药理、毒理及构效关系上研究深度远远还不如欧美及日本等科技发达国家，尚存在许多有待探明的作用机制需要我们投入大量的人力物力去研究。4参考文献：[1]程康华.CO2超临界液体萃取五味子中五味子醇甲的研究[J],南京中医药大学学报,2001,17(6):363.[2]吴安心.(±)一Deoxyschizandrin的新台成方法科学通报,1997,42(6):617.[3]常俊标.中药五味子中活性成分的化学研究[J].五味子醇甲的全合成药学学报,1998,33(6):424.[4]WangLH,ChenYH,SongYT,ChenY,LiuXS.“GC-MSofvolatilecomponentsofSchisandrachin-ensisobtainedbysupercriticalfluidandconventionalextraction”.Journalofseparationscience,2008,31:3238-3245.[5]曹丽萍.五味子木脂素提取方法研究.辽宁中医药大学学报[J],2011,13(1):185-187.[6]王明中,唐桂荣.五味子的采集与加工[J].中国林副特产,1994,31(4):30.[7]黄晓东,任旷.五味子木脂素成分结构及类型研究进展[J].吉林医药学报,2009，7(12):16.[8]李晓宁,崔卉,宋又群,等.辽五味子果实挥发油成分的鉴定[J].药学学报.2001,36(3):215-219.[9]李时珍(明).本草纲目[M].北京人民卫生出版社,1975,1238-1241.[10]刘玉壶.五味子科的分类系统与演化趋势I五味子目的建立及南五味子属的分类统[J].中山大学学报(自然科学版),2002,41(5):77-82.[11]刘玉壶.五味子科的分类系统与演化趋势五味子属的分类系统及五味子科的化趋势[J].中大学学报(自然科学版)2002,41(6):62-72.[12]ChenDF,ZhangSX,ChenK,etal.Twonewlignans,interiotherinsAandB,asanti-HIVpriciplesfromKadsurainterir[J].JNatProd,1996,59(11):1066-1068.[13]XiaoWL,PuJX,WangRR,etal.TrierpenoidsfromSchisandrarubriflora[J].JNatProd,2007,70(6):1056-1059.5主要研究内容：1．通过对回流法、微波辅助法提取工艺的系统研究，建立中药北五味子主要活性成分木脂素的高效提取方法。2．研究上述提取方法中溶剂体积、乙醇浓度、提取时间、药材粒径等因素对北五味子木脂素提取率的影响。3.通过响应面实验设计对上述提取方法的工艺进行优化。4．通过高效液相色谱法，准确分析国内十个不同产地的北五味子木脂素含量。主要研究方法（实验设计）及主要技术路线：本课题主要研究北五味子木脂素最优工艺提取方法。五味子木脂素微溶于水，溶于乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮等有机溶剂。五味子木脂素传统提取方法是加热回流提取，由于提取时间长，消耗能源大，而且提取温度高，会对北五味子的有效成分有所破坏。而微波提取法，依靠高频电磁波穿透萃取和过滤技术，在一定的溶剂中能快速提取药物有效成分，微波提取五味子中木脂素，消耗时间极短，常温常压进行，且提取率得到了极大地提高。因此本实验将利用微波提取法，以乙醇溶液作为提取溶剂。通过对单因素(微波提取功率、微波提取时间、五味子粒径、乙醇浓度、溶剂的用量)的考察来进行提取五味子中的木脂素，提取结束，混合物抽滤，滤液添加到原提取溶剂中，定容至100ml容量瓶中，通过0.45μm尼龙微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，进样到高效液相色谱检测，通过标准曲线分析计算，得出每种木脂素的含量，在单因素实验的基础上，通过响应面法进行工艺优化，确定影响木脂素提取率的乙醇浓度、溶剂用量、提取时间、提取功率，五味子粒径等因素的最佳工艺参数。6研究进度及具体时间安排：2013.03—2013.06第1-2周进行文献整理工作第3周开题第4-14周进行实验工作第15周试验数据整理工作第16周毕业论文的撰写和毕业论文答辩预期结果：1.确定拟定单因素对微波法辅助萃取五味子木脂素影响2.响应面试验优化确定微波辅助萃取木脂素最佳工艺条件目前工作进展情况（文献及预实验情况）：1、完成实验所需文献检索工作2、初步确定提取工艺实验方案3、实验所需药品准备完毕7完成课题的具体条件协助导师指导的人员配备（姓名、单位、职称、专业等）：程振玉东北师范大学研究生有机合成主要仪器设备情况（产地、型号等）：微波催化合成/萃取仪北京祥鹄科技发展有限公司XH-100A旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂RE-52A循环水式真空泵河南省巩义市英峪仪器一厂SHZ-D真空干燥箱上海一恒科学仪器有限公司DZF-6020微量植物粉碎机上海申光仪器仪表有限公司FZ102高效液相色谱仪大连——依利特R230实验药品、化学试剂等来源情况（名称、产地、批号等）：北五味子购买于吉林通化无水乙醇分析纯乙腈色谱纯协作单位及协作内容落实情况：无其他（经费来源等）：无8课题设计评审结果（开题报告小组成员填写）题目：北五味子木脂素不同提取工艺与分析方法研究学生姓名于佳专业制药工程班级1002班指导教师杨英杰职称教授出生年月1955.8评分依据评分标准得分实用性对教学或科研有何指导意义或应用价值重大8.1-10较好6.1-8.0一定4.1-6.0一些2.1-4.0无2.0以下科学性设计（论文）构思严密，方法可靠8.1-10设计（论文）构思较严密，方法可靠6.1-8.0设计（论文）构思有不严密之处，方法基本可信4.1-6.0设计（论文）构思不够严密，方法无明显错误2.1-4.0设计（论文）构思不严密，方法有错误2.0以下先进性国外未见报导8.1-10国内未见报导6.1-8.0仿造或重复他人工作，有一定改进4.1-6.0仿造或重复他人工作，基本上无改进，但对解决某一方面技术问题，有需要2.1-4.0仿造或重复他人工作，无改进，也无需要2.0以下可行性研究工作已有相当基础，人员、设备、实验基地条件具备8.1-10研究工作已有相当基础，人员、设备、实验基地条件基本具备6.1-8.0研究工作已有相当基础，人员、设备、实验基地条件有些不足，可以解决4.1-6.0研究工作基础差，人员、设备、实