五味子油抗氧化活性成分的提取与分离

长春中医药大学毕业论文(设计)开题报告书课题名称：五味子油抗氧化活性成分的提取与分离学生姓名：伍良兰年级专业：12级生物制药班级学号：1202080129指导教师：李娜指导教师职称：副教授实习单位：长春中医药大学说明实习同学到实习单位后，在导师指导下，做好开题的各项准备工作，查阅文献、设计方案。三周内完成开题报告，并将打印稿及电子版交到院系办公室。另附文献综述一篇，要求文献综述在1500字以上，参考文献不少于15篇，其中外文文献应在2篇以上，并将其中一篇或部分内容（不少于500字）译成汉语。一、毕业论文（设计）题目来源（科研、生产、教学、其他）：科研二、毕业论文（设计）研究的目的、意义、与国内外进展情况:1.目的对五味子油的提取工艺加以优化，为五味子的开发利用提供理论依据与技术支持。2.意义（1）使中药五味子得到良好的发展,对五味子的提取工艺和质量标准进行规范化。（2）建立有效的五味子甲素、五味子乙素提取工艺，并在此基础上建立快捷、准确的分析方法，此法对于控制五味子的质量，制定和完善五味子的质量标准具有现实意义。（3）从五味子有效成分的提取分离、药理研究到新药开发，必将对五味子的进一步开发利用开辟新的方向。3.国内外进展情况五味子药材现今在市场上十分受欢迎，野生资源破坏较为严重，由于五味子分布的地域不同，采收期也有少许差异，这样就造成五味子药材的品质具有一定的差异性；另外，五味子药材中有效成分五味子甲素、五味子乙素等常与大量树脂状物共存，在一般制备过程中不易被提取出来。给工业生产造成很大困难，同时也浪费了大量药材。二、主要研究内容和技术路线：1.研究内容采用溶剂提取法对五味子相关组分进行提取分离，得到五味子多种有效成分，在此基础上对五味子木脂素进行最佳工艺筛选2.技术路线（1）五味子药材粉碎过筛，得五味子粉碎物；（2）加入石油醚，水浴，回流，得药液；（3）过滤，得液体和药渣，液体回收石油醚，并减压凝缩得脂肪油；药渣60℃干燥，得干燥的药渣；（4）在干燥的药渣中加入乙醇回流提取，并过滤，得药液和药渣，药液中乙醇回收并浓缩，得木脂素。（5）药渣加蒸馏水煎煮提取，过滤取药液醇沉后离心取固体，固体用无水乙醇丙酮和乙醚洗，得粗多糖。四、研究（实验）条件与可行性分析：多次参与大学生创业训练计划等课题，积累了丰富的实验经验与实验技能，培养出了良好的科研态度，并且都出色的完成了这些项目。总之，课题负责人有能力完成该课题。（1）有符合研究条件的实验室，配备的实验设施能够达到研究要求。（2）实验药材产量多，方便获取。（3）课题负责人本科期间学习了生物学以及化学相关理论，在知识结构上完全可以满足选题的需要。（4）指导老师具有丰富的指导学生的经验。指导老师的实验室承担着国家自然科学基金等项目，实验室从实验条件上完全可以满足该项目的要求。因此，目前的现状分析看，课题会有好的预期。五、特色与创新：科学性：本研究设计的实验方案可行、方法合理,实验室仪器较为先进，所得数据真实可靠，实验结果具有很好的实际意义。先进性及创新点：为五味子的进一步开发利用提供了依据，更为工业生产对五味子的应用提供了参考条件，减少了五味子工业化生产的损失，降低了工业化生产的成本及原料的消耗。六、研究进度与时间安排：2016年1月-2016年1月20日：资料收集阶段。通过查找国内外近几年的有关五味子油抗氧化活性成分研究的论文和书籍，熟悉、了解五味子，做好相关的总结。2016年1月20日-2016年2月30日：预实验阶段。实验材料的购置、处理，记录各种实验材料的来源，处理方法。设计可行的实验方案，进行预实验操作。2016年3月-2016年5月：正式实验阶段。根据修改后的正式实验设计，完成五味子提取分离成分，记录数据以及相关指标的测定工作。2016年5月：成果总结阶段。在老师的指导下，学生对实验结果进行分析汇总，得出结论，撰写论文。七、指导教师意见：指导教师签字：年月日长春中医药大学本科生毕业论文（设计）开题计划任务书姓名伍良兰年级、专业、班级2012级生物制药学号1202080129实习地点：长春中医药大学指导教师：李娜课题题目：五味子油抗氧化活性成分的提取与分离开题计划指导老师签字：学生签字：年月日五味子有效成分的分离与提取方法的研究进展摘要五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis（Turcz.）Baill.或华中五味子SchisandrasphenantheraRehd.etWils.的干燥成熟果实。前者习称“北五味子”，后者习称“南五味子”。五味子酸、甘、性温，有益气生津、收敛固涩、补肾宁心之功效。近年来，五味子在临床应用上更加广泛，随着对五味子化学和药理的深入研究，对认识五味子及其成分多方面的药理作用和临床应用提供了理论基础。从五味子有效成分的提取分离、药理研究到新药开发，必将对五味子的进一步开发利用开辟新的方向，现将五味子油的抗氧化成分的提取与分离进展综述如下。关键词五味子；有效成分；提取；分离；方法1.概述五味子在全世界约有50种,主要分布在东亚地区。在我国五味子属植物在我国分布广泛，长期以来,人们根据产地不同,习愦地把产于东北三省及内蒙古的称北五味子(又称辽五味子);产于南方的称南五味子;产于西北地区的称西五味子。北五味子国内外久负盛名,以其果实肉厚、粒大、有油性、光泽好、药用成分高、疗效显著而著称,优于西五味子和南五味子,颇受国内外众商和药厂青睐。主要含有木脂素类、多糖类、挥发油类和其他类化合物。近年来研究证明其活性成分具有抗肿瘤、抗病毒等生物活性。五味子除药用外，还可以作为调味剂和食品添加剂用于炖鱼炖肉、熬汤、熬粥、泡茶、加工酸奶等果汁饮料［1－3］。现代药理研究表明，多糖、挥发油、木脂素是五味子的主要活性成分。[4]目前为止，五味子共分离鉴定出200余个化合物，其中含量较高、研究较多、较深入且应用较广泛的主要成分为木脂素，约150多种，其次为多糖和挥发油。现将五味子有效成分的研究进展介绍如下。2.主要化学成分2.1木脂素类五味子含多种木脂素成分，是五味子的主要有效成分之一。含量为2%-8%[5]。从1961年苏联研究者Kochetkov等[6]第一次从五味子果实中分离出了五味子醇、γ-五味子素、去氧五味子素、伪-γ-五味子素、五味子素等五种化合物开始，到目前为止，国门外研究人员共分离出150余种木脂素类成分[7]。这些分离出的木脂素成分按分子结构特点进行分类，可将五味子木脂素成分为5大类：第一类，联苯环辛二烯类；第二类，螺苯骈呋喃型联苯环辛二烯类；第三类，4-芳基四氢萘类；第四类，2,3-二甲基-1,4-二芳基丁烷类；第五类，2,5-二芳基四氢呋喃类。2.2多糖类目前国内外对五味子多糖研究多集中在粗多糖的提取及定量测定方面[8]，而对其单一多糖组分纯化以及鉴定方面的研究还很少。五味子多糖的活性与木脂素的活性类似，且对糖尿病有显著的治疗效果。2.3挥发油类五味子中含有5%--6%的挥发油，近年研究认为,五味子挥发油主要成分为萜类化合物[9]。包含单萜类、含氧单萜类、倍半萜类、含氧倍半萜类，还有少量醇、酸等含氧化合物。五味子挥发油有镇咳的功效，间接调节中枢神经系统[10],还有较强的抗纤溶酶原激活物抑制剂的活性[11]。2.4其他类近年来，众多研究者在优化五味子提取工艺的同时,还分离出其它成分。五味子中含有机酸9%左右，主要为枸橼酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、维生素C等。此外，林伟卓等[12]研究表明，五味子干果中全氮量为1.37%，总氨基酸量为9.231%。在分析的16种氨基酸中，人体必需氨基酸有6种，总量为3.135%。3.五味子化学成分的提取分离方法进展3.1木脂素类的提取分离方法进展1961年苏联研究者Kochetkov等[6]第一次从五味子果实中分离出了五味子醇、γ-五味子素、去氧五味子素、伪-γ-五味子素、五味子素等五种化合物。五味子醇甲、五味子酯甲等木脂素类成分在传统提取方法中主要采用冷浸法、回流法和渗漉法等，这些方法提取时间长、活性成分提取率低。我国学者分离五味子木脂素始于20世纪70年代,王慕邹[13]采用甲醇提取,高效液相层析法从北五味子中分得五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙7种活性成分。宋万志等[14]从四川和云南产的红花五味子中分得8个木脂素成分,即五味子丙素、红花五味子酯、五味子甲素、红花五味子素、五味子酚酯、五味子酚乙、五味子酚和gomisino。3.2多糖类提取分离方法进展薛梅等[15]于2003年首次从五味子中提取多糖,并测定其含量为11.98%。张兰杰等[16]在恒温中将北五味子水提取，经过滤液浓缩、醇析、Savage法脱蛋白、脱脂、脱色、DATE纤维素柱洗脱等步骤，分离出两种多糖组分，质量分数分别为0.387%和0.061%。孟宪军等[17]应用水提醇沉以及多种方法除蛋白，从五味子果实中获得一种粗多糖SCP-BII。3.3挥发油类提取分离方法进展周英等[18]报道,到2003年为止,从五味子属植物中分离鉴定了200个成分,其中包括34个三萜类成分。刘长姣等[19]采用水蒸气蒸馏法提取五味子种子挥发油，得率为2.34%，采用GC/MS联用法鉴定了52种化合物，含量最高的三种化合物依次为衣兰烯、β-雪松烯和双-表-α-雪松烯，鉴定的成分主要属于倍半萜类和单萜类化合物。李晓宁等[20]采用GC-MS法从北五味子挥发油中分离鉴定了49个化合物,其中倍半萜类约占挥发油总量的60%。3.4其他类提取分离方法进展刘嘉森等[21]从湖北利川产五味子中分离得到5个化合物:表安五酸、2,3-二羟基丙基十八酸酯、五味子酚、Schisandronicacidiso-schisandrolicacid和B-谷甾醇,其中表安五酸为首次从天然界分离得到[27]。4.总结由于五味子品种繁多、分布广泛，所以出现混用、滥用等不良现象，给五味子的开发利用带来很大的困难。且现在中药五味子已被制成多种剂型，而由于五味子分布的地域不同，各地的采收期也略有差异，这样就造成五味子药材品质也不能保证，而且五味子药材中有效成分五常与大量树脂状物共存，在一般制备过程中不易被提取出来。因此，建立有效的五味子有效成分的提取与分离方法，对于控制五味子的质量，制定和完善五味子的质量标准具有现实意义。［1］YangFJ，MaCH，YangL，etal．Enrichmentandpurificationofdeoxyschizandrinandγ－schizandrinfromtheextractofSchisandrachinensisfruitbymacroporousresins［J］．Molecules，2012，17(3):3510－3523．［2］MaCH，LiuTT，YangL，etal．PreparationofhighpuritybiphenylcyclooctenelignansfromSchisandraextractbyionexchangeresincat-alytictransformationcombinedwithmacroporousresinseparation［J］．JournalofChromatographyB，2011，879(30):3444－3451．［3］MaCH，LiuTT，YangL，etal．Studyonionicliquid－basedultra-sonic－assistedextractionofbiphenylcyclooctenelignansfromthefruitofSchisandrachinensisBaill［J］．AnalyticaChimicaActa，2011，689(1):110－116．[4]程振玉，杨英杰，刘治刚，等．五味子主要有效成分的综合提取方法［J］．江苏农业科学，2014，42(6):273－276．[5]王佳丽,杨洪涛.五味子主要化学成分的药理研究.河南中医,2014.2,34(2):357—358.[6]高建平.五味