交叉配血知识讲座1

12020/1/8交叉配血知识讲座22020/1/8标本的采集及要求一血型二不规则抗体的筛选三交叉配血四32020/1/8一标本的采集及要求1.标本要新鲜:前三个月内病人输过血或已经妊娠,则配血试验使用的标本不得在这次输血的48小时前抽取,避免因回忆反应产生的抗体漏检。新近的输血或妊娠可以引起意外抗体的迅速出现,如果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是输血前48小时内抽取的。血量约为5ml。2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治疗前抽取病人血液标本备用,以防止红细胞缗钱状凝集对试验结果的干扰。42020/1/8标本的采集及要求3.在24小时内输了12单位血后,可以输注未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因为原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。4.标本必须有正确的标签,要防止血样的稀释和溶血的产生,溶血的标本一般不能使用,因为血清中的游离血红蛋白可以掩盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血。标本标签上的内容与血液申请单上的内容要一致。52020/1/8标本的采集及要求5.血清或血浆均可用于输血前检查,但使用血浆标本时,应注意排除纤维蛋白原的干扰,因为血浆有时有少许纤维蛋白凝块,容易导致凝集结果的判断。6.输血后所有的标本均应妥善保存于2-8℃冰箱中,至少一周。62020/1/8二、血型1.红细胞悬液的配制用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一次,其目的是通过洗涤可以去除红细胞表面的物质,如少量的血浆蛋白、已溶解红细胞的基质,他们有竞争抗体的作用,还有抗凝剂,他们有抗补体的作用。72020/1/82.红细胞悬液的常用浓度2%的红细胞悬液一般用于抗体效价的测定5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验10%的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和力试验82020/1/83.离心力的标准不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但没有统一离心力。离心转速换算公式：RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液体去冲细胞扣，如果为阴性，则细胞成细沙状沿试管壁流下，如果为阳性，细胞成块状脱落细胞壁或成齿状沿试管壁留下。切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，弱凝集则会误判为阴性。4.离心后结果观察注意事项92020/1/85.加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加；抗体和抗原的比例一般为2：1。6.必须要做正反定型实验才能确定血型。7.正定型试验如果有条件可加做抗AB,可用来检测弱A和弱B,反定型一定要加做O细胞,可用来发现不规则抗体。102020/1/88.盐水试验多采用立即离心法,正确的操作是红细胞悬液加到血清后立即离心并观察结果。反应时间过长而延误立即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。①如果在室温放置2分钟后离心,可能使3+-4+的凝集减弱为0+-1+,并伴有溶血现象。②如果在室温放置5分钟后离心,原有的凝集可能消失,并有溶血。112020/1/8③有的标本在延迟离心后,本来应有的凝集会变为既不凝集也不溶血,因而难以发现ABO血型的不配合。这多数发生在O型人的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应的试验中,发生率为2%-3%。发生上述的原因是反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗原作用,补体C1在有Ca2+存在的条件下,固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶血。解决的方法：A:血清与红细胞混合后立即离心。B:用血浆或灭活的血清做试验C:用EDTA盐水配制红细胞悬液,D:稀释血清122020/1/89.正反定型不一致的原因一般正反定型结果不一致有技术原因也有受检红细胞或血清本身的的问题。■（1）技术和管理错误---ABO定型中产生异常结果主要原因标本和试剂搞错，造成假阳性或假阴性的结果。器材不洁产生假阳性结果。试剂污染或不足，产生假阳性或假阴性的结果。离心过度或不足，产生假阳性或假阴性的结果。阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。漏加试剂，产生假阴性结果。结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。132020/1/8正反定型不一致的原因■（2）标准血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。■（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。■（4）血清异常华通胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定性结果。■（5）红细胞致敏在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。142020/1/8■（6）近期曾异型输血，使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。■（7）疾病因素导致抗原减弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。■（8）红细胞多凝集现象红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。■（9）获得性类B由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”活性。152020/1/8正反定型不一致的原因■（10）近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型困难。■（11）异常血浆蛋白病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例异常和高浓度的纤维蛋白原等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象。■（12）不规则抗体的产生受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，如自身抗I，与试剂A、B细胞上的相应抗原起反应。162020/1/8■（13）低丙种球蛋白血症可能会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。■（14）药物等因素药物、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集。■（15）年龄因素如新生儿、老年人等。172020/1/8正反定型不一致的处理方法如发现ABO正反定性不一致，首先要重做试验一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可解决明显的问题，对一些疑难问题需进一步检查。可初步采取以下措施：（1）另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错标本造成的不符合。（2）将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B做实验，可以得到其他有用的信息。有条件的可加做抗H试验。182020/1/8（3）对受检者作直接抗人球蛋白试验，看红细胞有没有被致敏（4）如疑为A抗原或B抗原减弱，可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收放散试验（5）如试验结果红细胞成缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现象消失。（6）做反定型试验时需要加做O细胞192020/1/8常用的记录符号及所示的凝集强度4+:一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞3+:数个大凝集块,背景透明,无游离细胞2+:许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离细胞1+:很小的凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需要用显微镜观察W+:微小凝集块,肉眼很难看清,背景混浊,需要用显微镜观察O:无凝集,无溶血,全部是游离细胞,要用显微镜观察PH:部分溶血H:完全溶血WF:混合外观202020/1/8疑难血型病例1.白血病血型变异2.血浆蛋白紊乱3.类B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亚型212020/1/8三、不规则抗体的筛选1.所谓不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体，其多为ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。进行不规则抗体的筛选的目的是发现有临床意义的不规则抗体，以确保安全用血，有效用血，有条件或时间允许的情况下最好献血者血清也作不规则抗体的筛选，如有发现不规则抗体，鉴定此抗体，找出能与其相配合的血液，不可随便用于输血。因为多为ＩｇＧ抗体，在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、ｐｏｌｙ等)才能使致敏红细胞出现凝集反应，这些方法的选择可按抗体的血清学行为和试验的具体条件来确定。临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。222020/1/82.筛选细胞通常是由2-3个单人份的O型红细胞组成一套筛选细胞试剂，包括以下常见的抗原：Rh系统、MNSs系统、P系统、Lewis系统、Duffy系统等。3.抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的不规则抗体。一些抗低频率抗原的抗体则可能漏检。232020/1/8不规则抗体筛选的操作步骤病人/被检血清+抗体筛选细胞→盐水介质非盐水介质（聚凝胺、抗球蛋白、酶）1、取试管四支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和自身对照并向各管加病人血清（血浆）100ul，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各50ul于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中和5%自身细胞于自身对照管中。2、各加LIM0.6ML，混合均匀后，静置15秒,再各加Polybrene溶液100ul(约2滴)，并混合均匀。3、以1300G离心，离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ML液体。4、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。5、最后加入Resuspending100ul(约2滴)，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。242020/1/8①抗筛阴性，交叉配血相容②抗筛阴性，盐水直接离心交叉配血不相容原因有：献血者红细胞是ABO血型不相容存在在室温反应的同种异体抗体献血者的红细胞是多凝集红细胞4.抗体筛选和交叉配血试验结果分析252020/1/8③抗筛阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容献血者红细胞DAT试验为阳性受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性抗体与低频率抗原反应④抗筛阳性，交叉配血相容自身抗-H抗-Lebh抗筛阳性，但献血者红细胞可能正好不含与相应的抗原，因此配血可以相合。262020/1/8⑤抗筛阳性，交叉配血不相容同种异体抗体存在，自身对照成阴性同种异体抗体存在，自身对照成阳性冷反应自身抗体能引起难以确定的阳性温反应自身抗体能引起难以确定的阳性“钱串状”红细胞形成引起非真实的阳性结果272020/1/8输血前试验“三保险”:血型、抗筛、交叉配血相合%随机64ABO99.4Rh99.8抗筛99.94交叉配血99.95自身输血100282020/1/8四、交叉配血交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有可测到的不相配合的抗原，抗体成分，试验应在37℃下进行。试验方法除作盐水介质外，还有抗球蛋白试验法、酶法、聚凝胺法或其改良法。在配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集献血者的血液才能给予病人输注。292020/1/81.盐水法盐水介质中红细胞上的抗原决定族与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，交叉连接形成肉眼可见的凝集块。盐水介质凝集试验用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以及用盐水抗体鉴定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系统的抗原。在盐水介质中，凝集是IgM抗体的行为。当ＩｇＧ抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应2.低离子聚凝胺试验Poly是一种带高价阳离子的多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆行的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺，则凝集不可逆。302020/1/83.酶处理细胞的凝集试验红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电菏，是红细胞互相排斥的原因。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电菏。Zata电势减少，红细胞的间距缩短，ＩｇＧ抗体分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。酶法能显著增强Rh和Kidd系统的抗原抗体反应，但蛋白酶能破坏M、N、S、s、Fya和Fyb抗原，酶法不适应这些抗原的检