中草药烟用添加剂的止咳化痰的研究

1中草药烟用添加剂止咳、祛痰作用的研究刘绍华，李志华，胡志忠，白家峰，邹克兴，黄泰松广西中烟工业有限责任公司技术中心，广西南宁市北湖南路28号530001编号“201106032摘要目的：研究中草药烟用添加剂的止咳、祛痰作用。方法：采用小白鼠氨水引咳法评价中草药烟用添加剂的止咳作用。采用小鼠气管段酚红法评价其祛痰作用。结果：中草药烟用添加剂30g/kg组小鼠的R值大于150%；中草药烟用添加剂30g/kg，15g/kg，7.5g/kg均可明显增加小鼠酚红排泌量，（与对照组比较p0.05，p0.01）。结论：中草药烟用添加剂能够减轻氨水引咳法引起的小鼠咳嗽，增加小鼠气管酚红排出量，显示其具有显著的镇咳和祛痰作用。关键词：罗汉果；添加剂；卷烟；止咳；祛痰StudiesontheAntitussiveandExpectorantEffectsOftheChineseHerbalMedicalTobaccoAdditiveLIUShao-hua,LIZhi-hua,HUZhi-zhong,BAIJia-feng,ZOUKe-xing，HUANGTai-song（TechnicalcenterofChinaTobaccoGuangxiIndustrialCo.Ltd.,No.28TheSouthofBeihuRd,Nanning530001,Guangxi,China）Abstract:ObjectiveToobservetheantitussiveandexpectoranteffectsoftheChineseherbalmedicaltobaccoadditive.MethodsThemodelofcoughinducedbyammonialiquorsprayinmicewasusedtoobservetheantitussiveeffect;themodelofphenolredinthetracheaexcretioninmicewasusedtoobservetheexpectoranteffect.ResultsTheRvalueofmiceinChineseherbalmedicaltobaccoadditive30g/kggroupisover150%;Chineseherbalmedicaltobaccoadditive30g/kg,15g/kg,7.5g/kgcouldremarkablyincreasethephenolredoutputoftracheainmice(p0.05,P0.01vs作者简介：刘绍华(1962-)，博士后，广西中烟工业公司技术中心高级工程师，主要从事天然产物在卷烟中应用的研究。E-mail:[e-mail]电话：[phone]control).ConclusionTheChineseherbalmedicaltobaccoadditivecouldinhibitthecoughinducedbyammoniainmiceandincreasephenolredoutputoftracheainmice,whichshowssignificantantitussiveandexpectoranteffects.Keywords:Siraitiagrosvenori;Additive;Cigarette;Antitussive；Expectorant本研究的中草药烟用添加剂系以罗汉果为主要中药原料的提取物。罗汉果[Siraitiagrosvenori(Swingle)C.JeffreyexluetZ.Y.Zhang]，是广西桂北地区的著名特产，性凉味甘，无毒，具有润肺、滑肠、通便、保肝等功效，主要用于祛痰剂，在治疗肺炎、百日咳、慢性气管炎、咽喉炎、胃肠疾病、便秘等疗效显著，还有增强免疫的作用[1]。罗汉果苷(mogrosides)是罗汉果的甜味成分，主要包括罗汉果苷III～VI(mogroside-III～VI)、11-氧代-罗汉果苷V(11-oxo-mogrosides)和赛门苷I(siamenoside-I)。其中，罗汉果苷V是主要活性成分，其甜度约为蔗糖的350倍[2-3]。98%罗汉果苷有止咳、袪痰等作用[4]。罗汉果苷V还具有抑制肿瘤的作用，对羟基自由基和超氧阴离子自由基有较强的清除能力[5]。以罗汉果为主要原料制成的烟用添加剂具有增加卷烟香气量[6]、提升香韵、衬托自然烟香，降低烟气干燥感[7]、增强烟气生津感、提高卷烟舒适度的功效[8]。作者采用高效液相色谱/电喷雾/质谱(HPLC/ESI/MS)法测定了卷烟烟丝及其主流烟气中的罗汉果苷V的含量[9]。现将中草药烟用添加剂进行止咳、化痰的药理研究，为添加剂卷烟中减害提供科了科学的依据。1材料1.1动物昆明种小白鼠，体重28±2g，由广西中医学院实验动物中心提供，动物合格证号：桂医动字第11004号，使用许可证：SYXK桂2003-0001。1.2药品及试剂（1）中草药烟用添加剂，批号：20080730，由广西中烟工业限责任有公司提供，实验时根据剂量需要配成合理的浓度；（2）远志药材，购自广西药材站，远志水煎剂，按常规方法煎煮，由广西3中医学院药理实验室制备；（3）磷酸可待因片，国药集团工业有限公司生产，批号：080401；（4）25～28%氨水，广东廉江巿爱廉化学试剂有限公司生产，批号：060420-2。1.3仪器EL204型电子天平：梅特勒－托利多仪器有限公司（上海）；80-2型离心机，上海手术器械厂生产；723A型可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产；空气压力机泵，金城电子仪器厂（沈阳）；DX—2电子血压计，沈阳晶体管二厂。2实验方法与结果2.1止咳实验—添加剂对浓氨水喷雾引咳小白鼠的镇咳作用[10,11`12]小白鼠氨水引咳法。取体重（20±2g）昆明种小白鼠75只，雌（♂）、雄（♀）各半，按体重随机分成5组，每组15只。即空白对照组给予等容积的纯净水；阳性组(磷酸可待因片45mg/kg)；添加剂高、中、低剂量组（30g、15g、7.5g生药/kg）。按20ml/kg体重灌胃给药(ig)，1次/天，连续给药3天。于末次药后1h，将小白鼠置玻璃钟罩内，打开电源开关，开动真空泵，压力表调节至180mmHg(23.99Pka)，使小白鼠接受恒压氨水喷雾刺激至预定的时间，刺激停止后，立即取出小白鼠，观察1分钟内出现3次以上典型咳嗽动作（嘴张大或有咳嗽声）者，为有“咳嗽”，否则算“无咳嗽”。按序贯法（上下法）求半数有效量的原理，改变每只小白鼠的喷雾时间（相邻两个时间的对数组距固定在0.1之间），凡出现咳嗽的以“+”表示，不出现咳嗽的以“-”表示，结果填入表1。按公式计算小白鼠半数引咳时间（EDT50）和R值，R值＞130%为药物有止咳作用，R值＞150%则表明有显著止咳作用。结果见表1、表2。计算公式：150logCEDTn4n为动物数，c为rx值的总和，r为每剂量的动物数，x为剂量（即喷雾时间）的对数。R=给药组EDT50/对照组EDT50×100%表1添加剂对小白鼠止咳作用的影响(Table1TheeffectofChineseherbalmedicaltobaccoadditiveoncoughinducedbyammoniasolutionofmice.)组别(group)时间（time）小白鼠咳嗽(thecoughinginducedbyammoniasolutionofmice)rrx秒(s)Log(x)123456789101112131415空白组(mode)31.61.5+11.525.11.4+--34.220.01.3+++-45.215.91.2-++--5612.61.1--22.2C=19.1可待因(codeine)50.11.7+++35.139.81.6+--+-5831.61.5+---4625.11.4--22.820.01.3-11.3C=23.1添加剂(H)(additive)(H)50.101.70+11.739.81.6++-34.831.61.5+---4625.11.4+--35.2201.3+--33.915.91.2-11.2C=20.1添加剂(M)(additive)(M)50.11.7+11.739.81.6-++34.831.61.5--+34.525.11.4-+22.8201.3+--33.915.91.2+-22.4C=20.1添加剂(L)25.11.4201.3++++45.25(additive)(L)15.91.2++--++-78.412.61.1----44.4C=18.0注：“+”表示有咳嗽；“-”表示无咳嗽；Note:“+”cough;“-”nocough;对照组EDT50=log-1c/n=log-1。19.1/15=18.8可待因EDT50=log-1c/n=log-1。23.1/15=34.7R=34.7/18.8×100%=185%添加剂(H)组EDT50=log-1c/n=log-1。22.8/15=33.1R=33.1/18.8×100%=176%添加剂(M)组EDT50=log-1c/n=log-1。20.1/15=21.9R=21.9/18.8×100%=116%添加剂(L)组EDT50=log-1c/n=log-1。18.0/15=15.8R=15.8/18.8×100%=84.3%表2添加剂对小白鼠氨水喷雾引咳的作用（sx，n=15）Table2TheeffectofChineseherbalmedicaltobaccoadditiveoncoughinducedbyammoniasolutionofmice.（sx，n=15）)组别(group)剂量（g/kg）(Dose(g/kg))EDT50（s）R值（%）(RValue(%))空白对照(mode)—18.8—可待因(codeine)0.04534.7185添加剂(H)((additive)(H))30.033.1176添加剂(M)((additive)(M))15.021.9116添加剂(L)((additive)(L))7.515.884.3表2结果显示，添加剂(H)(30g/kg)的R值大于150%表明添加剂具有显著的止咳作用；添加剂(M)、添加剂(L)(15g/kg、7.5g/kg)的R值小于130%表明无明显的止咳作用。结果表明，添加剂(H)能降低呼吸道对刺激物的敏感性而发挥止咳作用。2.2祛痰作用—小白鼠酚红排泌法[11,12,13]取体重(25±2g)小白鼠60只，雌(♀)、雄(♂)各半，随机分成5组，每组12只，即空白对照组给予等容积的纯净水；阳性组(远志30g生药/kg)；添加剂(H、M、L)剂量组（30生药/kg、15生药/kg、7.5g生药/kg）。每天1次，连续给药3天，于末次药前禁食不禁水12h，给药后45min由腹腔注射0.5%酚红溶液0.5ml/6每只，15min用湿布闷死，仰位固定，解剖分离气管，气管插管从甲状软骨处插入7号针头，深度0.5cm，用备好的线结扎固定。用1ml注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5ml，注入气管内，反复连续推抽3次，灌洗呼吸道，以上操作重复3次，共冲洗9次，合并洗出液约1.2～1.5ml，离心（3000转/min）10min，取上清液，用723A型可见光分光光度计比色（波长546nm），用5%NaHCO3溶液调“0”，通过测定已知酚红溶液不同的浓度（标准曲线），将测得标准曲线结果保存于光光度计中，输入样品直接酚红浓度（μg/ml），结果见表3、表4。表3添加剂对小白鼠酚红排泌量的影响（μg/ml）(Table3TheeffectofChineseherbalmedicaltobaccoadditiveonthesecretionofphenolredinthetracheaexcretionofmice)（μg/ml）组别(grou