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☆考点1：中药有效成分的提取中药之所以能够防病治病，其物质基础在于所含的有效成分。如淀粉、树脂、叶绿素等一般被认为是无效成分或者杂质。从药材中提取活性成分的方法有溶剂法、水蒸气蒸馏法及升华法等。一般用溶剂法提取中药材的有效成分，常用的方法有浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法等。1.浸渍法：是在常温或温热（60～80℃）条件下用适当的溶剂浸渍药材以溶出其中成分的方法。本法适用于有效成分遇热不稳定的或含大量淀粉、树胶、果胶、黏液质中药的提取。2.渗漉法：是不断向粉碎的中药材中添加新鲜浸出溶剂，使其渗过药材，从渗漉筒下端出口流出浸出液的一种方法。3.煎煮法：是在中药材中加入水后加热煮沸，将有效成分提取出来的方法。此法简便，但含挥发性成分或有效成分遇热易分解的中药材不宜用此法。4.回流提取法：是用易挥发的有机溶剂加热回流提取中药成分的方法。但对热不稳定的成分不宜用此法。5.连续回流提取法：弥补了回流提取法中溶剂消耗量大，操作繁杂的不足，实验室常用索氏提取器来完成本法操作。但此法时间较长。6.水蒸气蒸馏法：适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，且难溶或不溶于水的成分的提取。7.固体物质在受热时不经过熔融直接转化为蒸气，蒸气遇冷后又凝结成固体的现象叫做升华。中药中有一些成分具有升华的性质，能利用升华法直接从中药中提取出来。☆☆☆☆考点2：根据物质溶解度差别进行中药有效成分的分离1.利用温度不同引起溶解度的改变以分离物质，如常见的结晶及重结晶等操作。理想的溶剂必须具备下列条件：（1）不与重结晶物质发生化学反应。（2）在较高温度时能够溶解大量的待重结晶物质；而在室温或更低温度时，只能溶解少量的待重结晶物质。（3）对杂质的溶解度或者很大或者很小。（4）溶剂的沸点较低，容易挥发，易与结晶分离除去。（5）无毒或毒性很小，便于操作。一般可以根据结晶的形态和色泽、熔点和熔距及色谱法来判断结晶纯度。2.在溶液中加入另一种溶剂以改变混合溶剂的极性，使一部分物质沉淀析出，从而实现分离。常见的如在药材浓缩水提取液中加入数倍量高浓度乙醇，以沉淀除去多糖、蛋白质等水溶性杂质（水-醇法）；或在浓缩乙醇提取液中加入数倍量水稀释，放置。以沉淀除去树脂、叶绿素等水不溶性杂质（醇-水法）；或在乙醇浓缩液中加入数倍量乙醚（醇-醚法）或丙酮（醇-丙酮法），可使皂苷沉淀析出，而脂溶性的树脂等类杂质则留存在母液中等。3.对酸性、碱性或两性有机化合物来说，常可通过加入酸、碱以调节溶液的pH，改变分子的存在状态（游离型或解离型），从而改变溶解度而实现分离。例如，一些生物碱用酸性水从药材中提出后，加碱调至碱性即可从水中沉淀析出（酸-碱法）。4.酸性或碱性化合物还可通过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶性的盐类等沉淀析出。例如酸性化合物可做成钙盐、钡盐、铅盐等；碱性化合物如生物碱等，则可做成苦味酸盐、苦酮酸盐等有机酸盐或磷钼酸盐、磷钨酸盐、雷氏铵盐等无机酸盐。☆考点3：液-液分配柱色谱1.正相色谱与反相色谱：液-液分配柱色谱用的载体主要有硅胶、硅藻土及纤维素粉等。根据烃基（-R）长度为乙基（-C2H5）还是辛基（-C8H17）或十八烷基（-C18H37），分别命名为RP-2、RP-8及RP-18.三者亲脂性强弱顺序如下：RP-18＞RP-8＞RP-2。2.加压液相柱色谱：按加压强弱可以分为快速色谱、低压液相色谱、中压液相色谱及高压液相色谱等。☆☆☆☆☆考点4：根据物质的吸附性差别进行中药有效成分的分离1.物理吸附基本规律：相似者易于吸附。硅胶、氧化铝因均为极性吸附剂，因此具有以下特点：（1）对极性物质具有较强的亲和能力。故同为溶质，极性强者将被优先吸附。（2）溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质将表现出越强的吸附能力。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的吸附能力即随之减弱。（3）溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，但一旦加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱下来。活性炭因为是非极性吸附剂，对非极性物质具有较强的亲和能力，在水中对溶质表现出较强的吸附能力。2.极性及其强弱判断：极性强弱是支配物理吸附过程的主要因素。所谓极性乃是一种抽象概念，用以表示分子中电荷不对称的程度，并大体上与偶极矩、极化度及介电常数等概念相对应。（1）化合物结构中官能团的极性强弱按下图顺序排列：（2）化合物的极性则由分子中所含官能团的种类、数目及排列方式等综合因素所决定。（3）溶剂的极性可以大体根据介电常数（ε）的大小来判断。常用溶剂的介电常数及其极性排列如下表所示：3.聚酰胺吸附色谱法：聚酰胺吸附属于氢键吸附，极性物质与非极性物质均可选用，但特别适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。（1）聚酰胺的性质及吸附原理：商品聚酰胺均为高分子聚合物质，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿及丙酮等常用有机溶剂，对碱较稳定，对酸尤其是无机酸稳定性较差，可溶于浓盐酸、冰乙酸及甲酸。一般认为吸附强弱则取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序：水→甲醇→丙酮→氢氧化钠水溶液→甲酰胺-二甲基甲酰胺→尿素水溶液（2）聚酰胺色谱的应用：只限于酚类、黄酮类化合物的制备分离。4.大孔吸附树脂的吸附原理：大孔吸附树脂具有选择性吸附和分子筛的性能。它的吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛的性能是由于其本身的多孔性网状结构决定的。☆☆☆☆考点5：性状多数生物碱为结晶状的固体，有一定的熔点，有些为无定形粉末。少数分子较小的生物碱呈液体状态，其分子结构中不含氧原子如烟碱，或氧原子结合为酯键如槟榔碱等。个别液体状态及小分子的固体生物碱具有挥发性，如麻黄碱；极少数生物碱还具有升华性，如咖啡因、川芎嗪等。多数生物碱味苦，少数辛辣或具有其他味道，如甜菜碱具有甜味。绝大多数生物碱为无色或白色，仅少数分子中具有较长共轭体系及助色团的生物碱有颜色，如小檗碱为黄色、药根碱为红色。有的生物碱在可见光下无色，而在紫外光下显荧光，如利舍平。☆考点6：旋光性大多数生物碱的分子结构中含有手性碳原子且结构不对称，因而具有旋光性，且多呈左旋。生物碱的旋光性受溶剂及pH、浓度等的影响。如麻黄碱在水中呈右旋，而在乙醇、氯仿及苯中则呈左旋。有的生物碱的旋光性可因外消旋化而消失，如洋金花中的莨菪碱外消旋后成消旋的莨菪碱（阿托品）。生物碱的生理活性与其旋光性密切相关，一般左旋体的生理活性显著，右旋体的活性弱或无活性。如1-莨菪碱的散瞳作用比d-莨菪碱大100倍，去甲乌药碱仅1-体具强心作用。但也有少数生物碱右旋体的生物活性较左旋体强，如d-古柯碱的局部麻醉作用强于1-古柯碱。☆考点7：碱性1.生物碱碱性强弱的表示方法根据Lewis酸碱电子理论：凡是能给出电子的电子受体为碱；能接受电子的电子受体为酸。碱性强弱可用其碱式离解指数pKb或其共轭酸的酸式离解指数pKa表示。pKa越大，该碱的碱性越强；反之，pKa越小，碱性越弱。根据生物碱的pKa值大小，可将生物碱按碱性强弱分为：①强碱：pKa＞11，如季铵碱、胍类生物碱；②中强碱：pKa8～11，脂胺类、脂杂环类生物碱；③弱碱：pKa3～7，如苯胺类、六元芳氮杂环类；④近中性碱：pKa＜3，如酰胺类、五元芳氮杂环类。2.生物碱碱性强弱与分子结构的关系：生物碱的碱性强弱与其氮原子在分子中的结合状态及其所处的化学环境有关。主要影响因素有氮原子的杂化方式、电性效应、空间效应及分子内氢键形式等。（1）氮原子的杂化方式与碱性的关系：生物碱分子中的氮原子有sp3、sp2和sp三种杂化方式。氮原子的杂化方式与碱性强弱的关系表现为：sp3＞sp2＞sp。（2）电性效应与碱性的关系：生物碱分子结构中的电性效应（包括诱导效应和共轭效应）能影响氮原子上电子云的分布，因而影响生物碱的碱性大小。①诱导效应：生物碱分子中的氮原子上的电子云密度受到氮原子附近供电基（如烷基）和吸电基（如各类含氧基团、双键、苯基）诱导效应的影响。供电子诱导效应使氮原子上电子云密度增加，碱性增强；吸电子诱导效应使氮原子上电子云密度减小，碱性降低。②共轭效应：当生物碱分子中氮原子的孤电子对与π-电子基团共轭时一般使生物碱的碱性减弱。常见的有苯胺和酰胺两种类型。苯胺型：苯胺氮原子上的孤电子对与苯环兀-电子形成p-π共轭体系后，其碱性较环己胺弱得多。酰胺型：酰胺中氮原子上的未共用电子对与羰基形成p-π共轭效应，使其碱性极弱，不易与酸成盐。（3）空间效应与碱性的关系：多数生物碱具复杂的稠环结构，如果分子的立体结构对氮原子产生空间位阻，不利于氮原子接受质子，则生物碱的碱性减弱，反之则碱性增强。例如，东莨菪碱分子结构中氮原子附近较莨菪碱多连一个6，7位环氧基，对氮原子产生显著的空间阻碍，其碱性较莨菪碱弱，山莨菪碱分子中的6-OH对氮原子接受质子也产生立体阻碍，但不及东莨菪碱的氧环影响大，故其碱性介于东莨菪碱与莨菪碱之间。（4）氢键效应与碱性的关系：当生物碱成盐后，N原子附近如有羟基、羰基，并处于有利于形成稳定的分子内氢键时，其共轭酸稳定，碱性强。☆☆☆☆考点8：沉淀反应大多数生物碱在酸水或稀醇中与某些试剂生成难溶于水的复盐或络合物的反应称为生物碱沉淀反应，这些试剂称为生物碱沉淀试剂。1.常用的生物碱沉淀试剂：常用的生物碱沉淀试剂的名称、组成及反应特征见下表：2.生物碱沉淀反应的条件及阳性结果的判断（1）反应条件：生物碱沉淀反应一般在稀酸水溶液中进行。（2）阳性结果判断：对生物碱进行定性鉴别时，应用三种以上沉淀试剂分别进行反应，如果均能发生沉淀反应，可判断为阳性结果。但需注意，极少数生物碱不与一般生物碱沉淀试剂反应，如麻黄碱、咖啡碱，需用其他检识反应鉴别；而有些非生物碱类物质也能与生物碱沉淀试剂产生沉淀反应，如蛋白质、多肽、氨基酸、鞣质等，同时，大多中药的提取液颜色较深，影响颜色的观察。3.生物碱沉淀反应的应用：生物碱沉淀反应主要用于检查中药或中药制剂中生物碱的有无，即生物碱的定性鉴别，可用试管进行定性反应，或作为薄层色谱或纸色谱的显色剂（常用碘化铋钾试剂）。另外在生物碱的提取分离中还可作为追踪、指示终点。个别沉淀试剂可用于分离纯化生物碱，如雷氏铵盐可用于沉淀分离季铵碱。☆☆考点9：总生物碱的提取1.脂溶性生物碱的提取（1）水或酸水提取法：常用0.5%～1%的硫酸或盐酸，采用浸渍法或渗漉法提取，个别含淀粉少者可用煎煮法。（2）醇类溶剂提取法：用醇类溶剂，采用浸渍法、渗漉法、回流提取法和连续回流提取法提取。（3）亲脂性有机溶剂提取法：利用游离生物碱易溶于亲脂性有机溶剂的性质，用氯仿、苯、乙醚以及二氯甲烷等溶剂，采用浸渍、回流或连续回流法提取。由于生物碱大多与植物体内的有机酸结合成盐的状态存在，因此一般需将药材用碱水（石灰乳、碳酸钠溶液或稀氨溶液）湿润，使生物碱游离后提取。若提取液中亲脂性杂质较多，可采用与醇类溶剂提取液相同的处理方法得到总生物碱。2.水溶性生物碱的分离。（1）沉淀法：利用生物碱能与生物碱沉淀试剂生成难溶于水的复合物而从水中析出的原理，以达到与亲水性杂质分离的目的。（2）溶剂法：利用水溶性生物碱能够溶于极性较大而又能与水分层的有机溶剂（如正丁醇、异戊醇或氯仿一甲醇的混合溶剂等）的性质，用这类溶剂与含水溶性生物碱的碱水液反复萃取，使水溶性生物碱与强亲水性的杂质得以分离。☆考点10：薄层色谱1.吸附薄层色谱法（1）吸附剂：常用的吸附剂有硅胶和氧化铝，最常用的是氧化铝。硅胶本身显弱酸性，直接用于分离和检识生物碱时，与碱性强的生物碱可形成盐而使斑点的Rf值很小，或出现拖尾，或形成复斑，影响检识效果。为了避免出现这种情况，在涂铺硅胶薄层板时用稀碱溶液（0.1～0.5N的氢氧化钠溶液）或缓冲液制成碱性硅胶薄板；或者使色谱过程在碱性条件下进行，即在展开剂中加入少量碱性试剂，如二乙胺、稀氨溶液等；或在展开槽中放一盛有稀氨溶液的小杯，用中性展开剂在氨蒸气中进行展开。氧化铝本身显弱碱性，且吸附性能较硅胶强，其不经处理便可用于分离和检识生物碱。（2）展开剂：展开剂系统多以亲脂性溶剂为主，一般以氯仿为基本溶剂，根据色谱结果调整展开剂的极性。一般来说，