世纪本草阿胶地黄口服液改善大鼠营养性贫血的效果评价

世纪本草阿胶地黄口服液改善大鼠营养性贫血的效果评价韩鹏，赵亮，李彬，覃思宇，李超培(广西壮族自治区疾病预防控制中心，南宁530028)[摘要]目的：以缺铁大鼠为模型研究了世纪本草阿胶地黄口服液改善营养性贫血的效果。方法：选择体重60～80gII级雌性断乳Wistar大鼠，给予低铁基础饲料耗空6周后，经尾静脉取血，测定血红蛋白含量，按尾血血红蛋白含量和体重，把动物随机分为低铁对照组和3个实验组。根据该样品的人体日推荐用量，实验组设2.5、5.0、10.0ml／kgBW(分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍)低、中、高3个剂量组；低铁对照组给予相应溶剂。实验期为45d，测定动物营养性贫血相关指标。结果：世纪本草阿胶地黄口服液改善大鼠生长，各剂量实验组的终体重和净增重高于低铁对照组；服用世纪本草阿胶地黄口服液显著升高贫血大鼠的血红蛋白水平；而红细胞内游离原卟啉水平显著降低。结论：世纪本草阿胶地黄口服液有改善营养性贫血的作用。[关键词]阿胶地黄口服液；营养性贫血；乳酸亚铁；大鼠[中图分类号]R96[文献标识码]A[文章编号]1004—8685(2009)08—1765—03世纪本草阿胶地黄口服液是以乳酸亚铁为功效成分，配合阿胶、当归、大枣、熟地、白芍等传统中药加工而成，主要用于改善营养性贫血。本实验主要研究该口服液对营养性贫血模型大鼠血液细胞学和生化学指标的影响，为评价其改善营养性贫血作用提供依据。1材料与方法1.1受试样品由北京京珠草本生物科技有限责任公司提供的世纪本草阿胶地黄口服液为棕褐色液体，规格：10ml/支，用批号为20090326的样品进行试验。人口服推荐用量为每人(成人)每日3次，每次1支，成人体重按60kg计算，折合剂量为0.5ml/kgBW。1.2实验动物选用广西医科大学医学实验动物中心繁殖的清洁级(Ⅱ级)Wistar种雄性大白鼠80只，体重60～80g，实验动物质量合格证号NO.001069。实验动物使用许可证号：SYX桂2007—0003。实验动物室温度：22～25oC，相对湿度：55％～70％。1.3剂量选择与受试物给予方式据样品的人体日推荐用量，设2.5、5.0、10.0ml/kgBW(分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍)3个剂量组，另设一个对照组(低铁组)，给予相应溶剂。每组12只动物。分别量取样品25、50、100ml，各加去离子水至100ml，混匀、配成25％、50％、100％浓度的溶液，以经口方式给予受试溶液，灌胃量为1.0ml/100gBW，对照组予以等体积的去离子水。每天灌胃一次，连续灌45d。1.4主要仪器与试剂1.4.1仪器RF一520荧光分光光度计、721型分光光度计、离心机、旋涡混匀器等。1.4.2试剂碳酸氢钠、铁氰化钾、氰化钾、肝素抗凝剂、原卟啉、乙酸乙酯等。1.5实验方法1.5.1建立营养性贫血大鼠模型选用健康断乳大鼠在SPF级动物实验室实验环境下适应5d后，饲予去离子水和低铁饲料[配方(g％)：葡萄糖49.38，EDTA处理酪蛋白脱脐黄玉米粉15.00，明胶5.00，玉米油5.00，磷酸二氢钠2.00，碳酸钙2.00，氯化钾0.50，混合微量元素0.27，氯化胆碱0.15，混合维生素0.10，DL一蛋氨酸0.10]，采用不锈钢笼及食罐，实验过程中避免铁的污染，第3周开始，每周选取部分大鼠采尾血测血红蛋白(Hb)含量，直至大多数大鼠的血红蛋白含量低于100g/L时，测定全部大鼠的体重及血红蛋白含量。1.5.2恢复实验从血红蛋白含量100g/L的大鼠中选取含量最低的48只作为实验动物，根据贫血大鼠血红蛋白水平和体重，将其随机分为低铁对照组和三个实验组，每组12只动物，各组均继续饲以低铁饲料及去离子水，阴性对照组以蒸馏水灌胃，实验组则分别以不同剂量的受试样品灌胃，连续灌胃45d。1.5.3血红蛋白测定(氰化高铁法)连续灌胃45d后，测量体重，股动脉取血10μl，放于2.5ml氰化高铁血红蛋白试剂应用液中，立即混匀，放置15min，于540mm波长下用1.0cm光径比色杯比色，以试剂空白凋零将所得样品管的光密度值代入公式，按下式计算血红蛋白浓度(g/L)。1.5.4红细胞内游离原卟啉(FEP)测定将全血滴在专用滤纸上，待干燥后存人4oC冰箱备用(时间不超过2个月)。测定时，用打孔器将带有血滴的滤纸打入玻璃试管中,加入2％硅藻土溶液,放入4oC冰箱过夜洗脱,加入乙酸乙酯：冰醋酸(4：1)混合液萃取,离心10min，取上清液加入0.5mol/L盐酸，振荡离心，取下层液体用荧光分光光度计测定。1.6结果判定受试样品组与低铁对照组比较，若血红蛋白差异有显著性，且受试样品组前后升高幅度平均达到10g/L以上，受试样品组红细胞内游离原卟啉与低铁对照组相比差异有显著性，可判定该受试样品改善营养性贫血功能动物实验结果阳性。1.7实验数据处理采用SPSS11.0统计软件进行各试验组与阴性对照组均数比较的方差分析。2结果2.1大鼠营养性贫血造模情况断乳大鼠在SPF级动物实验室适应5d后饲予低铁饲料及去离子水，3周后发现部分大鼠开始脱毛、皮毛粗糙、稀疏，皮肤苍白，生长开始减慢；随着实验时间的延长，上述症状更加明显，食欲下降，身体消瘦，毛色失去光泽，出现板块脱落。耳、脚爪都出现明显苍白，表现倦怠，活动减少，反应迟钝，喜欢缩成团。于第3、4、5、6周分别测定大鼠的血红蛋白含量，血红蛋白含量100g／L的大鼠的比例分别为0％、28％、65％、76％，见表l。第6周采血测定血红蛋白含量后，选48只血红蛋白含量最低的大鼠进行分组试验。2.2样品对大鼠体重的影响由表2可见，试验前各组大鼠体重一致，试样品高、中剂量组的大鼠体重开始大于低铁对(第45天)，样品各剂量组的大鼠体重和增重量照组，其中的高、中剂量组的终末体重及增重量比较具有显著性差异(P0.0l或P0.05)，表促进营养性贫血模型大鼠体重增长的作用。2.3样品对大鼠血红蛋白含量的影响由表3可见，试验开始时各组大鼠血红蛋白含量基本一致。试验结束时低铁对照组的血红蛋白含量较试验初期降低，这是低铁饲料喂养所致。样品各剂量组大鼠的血红蛋白含量则均有升高，且各剂量组的血红蛋白含量及血红蛋白升高值与低铁对照组比较差异均具有非常显著性(P0.01)，表明该样品具有提高营养性贫血模型大鼠的血红蛋白含量的作用。2.4样品对大鼠红细胞内游离原卟啉(FEP)含量的影响由表4可见，试验结束时各剂量实验组火鼠的红细胞内游离原卟啉(FEP)含量均低于低铁对照组，其差异具有显著性(P0.05或P0.01)，表明该样品具有降低营养性贫血模型大鼠的红细胞内游离原卟啉(FEP)含量的作用。3讨论营养性贫血(NutritionAnemia)是指因缺乏生血所必须的营养物质，如铁、叶酸、维生素D等，使血红蛋白的形成或红细胞的生成不足，以致造血功能低下的一种疾病。铁缺乏所致的营养性贫血是常见的贫血原因之一，也是全球最常见的公共卫生问题之一。我国居民缺铁性贫血的患病率较高，2002年的全国营养调查的结果显示，我国居民贫血患病率为20.1％，男性为15.8％，女性为23.3％。缺铁性贫血正成为影响我国国民体质的一大问题。每日额外补充适当的铁质或食用含铁丰富的食物，以及蔬菜水果等富含抗坏血酸的食物，提高铁的生物利用率，可有效地预防缺铁性贫血的发生。乳酸亚铁胃肠道刺激小，吸收率较高，可作为铁元素的补充剂，被广泛应用于强化食品或保健食品，以弥补食品中含铁质之不足，对防止缺铁性贫血恢复人体正常血色素水平有显著效果。中医认为，贫血属“血虚证”的范畴。古方“四物汤”是由当归、川芎、白芍和熟地4味中药组成，其中又以当归、熟地为主药。熟地含有甘露醇、维生素A等成分，与当归配伍后，可使当归的主要成分阿魏酸含量增加，使当归补血活血疗效增强。世纪本草阿胶地黄口服液是以乳酸亚铁为功效成分，在借鉴古方“四物汤”的基础上，配伍阿胶、当归、大枣、熟地、白芍等传统中药加工而成。在营养性贫血大鼠模型的建立过程中，大鼠体态行为的变化表现与铁减少，贫血逐渐加重，导致神经和消化功能紊乱有关。本实验分别以2.5、5.0、10.0ml/kgBW(相当于人体推荐用量的5、l0、20倍)低、中、高剂量的世纪本草阿胶地黄口服液给营养性贫血模型大鼠连续灌胃45d，高剂量组的大鼠实验前后体重平均增加51.8g，而低铁对照组大鼠体重增长缓慢，平均增加37.6g，两者差异具极显著性(P0.01)。本实验采用血红蛋白和红细胞内游离原卟啉作为观测指标，是基于这两项指标测定简单方便，结果稳定可靠，在一般的实验室广泛应用。实验结束时，各剂量实验组大鼠血红蛋白含量比实验前均有升高，而低铁对照组大鼠比实验前血红蛋白含量降低，各剂量实验组大鼠的红细胞内游离原卟啉(FEP)含量均低于低铁对照组，世纪本草阿胶地黄口服液能提高营养性贫血模型大鼠的血红蛋白含量，降低营养性贫血模型大鼠的红细胞内游离原卟啉(FEP)的含量，促进营养性贫血模型大鼠的体重增长，说明本实验成功地建立了营养性贫血模型，服用该口服液后可以有效增加血红蛋白水平，增强大鼠的造血功能。