三聚氰胺的检测方法

重量法、电位滴定法、高效液相色谱法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、毛细管电泳法、近红外线吸收法、比色法、免疫学法1.1重量法：苦味酸法和升华法。苦味酸法的原理是将三聚氰胺样品用水溶解，再向该溶液中加入苦味酸使其与三聚氰胺生成沉淀，根据生成沉淀的量计算出样品中三聚氰胺的含量。升华法的原理是将样品置于升华装置中，使样品中三聚氰胺受热升华，准确称取剩余固体的质量。这两种方法用于工业上检测三聚氰胺的含量准确度相对较高，但分析时间都比较长，操作繁琐，不适合高效快速检测。1.2电位滴定法电位滴定法在工业中检测三聚氰胺较重量法简单，实验时间较短，但准确度不高。其实验原理：以硫酸标准溶液滴定含有三聚氰胺的溶液，通过公式用等当量点时消耗硫酸标准溶液的体积计算出三聚氰胺的含量。不用于食品。1.3高效液相色谱法（HPLC）用HPLC检测三聚氰胺含量，检出限低，准确度相对较高，可用于食品中三聚氰胺的检测。实验的一般操作步骤是：用沉淀法先将奶粉中的蛋白质沉淀，然后提取奶粉中的三聚氰胺，将提取液用阳离子交换固相萃取柱净化，最后用高效液相色谱进行检测，外标法定量。1.4气相色谱法和质谱联用法（GC-MS）与HPLC法比较，GC-MS具有准确度高、检出限低（0.05mg/kg），更适合食品中三聚氰胺的微量检测。该方法样品经蛋白沉淀离心后过MCX固相萃取柱净化、氮气吹干、硅烷化衍生,再由气相色谱－质谱联用仪检测。由于三聚氰胺为强极性化合物，难汽化，直接对其进行GC-MS测定不但灵敏度低且峰拖尾严重，为此王征采用N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺衍生化，极性的减弱使其容易进行汽化，有利于待测物和基质的分离,降低了背景化学噪音的影响。王立媛等用GC-MS方法检测奶粉和鲜奶中三聚氰胺的加标回收率在82.3%～110.0%之间，相对标准偏差（RSD）＜10%，方法净化效果好、准确度高、灵敏度好。但是GC-MS法需要进行衍生化,样品处理步骤复杂,不适用于多杂质生物检材中三聚氰胺的快速筛查和定量分析。1.8比色法由于牛奶中各种蛋白质基质可能干扰三聚氰胺的检测,FangWei等把基于酪蛋白的牛奶成分分离，然后向溶液中加入金的纳米颗粒。金的纳米颗粒与三聚氰胺的相互作用导致了显著的颜色变化，显示出三聚氰胺的存在。当三聚氰胺存在的时候，溶液的颜色在几秒钟内从红色变成了蓝色，而且可以通过视觉观察和分光光度测定法检测。该法提供了一种使用纳米颗粒的高灵敏度探测手段，从而防止人们因为摄入三聚氰胺而受到伤害的独特机遇，对乳制品早期筛查提供了一种可行的方法。1.9免疫学法———试剂盒检测法（ELISA）免疫学法是一种快速检测三聚氰胺的方法，其原理是利用萃取液通过均质及震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。样品经过甲醇离心处理，氮气吹干再次甲醇溶解后放入到试剂盒中，加入三聚氰胺HRP酶标记物，轻轻混合60s，孵育0.5h。将微空中的溶液倒入水槽中，用洗液洗板多次。在吸水纸上拍打，向个孔中加入底物溶液，孵育0.5h，最后加入终止液体，用酶标记仪在450nm下测吸光度。然后以三聚氰胺浓度半对数为横坐标做标准曲线,确定被测样品的浓度。该法操作简便，分析速度快，可大批量筛选，其检出限达到10ug/k。但是在检测过程有假阳性问题，因此对阳性样品需确证方法进行确证。表面增强拉曼光谱法快速检测牛奶中的三聚氰胺摘要：基于表面增强拉曼光谱技术的便携式拉曼光谱仪运用于牛奶收购、运输过程中三聚氰胺的快速测定进行了研究。利用三聚氰胺位于708cm-1~714cm-1的拉曼光谱特征峰及其强度，对三聚氰胺进行定性及半定量的快速测定。检测限为2.0mg/L，常见含氮化合物尿素、亚硝酸钠等物质对本快速测定方法无干扰。对每个样品的检测时间从样品制备到结果显示一般只需10min。(检测三聚氰胺的国家标准检测方法为高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2mg/kg、0.05mg/kg和0.01mg/kg[4]。)牛奶中三聚氰胺的高效液相色谱检测法(国家标准检测方法)方法原理：用乙睛提取试料中的药物残留,经正已烷去除脂肪,提取液经蒸干后,用流动相溶解残渣,所得样液以高效液相色谱一紫外检测法测定,外标法定量。液相色谱-质谱/质谱法对多种食品基体中三聚氰胺的检测（国家标准检测方法）1.标准溶液的制备2.样品的提取3.提取液的净化4.液相色谱-质谱/质谱测定考察了4种不同型号和填料的色谱柱,在相应的优化流动相条件下的检测灵敏度、精密度与基体效应。结果表明,三聚氰胺在4种分析条件下均有响应,但由于色谱柱填料性质的差异,在针对具体食品基体时,灵敏度和精密度存在很大差别。导致上述4种分析方法的结果差异,可能主要为以下原因:Hilic色谱柱的保留与分离机理比较复杂,流动相组成和样品基体中部分化合物对强碱性强极性化合物三聚氰胺的保留影响较传统ODS柱更为明显;三聚氰胺的特殊性质和分子结构,使其在质谱仪器上的离子化行为较为复杂,同时流动相组成和样品基体的差异,也将影响离子化效率,导致分析结果精密度不同。