不同品种的大蒜汁对大肠杆菌的的抑制作用

1生命与地理科学学院本科毕业论文论文题目：大蒜、蒜苗对大肠杆菌的抑制作用论文作者：龙秀萍专业、年级：生物工程10级F班学号：20101911222指导教师（职称）：朱锦福（）论文起止时间：2013年5月~2013年11月论文提交时间：20年月日论文答辩时间：20年月日青海师范大学生物工程2013年·西宁2目录1汉语摘要…………………………………………………………32英语摘要…………………………………………………………43引言部分…………………………………………………………54实验材料…………………………………………………………54.1实验菌种……………………………………………………54.2实验培养基…………………………………………………54.3实验仪器、试剂……………………………………………65实验方法…………………………………………………………66实验流程…………………………………………………………67实验步骤…………………………………………………………67.1培养基的制备………………………………………………67.2菌悬液、大蒜液的制备……………………………………67.3大蒜汁对试验菌抑菌圈的测定……………………………78结果和分析………………………………………………………78.1抑菌圈实验结果分析及其实验数据………………………78.2实验图片对照……………………………………………89蒜苗的不同部位（根茎叶）对大肠杆菌的抑制作用…………99.1实验操作过程………………………………………………99.2抑菌圈实验结果及其图片对照……………………………910实验结果及其讨论……………………………………………1011参考文献………………………………………………………103摘要[目的]研究不同浓度的生大蒜、熟大蒜、发芽大蒜的汁以及蒜苗的不同部位（根茎叶）的汁对大肠杆菌的抑菌作用，并对其不同浓度，不同大蒜处理方法，不同品种间作比较。将处理方法不同的大蒜研碎取汁，进行抑菌圈实验，蒜苗也进行相同处理，之后观察实验结果并做讨论。[方法]采用抑菌圈法判断不同浓度、处理方法不同的大蒜、部位不同的蒜苗汁对大肠杆菌的抑菌试验，从而观察并测出抑菌圈直径，作比较并分析。[结果]大蒜：通过实验得知熟蒜原汁没有抑菌圈，熟蒜的三个不同稀释度的大蒜汁没有抑菌圈，生蒜的原汁有抑菌圈，并且比发芽的大蒜原汁抑菌圈大，抑菌效果明显，两者的三个稀释度的大蒜并没有抑菌作用，效果不明显。蒜苗：通过实验得知，蒜苗的不同部位（根茎叶）的抑菌结果是：根的抑菌效果不明显，茎的抑菌效果比叶的抑菌效果好，抑菌圈比叶的大。[结论]生大蒜对大肠杆菌具有明显的抑菌作用，蒜苗的茎抑菌效果也及明显。关键词：大蒜；蒜苗；大肠杆菌；抑菌作用4Abstract[objective]tostudythedifferentconcentrationsofrawgarlic,garlic,garlicsproutjuiceanddifferentpartsofthegarlicsproutjuice(rootleaf)forthebacteriostaticactionofe.coli,andtheirdifferentconcentrations,differentgarlicprocessingmethod,differentvarietiesofcomparisons.Theprocessingmethodsofdifferentcrushedgarlicjuice,bacteriostaticringexperiments,garlicsproutalsoundergothesameprocess,afterobservingtheresultsanddiscussion.[method]thebacteriostaticcirclemethoddeterminedifferentconcentrations,differentprocessingmethodsofgarlic,differentpartsofgarlicsproutjuicebacteriostatictestofescherichiacoli,inordertoobserveandmeasurethebacteriostaticcirclediameter,thecomparisonandanalysis.[results]garlic:throughtheexperimentthatcookedgarlicjuicebacteriostaticcircle,notcookedgarlicofthreedifferentdilutiondegreesofgarlicjuicenobacteriostasiscircle,rawgarlicjuicehasbacteriostaticcircle,andbacteriostaticcirclethangerminationofgarlicjuice,bacteriostaticeffectisobvious,thethreedilutiondegreesdidn'tbacteriostaticeffectofgarlic,theeffectisnotobvious.Garlicsprout:throughtheexperiment,differentpartsofthegarlicsprout(rootleaf)bacteriostaticresultis:therootofthebacteriostaticeffectisnotobvious,bacteriostaticeffectthanleafstemsbacteriostaticeffectisgood,bacteriostaticcircleislargerthanleavesRawgarlicone.coli.[conclusion]hasobviousbacteriostasis,stemsbacteriostaticeffectofgarlicsproutandalsoobvious.KeywordsGarlic;Garlicsprout;E.coli;Bacteriostaticaction5引言大蒜是百合科一年生蔬菜,含有丰富的蛋白质、脂肪、糖类、氨基酸、矿物质和维生素,能促进消化、增进食欲,具有显著的保健作用和药用价值。自古人们就知道大蒜能强身健体、消除百病、增强人体活力。现代科学研究表明这是因为蒜瓣中所含的一种带油脂性的白色液体,即大蒜素(蒜辣素),一种具有强烈杀菌能力的硫化丙烯类物[1]。是从大蒜的球形鳞茎中提取的挥发性油状物，具有强烈刺激味和蒜所特有的辛辣味，可与乙醇、乙醚及苯等有机溶剂互溶[2]。大蒜的细胞质里含有一种名为蒜氨酸的含硫化合物，细胞壁里含有一种蒜酶，当新鲜大蒜细胞破裂后，蒜氨酸在蒜酶的作用下，产生大蒜素、阿霍烯等一系列含硫代谢产物。温度在60℃以上，特别是高温，例如100-121℃的高温灭菌处理，会使蒜素大量甚至全部损失，从而失去杀菌作用。另有报道：“蒜中的蒜酶遇热会失去活性，为了充分发挥蒜的杀菌防病功能，最好生食”[3]。蒜苗中含有蛋白质、胡萝卜素、硫胺素、核黄素等营养成分。它的辣味主要来自于其含有的辣素，这种辣素具有醒脾气、消积食的作用。还有良好的杀菌、抑菌作用，能有效预防流感、肠炎等因环境污染引起的疾病。据《本草纲目》记载，蒜苗具有祛寒、散肿痛、杀毒气、健脾胃等功能。蒜苗对于心脑血管有一定的保护作用，可预防血栓的形成，同时还能保护肝脏，诱导肝细胞脱毒酶的活性，可以阻断亚硝胺致癌物质的合成，对预防癌症有一定的作用。吃蒜苗还能有效预防流感、肠炎等因环境污染引起的疾病。本次研究主要是对大蒜的抑菌作用进行了试验，从而探究出大蒜是否对人体有一定的作用，怎样处理的大蒜的抑菌效果最好，其次研究了蒜苗的不同部位的抑菌试验，再次对蒜苗的哪个部位对人体的作用是最大的，三个部位各起什么作用等问题进行了探讨。为将来更好地利用和开发大蒜和蒜苗提供依据。1实验材料1．1材料大蒜（由市场新鲜购买）新鲜蒜苗1．2实验用细菌：大肠杆菌将活化的大肠杆菌菌种用灭完菌竹签挑取适量于制好的琼脂平板培养基上，置于恒温箱倒置培养24小时，之后用革兰氏染色法鉴定大肠杆菌。革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反（无色）。大肠杆菌属于革兰氏阴性菌。步骤如下:单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。大肠杆菌菌落为白色透明状。然后再制备平板，将大肠杆菌划线接种于平板上以提纯，提纯连续两次（保证纯度无杂菌），每次培养18到24小时，以保证大肠杆菌的生长活力，再制备斜面培养基，划线培养18到24小时，用以纯化（分离）、鉴定、保藏。1．3基础培养基LB固体培养基、大肠杆菌菌液（LB液体培养基）、细菌培养基：牛肉膏0.6g，蛋白胨1g，琼脂3.6g无菌水200mL，，在0.1MPa下高压灭菌30min，备用61．4试剂蒸馏水，无菌水，碘液，酒精，番红染液1．5主要仪器LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌器；电热恒温培养箱；SW-CJ．1F超净工作台；2A型数显式电热恒温干燥箱；电子天平2实验方法：抑菌圈法3实验流程配置培养基包器材分析实验结果↓↑灭菌拍照、测抑菌圈大小↓↑倒平板置于恒温箱倒置培养18-24小时↓↑接种、划线、提纯滴大蒜、蒜苗汁于放有滤纸片的混菌平板↓↑恒温箱培养24小时→制混菌平板、提大蒜液、蒜苗不同部位的汁4实验步骤4.1培养基的制备按一定标准制备普通琼脂培养基：牛肉膏0.6g，蛋白胨1g，琼脂3.6g，水200mL，在0.1MPa下高压灭菌30min，超净台下倒平板，备用4.2菌悬液制备将大肠杆菌接种于营养琼脂斜面，37℃培养24h，然后用竹签挑取少量菌苔置于按标准制备好并灭过菌的液体培养基中，培养18-24小时，用血球计数板测出每毫升悬液中的菌数，菌液浓度达1*107-1*109，即制成菌悬液,备用。4.3大蒜液的制备取新鲜生大蒜、煮熟的大蒜还有发芽大蒜适量，去皮，洗净并晾干表面水分，在无菌的试验条件下，用乙醇浸泡5分钟左右，再用无菌水冲洗两到三遍，用无菌刀片7将蒜分别切成小块，置于研钵中研碎至蒜泥状，然后将制得的蒜泥分别用两层无菌纱布挤压过滤得到大蒜汁原汁，同时将三种大蒜汁分别用无菌水稀释到不同的浓度。先取生大蒜汁1ml，分别加无菌水50ml、25ml、10ml,制成四种不同浓度的大蒜汁（由于此过程需要较长时间，大蒜可能都已氧化），其余两个类同，制好备用。观看各浓度中是否有抑菌圈及其大小。通过实验得知，稀释浓度过大，抑菌作用不明显。再取不同的稀释度，加无菌水5ml、10ml、20ml，再试验，结果稀释后的大蒜汁抑菌作用不明显。则观察对比处理方法不同的大蒜的原汁对大肠杆菌的抑菌作用，做实验比较，得出实验结果。4.4大蒜汁对试验菌抑菌圈的测定将刚灭完菌的固体培养基待晾至适宜温度（防止高温杀死大肠杆菌，从而观察不到结果）倒入平皿，同时马上取试验菌悬液1mL，加入无菌平皿中制成混菌平板．待平板凝固后，用无菌镊子在混菌平板表面放四张直径都为15mm的无菌滤纸片，用微量注射器分别吸取相同的量的四种不同浓度大蒜汁滴加在四张滤纸片上，做好标记，每个浓度作三个重复。然后置于恒温培养箱37℃，倒置培养24h，24h后观察滤纸片周围是否有不长菌的透明抑菌圈，若有抑菌圈测定抑菌圈直径，并且各浓度作比较。实验后再进行蒜苗的不同部位的抑菌实验。5、结果和分析5．1抑菌圈实验结果分析经反复实验验证大蒜虽然不能完全抑制供试菌种的生长，但是可以有效减少供试菌种生长的数量，因此以在一定范围内的菌落数量大大少于周围菌落数量