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1．下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是A．是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法B．在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出C．凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D．一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来解析：凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱过程中分离。选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。C2．关于电泳的说法不正确的是A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小解析：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。C3．下列操作正确的是A．分离红细胞时采用低速长时间离心B．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D．透析时要用20mmol/L的磷酸缓冲液，透析12h解析：分离红细胞时，采用低速短时间离心，如500r/min离心2min；分离血红蛋白溶液时，离心时间较长，如2000r/min离心10min。释放血红蛋白时，加入蒸馏水和40%体积的甲苯；透析时用物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液，以除去相对分子质量较小的杂质。D4．有关缓冲溶液的说法不正确的是A．缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成C．调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液D．生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行解析：缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，超过一定范围，缓冲溶液就起不到这样的作用了。A5.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是A．若将样品以2000r/min的速度离心10min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中B．若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快C．将样品装入透析袋中透析12h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内D．若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远A解析：分子丙的相对分子质量大于戊，所以，在离心时戊存在于沉淀中，丙也一定在沉淀中，A项正确。用凝胶色谱法分离蛋白质时，甲相对分子质量最小，容易进入凝胶内部，则移动速度最慢，B项错误。分子丙的相对分子质量大于乙，则丙保留在袋内，乙可能在袋外，C项错误。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速度完全取决于分子的大小，因此，分子甲与丙形成的电泳带相距最远，D项错误。6．如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题。(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有________功能。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是________；乙装置中，C溶液的作用是________(3)甲装置用于________透析(粗分离)目的是____________用乙装置分离蛋白质的方法叫____________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待____________时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。运输磷酸缓冲溶液洗脱血红蛋白透析(粗分离)去除样品中相对分子质量较小的杂质凝胶色谱法相对分子质量的大小红色的蛋白质接近色谱柱的底端6．红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：________、粗分离、纯化和________。(2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是________________________________________。②以上所述的过程即是样品处理，它包括红细胞的洗涤、______________、______________。样品处理纯度鉴定防止血液凝固血红蛋白的释放分离血红蛋白溶液(3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离，其方法是_____________________。(4)然后通过____________将样品进一步纯化，最后经进行纯度鉴定。样品纯化的目的是__________________________________________。(5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。透析凝胶色谱法SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去分子本身的大小7、凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题：(1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是__________，原因是____________________________________________________________________________________。aa相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快(2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由__________________________替代。(3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是___________________________________________________________________________________________________________。(4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体__________(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是____________________。尼龙网和尼龙纱气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果相同保持稳定