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§5.1DNA的粗提取与鉴定一、基础知识（一）提取DNA的方法1.提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2.提取DNA的基本思路提取DNA，去除其他成分利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出3.DNA等大分子的理化性质⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响试剂：（二）DNA的鉴定条件：二苯胺沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色沸水浴现象：（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液（三）除去滤液中的杂质(纯化)（四）DNA的析出与鉴定二、实验设计（一）实验材料的选取原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织①动物鸡血细胞液的优点鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。②植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞——容易破碎——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA①加入一定的洗涤剂和食盐②充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放食盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？1.DNA的溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性（三）除去滤液中的杂质(纯化)讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开；方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离（四）DNA的析出与鉴定与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物—粗提取DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物，并用滤纸吸取上面的水1、DNA的析出2.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl溶液5ml⑵其中一支试管中加入DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象：溶解丝状物的溶液变为蓝色鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNAB前者是溶解DNA，后者是使DNA析出巩固练习203、下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是（）C0.14DNA溶解度0.140.140.14DNA溶解度DNA溶解度DNA溶解度ABCDNaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度21C0.14DNA析出量0.140.140.14DNA析出量DNA析出量DNA析出量ABDNaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度NaCl浓度4、下列图示中能反映DNA析出量与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是：（）B溶解度与析出量的关系是相反225、下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是（）A.①是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质C.③是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的杂质D.④是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质①是释放核物质②是提纯DNA，去除溶于酒精的杂质，④稀释NaCl溶液，析出DNA。C236、甲、乙两图为“DNA的粗提取与鉴定”实验中涉及的两个操作装置图。相关叙述正确的是：甲乙A．图甲的烧杯和图乙的试管中所用溶剂都为NaCl溶液，但两者浓度不同B．图乙试管经少许加热后即可观察到一支试管中的溶液明显变蓝，另一支试管中的溶液不变蓝C．图甲操作需用玻棒迅速搅拌以使DNA成为絮状沉淀并缠绕在玻棒上D．图乙操作中所用的二苯胺需现配现用以达到较好的鉴定效果D247.江苏有一道凉菜——白斩鸡，鸡肉嫩而不韧、味美鲜香。其加工过程中添加了从木瓜中提取的酶制成的“嫩肉粉。”下列有关嫩肉粉的叙述中，正确的是：A．“嫩肉粉”可能是通过催化细胞间的纤维素水解而实现“嫩肉”的B．与高温蒸煮相比，“嫩肉粉”是通过降低反应活化能而实现“嫩肉”的C．“嫩肉粉”应在蒸煮鸡肉时加入，才能实现“嫩肉”D．“嫩肉粉”是一种化工产品，不利于人体健康，实际应用中能少则少、能无则无B258、下列操作可以达到目的的选项是：选项操作目的A溶解海藻酸钠时用大火加热海藻酸钠可以快速溶解B将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析液中蛋白质与其他小分子化合物分离C在DNA粗提取实验中，鸡血中加入蒸馏水稀释血液，防止凝固D洋葱根尖解离后漂洗使细胞分散，利于观察B微火加热并不断搅拌，其目的是防止海藻酸钠焦煳促使血细胞破裂防止根尖过分解离，对染色造成影响。因玻璃纸是半透膜，所以将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入透析液中，可以将蛋白质与其他小分子化合物分离。269.（双选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是：试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应AC2710.下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是：A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B.搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C.在析出DNA黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增多D.在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却B11．在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是：A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C．将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同B