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《生物化学实验》总复习思考题1.请掌握下列生物化学实验常用仪器的正确操作使用方法，并能回答以下问题：（1）离心机使用时为什么要平衡？普通离心机与高速离心机在平衡时有什么不同要求？（2）为什么用高速组织捣碎机进行动、植物组织捣碎时，需采用间歇式方式进行操作？（3）用真空泵进行减压抽滤时，为什么要连接缓冲瓶？2.为什么肝糖元只能从刚宰杀的动物肝脏中获取？在提取肝糖元过程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？在糖元水解产物中如果存在残留蛋白质时，当用班氏试剂检测水解产物，有何影响？（要求详细阐述）3.以下是涉及分光光度仪结构、各部件功能的一些基础问题，请依次解答：（1）请阐述分光光度仪的主要部件及其功能，紫外与可见光光波的波长范围？（2）从光源发出的光是复合光，而测定物质吸光度大小的光是单色光，请问该单色光与物质结构和对光的吸收有何内在联系？什么叫物质的特征吸收波长？用分光光度法定制实测物质标准曲线时，如何确定被测物质的特征吸收波长？（3）产生紫外与可见光光谱的光波是由什么光源发出的？用石英与普通玻璃所制作的比色皿在材质上有何差异？为什么在紫外波长范围内测定物质吸光度大小必须采用石英材质的比色皿？（4）光电管的功能是什么？为什么说光电管是分光光度仪最脆弱和最易损的部件？4.以下是涉及分光光度仪工作原理—Beer-Lamber定律的一些基础问题，请依次解答：（1）Beer-Lamber定律揭示在稀溶液中，物质的浓度与其对光的吸收值大小（吸光度）之间的什么关系？该定律如何用数学表达式表示？在该表达式中，各符号代表什么含义？（2）由于分光光度仪不能直接测定溶液吸光度的大小，请问分光光度仪是如何间接测定溶液吸光度大小的？在间接测定溶液吸光度大小时，Beer-Lamber定律还有一种表达方式即溶液的吸光度大小与其透光率的关系表达式，请写出该表达式，在该表达式中，各符号代表什么含义？（3）由于分光光度仪是通过测定溶液透光率大小，间接测定其吸光度大小的，请依据溶液吸光度大小与其透光率的关系表达式，详细阐述为什么在用分光光度仪定制标准曲线或测定样品时，需将待测溶液的吸光度（OD值）控制在一定的范围内？你知道该测定范围是多少吗？5.可以用来进行定量分析测定用的标准品应具备哪些特性？6.请阐述移液管与比色皿的正确清洗方法和放置方法；阐述移液管取样与比色皿加样的正确操作方式和操作注意事项。7.以下是以7200型可见光分光光度仪的操作使用为例，回答下列基础问题：（1）请阐述7200型可见光分光光度仪的常规操作程序？（2）用分光光度仪定制标准曲线时，需使用一对比色皿进行测定，如何使用？在使用时，这对比色皿之间需要进行校正吗？为什么？如需要，应该如何校正？（3）为什么要进行“黑体”校正？“参比”校正的目的与意义是什么（请参照课堂重点讲解内容回答）？（4）如何进行“黑体”与“参比”正确校正操作？校正好的“黑体”与“参比”在透光率（T档）和吸光度（A档）的返回值是多少？8．以下是涉及定制标准曲线，测定物质含量定量分析实验规范报告书写格式中的一些基础问题，请回答：（1）请阐述用分光光度法测定物质含量的基本操作步骤；并请阐述“两表一图”的含义。（2）用微机规范绘制标准曲线，确定回归方程、判断线性关系好坏时，需用到三个统计学函数。请写出这三个函数的完整表达式。（3）标准曲线的绘制包含哪些要素（曲线名称、纵横坐标轴的名称及单位、正方型网格线、图例、标准曲线与实验各散点的平滑连线）？如何做到标准曲线绘图规范、直观、美观？9.请完整阐述测定物质含量时，定制标准曲线的目的（请参照课堂重点讲解内容回答）？10.需借助显色反应来进行标准曲线定制时，显色反应试剂与标准品用量上应注意什么关系？14.通过测定样品待测液OD值，由标准曲线对应的回归方程计算待测液显色浓度时，样品待测液OD值测定的大小值应控制在什么范围内？15.正确理解样品待测液显色浓度、样品待测液浓度与样品实际浓度三个基本概念，理解三者之间的关系。以实验讲义中，Folin酚测定人体血清蛋白含量为例，说明人体血清蛋白显色浓度是如何测定的，它与血清蛋白待测液浓度以及血清蛋白实际浓度三者存在什么关系。16.请阐述蛋白质双缩脲反应的原理，双缩脲反应的应用；为什么用尿素进行双缩脲反应必需用干燥试管才能得到正确的反应结果？17.请阐述茚三酮反应的反应原理及其应用。18.蛋白质的天然属性是什么？请从蛋白质的分子结构，正确分析理解蛋白质分子为什么具备这样的天然属性（请参照课堂重点讲解内容回答）？19.请阐述蛋白质“盐析”与“中性有机溶剂沉淀蛋白质”反应原理；这两类沉淀反应有何应用？20.在蛋白质不可逆沉淀反应实验中，多次涉及到蛋白质遇到沉淀剂后，沉淀不增加反而消失的现象，这一现象统称为“假溶”现象，蛋白质的“假溶”与“复溶”两者之间有什么本质上的不同？并请解释以下“假溶”现象：（1）在重金属盐沉淀蛋白质实验中，加入过量的硫酸铜或过量的乙酸铅后，沉淀消失现象？（2）在“海伦压环”试验中；请解释用浓硫酸与浓盐酸进行海伦压环试验振荡后，沉淀消失现象？（3）如何快速准确鉴定一蛋白质沉淀后的溶解是盐析透析后的“复溶”还是受溶液pH影响出现的“假溶”？21.请阐述用透析试验验证蛋白质“可逆”与“不可逆沉淀反应”的实验设计原理。22.请阐述酸、碱、盐的存在对加热变性蛋白质沉淀反应有何影响。要求能对加热变性沉淀蛋白质实验中涉及到的每个实验现象作出正确的理论解释。23.请列表从检测原理、样品测定范围、标准品使用浓度与消耗量、检测结果准确性、操作难易程度、测定方法的局限性与应用等方面，对双缩脲法与Folin酚法测定蛋白含量含量的方法进行分析归纳总结。24.请阐述考马斯亮蓝G250染色法定制蛋白质标准曲线的原理；对比Folin酚定制蛋白质标准曲线原理和方法，列表从标准品的使用浓度，测定范围，反应灵敏度，标准品的用量，线性关系的好坏比较两种测定蛋白质方法的优、缺点。25请从检测方法的原理与应用范围着手分析，为什么分别采用Folin酚法和双缩脲法测定“蛋白胨”这种微生物培养基质中蛋白含量时，其测定出的蛋白含量检测结果会大相径庭，相差甚远？26.在考马斯亮蓝G250染色法定制蛋白质标准曲线实验准备中，考马斯亮蓝G250试剂配制中往往因试剂的酸度、试剂过滤的清澈度、试剂质量本身等诸多因素，影响试剂配制的准确性。从而直接影响其标准曲线定制的准确性，因此常常需要对配制好的试剂进行准确度测定，请你结合该方法的检测灵敏度，阐述验证试剂配制准确性的有效检测方法。（以实例进行阐述）27.测定食品中蛋白质含量的传统方法是什么？请阐述该方法的检测原理。三聚氰胺事件发生后，该检测方法暴露出了一个重大缺陷，请分析导致该缺陷的原因，并根据你所学知识，推荐一种测定食品中蛋白含量的准确方法，并说明其方法在实际应用中的优点。28.为什么在提取唾液淀粉酶前，必需将口中的残渣用清水漱尽后，才能满足实验需要，正确提取淀粉酶？否则会对酶的什么验证实验造成不利影响？29.请结合实验教学内容，阐述酶的专一性验证实验设计原理。30.为什么淀粉的水解进行程度可以通过碘滴反应加以确定。31.在进行酶的激活剂与抑制剂实验中，加入Na2SO4的目的与意义。32.请结合你所学的酶的相关知识，正确地分析在医学临床上，下列医学手段应用的理论基础是什么？（1）对于实施大型手术的患者，往往在手术进行中，医生要对患者实施低温麻醉术，其作用是什么？（指在全麻作用下，用物理降温法将患者的体温下降到一定程度，使机体代谢率降低，提高组织对缺氧及阻断血流情况下的耐受能力。在脑手术和心血管手术中有见）（2）严重的外伤、感染、中毒或精神创伤，均可引起过度的应激反应，包括肾上腺皮质激素及肾上腺素大量释放，使糖原大量分解、能量大量消耗和代谢明显增加，以及小动脉强烈收缩，致使循环缺血、肥大细胞释放组胺，造成组织水肿、细胞缺氧，进而产生弥散性毛细血管内凝血(DIC)。过度的的应激不但无利，可导致休克，以至发展到不可挽救的地步。常常采用“人工冬眠疗法”进行救治，其依据是什么？（人工冬眠疗法，就在于减轻机体的过度应激反应，使机体处于冬眠状态，如类似过冬的青蛙等动物。其目的在于以降低细胞新陈代谢、减轻细胞耗氧、改善微循环，从而使细胞免遭严重损害，为其原发病的治疗争取了时间，提供了前提。）生物产业学院生物化学实验主讲教师：徐文俊2014-11-18