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第一部分微生物的利用实验2分离以尿素为氮源的微生物浙科版选修1从自然界中分离微生物自然环境中微生物的种类和数量要受到所处环境中有机物、氧、温度、水分、pH值、光线等各种因素的影响。土壤中的微生物分布的数量：按种类递减，细菌(108个/g)放线菌(107个/g)霉菌(106个/g)酵母菌(105个/g)藻类(104个/g)原生动物(103个/g)。土壤中的大量微生物已成为分离各种抗生素、生理活性物质、酶和氨基酸产生菌的主要来源。目前全世界能分离培养的微生物还不到其总数的1%。从土壤中采集微生物土壤有机质含量和通气状况有机质丰富的土壤如耕土,菜园土,近郊土壤,通气保水性能好,适合细菌,放线菌生长繁殖;森林土植被多,枯叶多,有机质丰富,但阴暗潮湿,适合霉菌,酵母生长繁殖;沙土,无植被的山坡土等有机质含量少的,微生物含量少。土层的纵剖面采土样最好的土层是5—25cm。由于阳光照射，1-5cm的表层土的蒸发量较大、又由于紫外线具有杀菌作用，所以该土层的微生物数量较少；25cm以下的土层因土质紧密,空气、营养、水分缺乏,含菌量逐步减少。土壤采样方法:采土样地点选好后,用小铲子去除5cm表土,取离地面5-15cm处的土样10-25克,盛于预先灭菌的牛皮纸袋中扎紧,并标明时间,地点和环境等情况,以备查考。分离纯化为了获得某一特定的微生物菌种，必须进行微生物的分离纯化，把最需要的菌株直接从样品中分离出来。好氧微生物的分离纯化1、常规的分离方法：划线分离法、稀释涂布法2、平皿反应快速检出法：选用特异的检出方法和筛选方案，可显著提高菌株分离纯化的效率。变色圈法：在平板中加入指示剂或显色剂，使所需微生物能被快速鉴别出来。产生有机酸或胺等碱性物质的微生物，通常采用pH值指示剂可检测出来。原理：根据微生物特殊的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计特殊的分离培养基,通过观察微生物在选择性培养基上生长状况或生化反应如透明圈、变色圈、抑菌圈等进行分离。尿素NH3中性碱性酚红颜色：黄色紫红色变色范围是pH6.4-8.2细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的氨使培养基变碱，于是酚红由黄变红。随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。细菌（一）制备培养基：全培养基、尿素培养基（二）制备细菌悬液制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液实验组对照组(三)倒平板需要倒3个LB平板，9个尿素平板LB(对照)尿素10-210-310-4每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组)（四）实验结果1全培养基尿素培养基10-210-310-410-5（四）实验结果2全培养基尿素培养基10-210-310-4恒温37℃培养LB培养基上10-2、10-3、10-4、10-5稀释度土样涂布结果尿素培养基上10-2、10-3、10-4、10-5稀释度土样涂布结果配制菌悬液1个99ml无菌水2个9ml无菌水得10-2,10-3,10-4的菌悬液1g土壤稀释菌悬液（使用1000μL）高浓度→低浓度，换枪头涂布分离低浓度→高浓度，可不用换枪头涂布分离涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？练习题1、选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。阻止特定抑制2、常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。显微镜稀释度细菌30-3003、在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。平均数4、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中．得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233D5.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有()①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A