不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化

不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化实验器材：电热恒温水浴槽离心机紫外可见分光光度计电子天平超声波清洗剂研钵具塞试管试管架5ml移液管2ml移液管滴管试管剪刀比色皿洗耳球烧杯量筒滤纸称量纸实验试剂：提取液（80%丙酮：95%乙醇为2:1）CaCO3石英砂蒸馏水实验材料：新叶（变红，即红色）：选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位老叶（无变红，即绿色）：选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位测定方法：1.研磨法取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。2.直接浸提法取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,于暗柜中静置48h浸取,以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。3.加热浸提法取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20mL具塞试管中,放入水浴锅50℃加热5h，将其转入离心管，以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。4.超声波研磨法取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后将超声波清洗机的温度调为50℃，分别加热20min，40min，60min。然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。5.超声波浸提法取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,然后将超声波清洗机的温度调为50℃，加热40min然后以3000r/min离心3min后进行检测。（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。实验3次，取平均值。计算方法：取待测液，于663nm与645nm处测定吸光度值，按照Arnon公式计算叶绿素a和叶绿素b及叶绿素的含量叶绿素a提取量(mg／g)=[12.7A663—2.69A645]V／(1000·W)叶绿素b提取量(mg／g)=[22.9A645-4.68A663]V／(1000·W)叶绿素总提取量(mg)=叶绿素a提取量+叶绿素b提取量式中：A663——波长663nm处的吸光度A645——波长645nm处的吸光度V——提取液的体积(mL)W一叶片质量(g)1.ArnonDLCopperenzymesinisolatedchloioplastspolyphenoloxidaseinBetavulgaris[J]．PlantPhysiology，1949，24：1-5实验数据记录：直接浸提法53h3月20日~3月22日波长A645A663绿色0.5510.5250.8160.5100.7560.476平均值0.7080.504红色0.2990.2470.3030.2490.3220.253平均值0.3080.250老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.389叶绿素b提取量(mg／g)=0.167叶绿素总提取量(mg)=0.556新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.195叶绿素b提取量(mg／g)=0.063叶绿素总提取量(mg)=0.258加热浸提法3月23日波长A645A663绿色0.3250.9980.3330.9260.3820.893平均值0.3470.939红色0.1170.3650.1270.3860.1150.362平均值0.1200.371老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.727叶绿素b提取量(mg／g)=0.237叶绿素总提取量(mg)=0.964新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.293叶绿素b提取量(mg／g)=0.529叶绿素总提取量(mg)=0.822研磨法3ml3月25日波长A645A663绿色0.4170.7220.6430.9680.5180.822平均值0.5260.837红色0.5700.9860.5330.7630.3750.568平均值0.4930.772老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.369叶绿素b提取量(mg／g)=0.325叶绿素总提取量(mg)=0.694新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.340叶绿素b提取量(mg／g)=0.307叶绿素总提取量(mg)=0.647超声波浸提法40min3月27日波长A645A663绿色0.2720.7400.3930.9870.2970.650平均值0.3210.792红色0.1270.3470.1230.3400.1830.530平均值0.1440.406老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.613叶绿素b提取量(mg／g)=0.226叶绿素总提取量(mg)=0.839新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.318叶绿素b提取量(mg／g)=0.093叶绿素总提取量(mg)=0.411超声波研磨法20min3月27日波长A645A663绿色0.8030.5110.6360.3860.6220.391平均值0.6870.429红色0.3970.2630.7560.5380.5490.275平均值0.5670.359老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.326叶绿素b提取量(mg／g)=0.181叶绿素总提取量(mg)=0.507新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.273叶绿素b提取量(mg／g)=0.148叶绿素总提取量(mg)=0.421超声波研磨法40min3月28日波长A645A663绿色0.3270.2810.7550.4220.4660.301平均值0.5160.335红色0.5380.3660.5540.3630.6400.407平均值0.5770.379老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.256叶绿素b提取量(mg／g)=0.354叶绿素总提取量(mg)=0.610新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.290叶绿素b提取量(mg／g)=0.146叶绿素总提取量(mg)=0.436超声波研磨法60min3月29日波长A645A663绿色0.3410.8980.3390.8840.3290.842平均值0.3360.875红色0.2900.7110.2190.5290.3150.753平均值0.2750.664老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.681叶绿素b提取量(mg／g)=0.240叶绿素总提取量(mg)=0.921新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.513叶绿素b提取量(mg／g)=0.213叶绿素总提取量(mg)=0.726超声波研磨法70min3月30日波长A645A663绿色0.3680.9640.2620.6640.3380.882平均值0.3230.839红色0.1410.3530.1780.4860.1900.472平均值0.1700.437老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.652叶绿素b提取量(mg／g)=0.231叶绿素总提取量(mg)=0.883新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.340叶绿素b提取量(mg／g)=0.123叶绿素总提取量(mg)=0.463超声波研磨法80min3月30日波长A645A663绿色0.3140.8210.3910.8500.2940.726平均值0.3330.799红色0.1560.3950.1630.4170.1460.380平均值0.1550.397老叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.617叶绿素b提取量(mg／g)=0.259叶绿素总提取量(mg)=0.876新叶：叶绿素a提取量(mg／g)=0.308叶绿素b提取量(mg／g)=0.113叶绿素总提取量(mg)=0.421数据分析：不同时间超声波研磨法的叶绿素提取量变化00.20.40.60.812040607080时间（min）叶绿素含量（mg）老叶新叶不同时间超声波研磨法对叶绿素a,b提取量的变化00.10.20.30.40.50.60.70.82040607080时间（min）叶绿素a,b含量老叶（叶绿素a）老叶（叶绿素b）新叶（叶绿素a）新叶（叶绿素b）多种方法提取叶绿素的比较00.20.40.60.811.2直接浸提法加热浸提法研磨法超声波浸提法40min超声波研磨法60min方法叶绿素含量老叶新叶由上表可知超声波研磨法的超声最佳时间是60min，并且加热浸提法的提取叶绿素含量较高。注明：红线部分是没有进行稀释的，而黑色的是稀释了10ml的，并且研磨法是稀释了3ml。因为红叶石楠的叶绿素没有人做过，所以我的提取剂以及配比是从有关植物叶绿素的提取的论文里参考的。参考文献：80%丙酮：95%乙醇为2:1——油菜叶绿素提取方法的研究液料比1g：20ml——青草叶绿素提取工艺的研究提取剂用量20mL——冬青叶叶绿素提取工艺研究研磨5min——叶绿素提取分离及观察体会