不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素和原阿片碱含量的影响

1不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素和原阿片碱含量的影响宋平顺赵建邦（甘肃省药品检验所、甘肃省中药分析测试中心，兰州730000）丁永辉（甘肃省食品药品监督管理局）赵燕（陇南市药品检验所）摘要目的探讨延胡索不同醋制方法对其延胡索乙素、原阿片碱含量的影响，结合对市售品炮制品的测定，制定醋延胡索的质量标准。方法色谱柱：大连依利特(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-0.6%冰醋酸（含0.6%三乙胺）(20：80)；检测被长为280nm；流速1.0ml/min；柱温：室温。结果延胡索乙素、原阿片碱分别在0.245～1.467µg、0.202～1.008µg范围呈良好的线性关系，平均回收率分别为104.01％、101.22％，RSD分别为1.76％、1.45％(n=6)。醋延胡索中延胡索乙素、原阿片碱的含量在相对稳定范围之内。结论方法准确，灵敏度高，重复性好，适用于延胡索炮制品的质量控制。制定醋延胡索中延胡索乙素、原阿片碱的含量是可行的。关键词延胡索；醋制品；延胡索乙素；原阿片碱；高效液相色谱法InfluenceofdifferentmethodofvinegaronthecontentofTetrahydropalmatineandOpioidalkaliinYanhusuoSongPingshunZhaoJianbang(GansuInstituteforDrugControl,analysisandtestingofGansuProvinceTraditionalChineseMedicineCentre,Lanzhou730000)DingYonghui(GansuProvinceFoodandDrugAdministration)ZhaoYan(LongnanInstituteforDrugControl)AbstractObjective：TodifferentmethodofvinegaronthecontentofTetrahydropalmatine,opioidalkaliinYanhusuo,connectedwiththeprocessedproductsonthemarketforthedeterminationandmakethequalitystandardsofYanhusuo,whichismadebyvinegar.Mtheod:column:DalianaccordingtoGbadolite(250mm×4.6mm,5μm);mobilephaseofmethanol-0.6%aceticacid(with0.6percenttriethylamine)(20:80);detectionwastheheadof280nm;flowrateof1.0ml/min;column:roomtemperature.Results:Thetetrahydropalmatine,formerArgentineprotopinein0.245~1.467μg,0.202~1.008μgofagoodlinearrelationship,withanaveragerecoveryratewas104.01%,101.22%,RSDwere1.76%,1.45%(n=6).2Conclusion:methodisaccurate,sensitive,reproducible,Corydalisapplytoprocessedproductsqualitycontrol.Keywordsyanhusuo;vinegarproducts;-tetrahydropalmatine;formerArgentineprotopineHPLC.延胡索是我国传统药物之一，《中国药典》2005年版收载为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T．Wang的干燥块茎，具有活血、利气、止痛的功效[1]。延胡索生物碱类成分的测定已有报道,有重量法测定总生物碱[2]、紫外法测总生物碱[3、4、5]、电位滴定法测总生物碱[6、7]、薄层扫描法测定延胡索乙素[6]、高效液相法测定延胡索乙素[7]。同时测定延胡索(包括同属植物)中季胺碱[8]或叔胺碱[9、10]多种成分的含量。由于临床应用中大多采用醋制品配方入药；同时，国内有关醋制方法各地存在差异，建立多指标测定延胡索药材炮制品的含量方法，控制延胡索炮制品的内在质量，全面提升延胡索饮片质量标准水平，是非常必要的，必将为进一步研究和制定炮制品的质量标准奠定基础。《中国药典2005年版》采用高效液相色谱法测定延胡索原药材中延胡索乙素的含量，延胡索乙素与原阿片碱（延胡索丙素）同属叔胺碱，本文参照文献[10]建立用高效液相色谱同时测定延胡索炮制品中两种生物碱含量的方法，对延胡索炮制前后延胡索乙素和原阿片碱的含量变化比较，并收集部分市售炮制品，测定延胡索乙素和原阿片碱的含量，为《中国药典》制定醋制品质量标准提供参考。1仪器与试剂美国Waters515泵，2487检测器，717自动进样器。UV-2401紫外分光光度计。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为娃哈哈水。延胡索乙素(110726-200409)、原阿片碱（110853-200402）供含量测定用对照品，由中国药品生物制品鉴定所提供。8份延胡索炮制品分别由甘肃省药品检验所等单位按《全国中药炮制规范》附录“中药炮制通则”加工，另外6份延胡索炮制品为市售品，经作者鉴定，详列于下表。2方法与结果2.1色谱分析条件大连依利特(250nm×4.6nm,5μm)；甲醇-0.6%冰醋酸3（含0.6%三乙胺）(20：80)为流动相；检测被长为280nm；流速1.0ml/min；柱温：室温；理论板数：按延胡索乙素峰计算应不低于3000。2.2对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素、原阿片碱对照品适量，加甲醇制成每lml含48.9µg和40.3µg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取延胡索样品(粉末过3号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨水1ml，加入乙醚50ml，冷浸25小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇定容至10ml量瓶，即得。按以上色谱条件得到对照品、延胡索炮制品色谱图见图l。2.4线性关系的考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液（48.9µg/ml）5、10、20、25和30µl；原阿片碱对照品溶液（40.3µg/ml）5、10、15、20和25µl，依次注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，延胡索乙素回归方程为：Y=7.7634X-1.6225，r=0.9999。原阿片碱回归方程为：Y=6.5127X-1.4583，r=0.9999。结果表明延胡索乙素、原阿片碱进样量分别在0.245～1.467µg、0.202～1.008µg范围呈良好的线性关系。2.5精密度试验取同一批延胡索药材粉末（中医学院）,按“供试品溶液的制备”方法制备，精密吸取10µl，重复进样5次，测定延胡索乙素、原阿片碱含量，RSD分别为1.25％、1.81％。2．6重现性试验取同一批延胡索药材粉末5份（中医学院）,按“供试品溶液的制备”方法制备，测定延胡索乙素的含量分别为0.0841﹪、0.0863﹪、0.0835﹪、0.0876﹪、0.0849﹪，平均含量为0.0853﹪，RSD为1.96％(n=5)；原阿片碱的含量分别为0.0523﹪、0.0497﹪、0.0495﹪、0.0491﹪、0.0491﹪，平均含量为0.0499﹪，RSD为1.18％(n=5)。结果表明此法重复性良好。2.7稳定性试验取同一批延胡索药材粉末（中医学院）,按“供试品溶液的制备”方法制备，于配制后0、2、4、6、8和10h进样，测定延胡索乙素、原阿片碱含量，结果样品溶液在10h内基本稳定，RSD分别为1.97％、2.25％。2.8加样同收率试验取已知延胡索乙素（含量为O.0853％）、原阿片碱0．9252O．9548O．95814（含量为O.0499％）的延胡索药材粉末0.25g，精密称定，精密加入延胡索乙素对照品溶液(0.2086mg/ml)lml；原阿片碱对照品溶液(0.1265mg/ml)lml，按供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算回收率，结果分别为104.01％、101.22％，RSD分别为1.45％、1.76％。结果见表1。表1回收率试验Table1recoverytest次数123456样品取样(g)0.25010.25210.25110.25000.25150.2503样品含量(mg)原阿片碱延胡索乙素0.12480.21330.12580.21500.12870.21420.12530.21320.12550.21450.12490.2134加入量(mg)原阿片碱延胡索乙素0.12650.20860.12650.20860.12650.20860.12650.20860.12650.20860.12650.2086测出总量(mg)原阿片碱延胡索乙素0.25510.43010.25130.43320.25620.43110.25390.43080.25530.43070.25150.4305回收率(%)原阿片碱延胡索乙素103.00103.9399.21104.60100.79103.99101.66104.31102.61103.64100.08104.07平均回收(%)原阿片碱延胡索乙素101.22104.01RSD(%)原阿片碱延胡索乙素1.451.762.9样品测定对所收集的14份样品按“供试品溶液制备”方法制备，精密吸取对照品与样品溶液各10µl，注入高效液相色谱仪，计算含量，结果见表2。表214批延胡索炮制品中原阿片碱、延胡索乙素的含量测定（%）Table214approvedYanhusuoprocessedproductsZhongyuanAprotopine,Tetrahydropalmatine-Determination(%)批次单位炮制方法原阿片碱延胡索乙素1省药检所生品0.08990.07982醋炒0.08530.070253醋煮0.06830.05814醋蒸0.08110.07215中医学院生品0.04990.08536醋炒0.03910.07427醋煮0.02540.06548醋蒸0.03420.08159鼎盛大药房醋制0.08420.083210惠灵大药房醋制0.05860.058011济慈堂大药房醋制0.04120.037312平安堂大药房醋制0.08310.075813世纪大药房醋制0.08090.075314佛光安泰堂大药房醋制0.07740.07483讨论3.1、提取溶剂和方法的考察，样品加氨水1ml碱化后，分别选择甲醇、三氯甲烷、乙醚和石油迷作为提取溶媒，回流提取60min进行比较，结果乙醚作溶剂，提取率显著高于其它溶剂。取1份加氨水1ml碱化，以50ml乙醚为溶剂,分别回流提取3、2、1小时3次，每次滤渣碱化再加乙醚，分别测定三次提取液中的含量，原阿片碱分别为0.0519%、0.0080%和0.0010%，总量0.0609%；延胡索乙素0.1094%、0.0115%和0.0007%，总量0.1216%；取4份分别加氨水1ml碱化后，用50ml乙醚冷浸提取15、20、25、30小时（仅一次），原阿片碱分别为0.0530%、0.0572%、0.0659%和0.0641%；延胡索乙素的含量分别0.1437%、0.1493%、0.1611%和0.1624%，结果冷浸提取25小时与30小时的提取率基本相同，进一步考察冷浸25小时后是否提取完全，滤渣碱化加乙醚回流提取3小时，原阿片碱为0.0037%，延胡索乙素为0.0079%，故认为冷浸25小时基本提取完全。采用《中国药典2005年版》的提取方法，原阿片碱、延胡索乙素含量分别为0.0367%、0.2117%。为了提高工作效率，以甲醇做溶剂，碱化后超声，三次分别30min、20min和10min，