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·1·选修①第二讲一、选择题1．(2013·苏北八校联考)微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是()①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A．①③B．②④C．③⑤D．④⑥解析：无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故④⑥操作错误。答案：D2．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()①可以用相同的培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在酒精灯火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌A．①②B．③④C．①③D．②④解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，以避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是用于计数。答案：C3．下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是()成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素含量3g1g0.5g0.5g0.01g30g1000mL0.1万单位A.依物理性质划分，该培养基属于液体培养基·2·B．依用途划分，该培养基属于选择培养基C．培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯一氮源是NaNO3D．若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去(CH2O)，再添加纤维素解析：由于配方中没有琼脂，所以从物理性质上划分为液体培养基；由于配方中含有青霉素，对微生物有一定的筛选作用，所以从用途上划分为选择培养基；由于培养基中含有青霉素，纤维素分解菌不能生存，除去(CH2O)外，还应除去青霉素，同时添加纤维素和琼脂。答案：D4．(2012·全国高考)下列关于细菌的叙述，正确的是()A．不同种类细菌的生长均需要相同碳源B．常用液体培养基分离获得细菌单菌落C．细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期D．培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选解析：细菌所需的碳源与其新陈代谢的类型有关；分离细菌单菌落时需要固体培养基；芽孢是细菌在不利环境中形成的休眠体，其在细菌衰亡期时大量形成；金黄色葡萄球菌能耐高浓度NaCl，因此高浓度NaCl的培养基可以筛选金黄色葡萄球菌。答案：D5．(2012·北京高考)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()A．将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B．将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C．将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D．将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上解析：在新鲜葡萄汁中加入酵母菌，控制无氧条件发酵时会产生酒精，酒精对其他杂菌有一定的抑制作用，因此不进行严格的无菌操作对实验结果影响较小；日常将毛霉菌液接种在豆腐上进行发酵，发酵时温度为15～18℃，不利于其他杂菌生长，同时腌制时加入食盐和酒精也可以起到一定的抑制其他微生物的作用；转基因植物接种过程中如果被微生物感染将无法获得转基因幼苗，导致实验失败；由于培养基是选择培养基，可以抑制其他微生物的生长，所以不进行严格的无菌操作对实验结果影响较小。答案：C6．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上·3·C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析：采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。答案：D7．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是()A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上解析：经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。答案：A二、非选择题8．(2011·新课标全国卷)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于________培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。解析：(1)欲筛选出能高效降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。(2)分离纯化菌种时，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。答案：(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰9．现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免地产生大量的废纸。废纸的主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。如图是工业上利用微生物由纤维素生产乙·4·醇的基本工艺流程，请回答相关问题：(1)自然界中①环节需要的微生物大多分布在____________的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以____________为唯一碳源并加入________的培养基上，筛选周围有________的菌落。(2)在如上所述的筛选过程中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶的浓度相同，则你认为三种酶液的活性________(填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”)，可以通过________________进行定量测定。(3)根据测定结果，①环节常选择木霉，则②中获得的酶是________酶。(4)生产中可以满足④环节的常见菌种是________，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意____________。(5)该技术虽然有广阔的前景，但存在酶的成本高等问题，为了降低成本可利用________等技术使酶能够重复利用。解析：(1)富含纤维素的土壤中，含有大量以纤维素为碳源的纤维素分解菌。刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素分解后，复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过此方法来筛选纤维素分解菌。(2)酶液中蛋白质的浓度相同，酶的活性不一定相同，可通过分解纤维素后所产生的葡萄糖量是否相等来鉴定其活性是否相同。(3)木霉能产生纤维素酶，可以将纤维素分解。(4)在酒精发酵中常用的微生物是酵母菌，在接种过程中一定要避免杂菌污染。乙醇是酵母菌无氧发酵的产物，发酵过程中一定要保持无氧的环境。(5)可通过固定化酶技术使酶能够反复利用来降低酶的成本。答案：(1)富含纤维素(其他答案合理也可，如落叶较多等)纤维素刚果红透明圈(2)不一定相同对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖(3)纤维素(4)酵母菌发酵装置的密闭性(或保证无氧条件等)(5)固定化酶