临床生物化学检验(1)

安岳县检验学会临床生物化学检验安岳县中医医院检验科袁国平•分析前的质量控制要点有哪些？•在选购全自动生化分析仪时,应重点了解哪些基本知识?•如何选择校准物质?校准方法?校准频率?•全自动生化分析仪常见的交叉污染的原因?分析前的质量控制要点有哪些?生化检验过程的三阶段•I分析前•医生接诊，开检验申请单•患者准备（生理特征、状态）•标本采集、标本运送•标本处理II分析中标本检测•III分析后•结果审核、报告发出•对检验结果的正确评价和解释•分析前：是指从临床医生开出检验单开始，到实验室进入分析检验的这一段过程。•包括检验申请、患者准备、原始样品的采集、运送和实验室预处理等步骤。一、实验室统计•分析前：68.2%•分析中：13.3%•分析后：18.5%•~74%未对病人造成不良影响•~19%造成对病人做进一步的检查•~6.4%造成对病人的治疗方案修改•——ClinicalChemistry1977,43(8):1348~1351重要性•分析前质量管理是一个最薄弱的环节，影响检验结果质量占60%以上•从“检验医学”的要求来看，检验不能只考虑分析阶段的质量保证，还必须重视和参与分析前的质量保证•《分析前因素对临床检验结果影响》第3版•人民卫生出版社第二章第十五条•医疗机构临床实验室应有分析前质量保证措施•制定患者准备、标本采集、标本储存、标本运送、标本接收等标准操作规程•目的：确保检验前程序处于受控状态•卫生部文件•卫生部关于印发《医疗机构临床实验室管理办法》的通知1、患者准备控制的要点①不可变的生物因素：年龄、性别、种族等生理节律变化（日周期、月周期、妊娠、季节、海拔）②可变的生物因素：情绪、运动、饮食、饮酒、药物③其他如采取标本时：体位、止血带等1.患者准备控制的要点•作好解释工作即向患者说明作该项检验的目的及注意事项，消除在抽血时的恐惧和紧张。•避免饮食、药物的影响•尽力争取患者的协助特别是餐后2h血糖或糖耐量实验，要告之方法、注意事项。2、血液标本的采集采血顺序血培养→凝血像→肝功免疫→急诊生化→血常规→血沉根据CLSIH3-A5文件最佳采样时间的选择•晨起空腹时或者禁食12h•能减少昼夜节律带来的影响•患者处于平静状态，减少由于运动带来的影响•减少饮食的影响•易于与正常参考范围作比较•检出阳性率最高的时间：如血培养•对诊断最有价值的时间：如餐后2h血糖采集部位•静脉穿刺•采血部位:常选择肘静脉或颈静脉•应该在非水肿,非炎症部位采血•同时不能在任何输液的“下游”采血•电解质(钠、钾、氯结果错误）•葡萄糖（葡萄糖浓度升高）•输血（血红蛋白结果错误）患者识别•标本采集前应核实患者身份•口头确认、腕带扫描问题：•确认患者姓名是由护士发问还是患者自报名字？？？避免溶血•显性溶血：当血红素等于或者大于300mg/L时能肉眼观察到。•非显性溶血：肉眼观察不到的溶血。溶血标本项目红细胞/血浆溶血标本/正常标本氯0.501.05钾22.71.91磷0.78-2.64钙0.100.96ALT6.72.2AST40.03.59LDH180.08.04CK10014.08Cr1.631.94UA0.550.50Glu0.820.91BUN0.821.14抗凝剂的选择及影响•EDTA、NaF、草酸盐等不能用于钙离子测定•含有K、Na离子的抗凝剂不能用于测定K、Na离子标本的抗凝•草酸盐、氟化物不能用于酶法测定•草酸盐可抑制Amy、Acp、LDH的活性•氟化物可激活尿素酶、淀粉酶等•凝血因子检测用枸橼酸钠抗凝优于草酸盐3、标本的唯一标志性•标本容器的标签上至少应注明下列内容：•患者姓名及病历号•送检科别及病床号•送检标本名称及量•检验项目•采集标本的时间•唯一条码号•防止张冠李戴4、标本的拒收•下列情况可拒收（各临床实验室应有规定）溶血、脂血严重者（视病情而定）抗凝血中有凝块；该抗凝未加抗凝剂者血量不足（如血沉、PT等）不应接触空气的接触了空气标本采集与送检时间间隔过长者该加防腐剂未加防腐剂者用错真空采血管者唯一性标识错误或不清楚者案例分析•检测项目结果参考范围单位•钾23.73.5-5.5mmol/L•ALP-240-120U/L•钙0.302.10-2.60mmol/L•其他项目正常原因•护士采血用的真空管拿错,用的EDTA-K3采的生化标本，然后倒进生化用管中。•真空管含钾；血浆中的钙离子被熬合。•不二过，不诿过•在选购全自动生化分析仪的时候，应重点了解哪些基本知识？一、自动生化分析仪简介•概念：是将临床化学分析过程中的加样过程中的加样、加试剂、混合、孵育反应、检测、结果计算、打印及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器•具有快速、简便、灵敏、准确、标准化、微量等特点自动生化分析仪分类•按反应装置的结构：•连续流动式、离心式、分立式、干片式•按自动化程度•全自动型、半自动型•按同时可测项目•单通道、多通道•按仪器的复杂程度及功能•小型、中型、大型生化分析仪的常用技术•光谱分析技术a.免疫比浊法b.紫外可见分光光度法终点分析法、连续监测法c.反射光度法紫外可见分光光度法•概念：是利用某些物质的分子吸收200-800nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。•可见紫外光的范围：•紫外光的范围：200——400nm•可见光的范围：400——760nm光吸收的基本定律：朗伯比尔定律•定义：当一束平行单色光垂直同过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收层厚度b成正比。•用途：化学法及酶学终点法的测定。•A=-logT=K×b×c•A：为吸光度•K：摩尔吸光系数•b:液层厚度（光径）•c:吸收物质的浓度透射比浊法•在光源的光路方向上测量透射光强度与人射光强度的比值和胶体溶液中质点间的关系称为透射比浊法比色分析：反应类型•直接测量：•具有特征性的吸收峰，不经任何反应直接在指定波长测量•单一反应：•待测反应本身有特征性吸收峰的底物或产物量的变化•偶联反应：•底物或产物无特征性吸收峰，需经过其他反应生成有特征性吸收峰测量的化合物。这种反应称为指示反应比色分析：干扰因素•溶血：血红蛋白及其它内容物的释放•黄疸：影响光度测量•脂血：干扰光度测量，污损管路二、指示反应及波长•常见的指示反应•脱氢酶系统（ALT、AST、LDH、CK）•NADH或NADPH作底物或产物用340nm/405nm•硝基苯衍生物系统（ALP、GGT、AMY）•硝基苯衍生物的用405/476nm•过氧化物酶系统（GIU、UA、CHO/HDL/LDL）•Trinder反应多用520/600nm,550/660nm三、生化分析的检测方法•终点分析法：一点终点法，两点终点分析法•固定时间法•连续监测法：两点速率法，多点速率法1、终点法•一点终点法：当待测物质与试剂的反应达到平衡时，测定吸光度，计算待测物的浓度•优点：吸光度稳定，对温度、时间和显色剂用量要求不高•不足：反应时间长•测定项目：TP、Alb、Mg1、终点法•两点终点法：•在被测物质反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度，在反应到达平衡时选择第二个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果。•能减少溶血、黄疸和脂浊等造成的干扰•测定项目：TP、Alb、Mg2、固定时间法•指在时间—吸光度曲线上取尚在反应中的两点间的差值来计算结果。此两点即不是反应的起点也不是终点。•该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题•测定项目：Crea苦味酸法3、动力法（连续监测法）•动力学法：在零级反应期连续测定酶促反应过程中的底物或产物量的变化，求出酶反应初速度，间接计算出酶活力浓度•主要用于酶活性及其代谢产物的测定•测定结果较终点法准确•不需要终止反应四、自动生化分析仪的结构•样品及运送系统•试剂系统•检测系统•清洗及管路系统•微机管理系统如何选择校准物质？校准方法？校准频率？校准的定义•校准是一个测试和调整仪器、试剂或检测系统以提供检验反应和所测物质之间的已知关系的过程•校准决定在规定范围内检验结果的准确性和可靠性校准物质的选择•传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品•为了克服纯标准液和患者样品间的基体差异，20年前开始引用具有与患者样品基质相似的校准品替代标准品，用于日常工作什么是校准品？校准物质的选择•SFDA批准生产和注册登记的仪器、试剂和检测系统•实验室使用制造商规定的校准品•当使用SFDA未审批的方法时•选择合适的（配套的）标准品/校准品•如有可能，校准品应能溯源到参考方法或参考物质校准频率•根据检测项目方法和试剂的稳定性不同而定•每日校准CO2ISE•每周校准试剂不稳定的特殊项目•每月校准大部分生化项目（21天左右）•每两月校准特殊项目•所有项目至少每六个月校准一次如有下列情况发生时，必须进行校准•改变试剂的种类，或者批号改变•仪器或者检测系统进行了一次大的预防性维护不或者更换了重要部件•质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时校准方法•K因数法（一点线形法）•两点线性•多点线性（非线性法）1、K因数法（一点法）•由空白液的标准（C1）和通过公式计算得出的K因数制成的曲线•K因数法测定C1（试剂空白）的吸光度时，先输入K值再计算浓度值：•CX=（AX—B）+C1•分析项目：适用各种酶活性的测定2、两点线性法•由空白液和含有一定浓度标准液的标准（2）的两点吸光度绘制的曲线•此法适用所有的分析方法包括1点法、2点速率法和速率法分析项目：TP、ALB、TC、TG、Urea、Crea等3、非线性法•可以使用3~6种浓度标准物，在选定波长测定出各自的吸光度，利用浓度和吸光度之间的关系绘制成非线性标准曲线•测定（C1—Cn标准液）的吸光度B—An。仪器采用Logit-Log进行拟合式的计算出曲线各常数•分析项目：常为免疫项目，CRP、ASO、RF等全自动生化分析仪常见交叉污染的原因？比色分析：交叉污染测试项目A试剂针，比色杯等试剂和样品成分残留干扰下一个测试项目B交叉污染的原因①多项目，多样本处理②处理能力的提高（高速化）共有化①样本针②试剂针③比色杯④搅拌棒交叉污染交叉污染的原因①不正确的清洗方法或清洗能力下降（日常维护欠缺，仪器老化）②生化仪内污垢的积聚③测试顺序安排不当试剂携带交叉污染Amy试剂钙ALP试剂镁、钙镁试剂铁含磷酸盐的缓冲液磷胆固醇试剂胆汁酸过氧化物酶反应系统的项目不能排列在一起，有交叉污染消除交叉污染的方法测试顺序的合理设置试剂组成测试原理原因合理设置测试顺序避免交叉污染设置11.ALP设置21.LDH2.ALT2.ALP3.LDH污染！！3.ALTALTKIT中含有LDH消除交叉污染的方法•利用生化仪的清洗程序合理设置测试顺序正确设定清洗程序确定污染组合设定清洗程序消除交叉污染交叉污染实验方法●设置清洗程序，清洗效果确认判定有污染水清洗污染污染消除碱性清洗液污染污染消除酸性清洗液污染污染消除其他方法谢谢!