一氧化氮对大鼠肝脏缺血再灌注致损伤的保护作用

6・・黑龙江医药科学2003年8月第26卷第4期一氧化氮对大鼠肝脏缺血再灌注致损伤的保护作用汪飞,牛文斌,王鲲鹏(佳木斯大学附属第一医院小儿外科,黑龙江佳木斯154002)提要:目的:探讨一氧化氮在大鼠肝脏缺血-再灌注致损伤中的作用机制。方法:采用动物分组对照实验,研究了L-精氨酸(NO供体)对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,测量不同状态下动物血清中ALT、AST值,以及肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、丙二醛(MDA)浓度的变化。结果:一氧化氮明显减少肝组织中丙二醛含量和血清中ALT、AST含量以及增加肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力。结论:一氧化氮对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,本实验为一氧化氮在肝缺血再灌注损伤的临床治疗提供实验基础。关键词:缺血再灌注;肝脏;一氧化氮中图分类号:R575文献标识码:A文章编号:1008-0104(2003)04-0006-02肝脏缺血再灌注损伤是外科实践中较常见的组织器官损伤之一,肝移植、肝创伤、肝感染性疾病等,经治疗肝脏血流得到恢复后都可构成缺血再灌注损伤的病理演变,此病理改变除引起肝脏局部的损伤外,还可导致全身多器官功能障碍。近年来国内外学者对NO的研究较多,NO是一种具有多种生物活性的小分子物质,参与多种病理及生理过程,涉及到缺血再灌注损伤,而L-精氨酸在体内可以经一氧化氮合酶催化生成一氧化氮,实验研究显示,一氧化氮对肝脏缺血再灌注致损伤有保护作用,现将实验过程总结如下。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物玻璃匀浆机、恒温水浴箱、低温离心机等。1.3统计学处理统计学处理应用SPSS11.0统计软件包,计量资料用方差分析和t检验,P0.05为有显著性差异,P0.01为有极显著性差异。2结果见表1～2。大鼠血清ALT、AST值见表1,肝组织中GSH-Px、MDA值的变化见表2。表1大鼠肝脏缺血再灌注后血清ALT、AST测定结果(x±s,n=6)组别时点ALT(U/L)AST(U/L)S(假手术)组46±498±16Ⅱ(缺血)组A300±90510±49成年Wister大白鼠(购于佳木斯大学实验动物中心)54只雌雄不限,体重250～300g,饲以标准鼠饲料。术前禁食12h,自由饮水。1.1.2动物分组分为4大组:即假手术组S(6只)、缺血组Ⅱ(6只)、缺血再灌注组Ⅲ和L-精氨酸组Ⅳ,将A、B、C、D分别定义为肝Ⅲ(缺血再灌注)组BCDⅣ(用药)组ABCD203±19△160±17△280±25290±20183±21△102±11△△*#270±30323±57△303±40△410±50490±41275±52△203±40△*#390±45缺血30min,缺血30min再灌注30min、60min、120min时间点,相应的将缺血再灌注组分为B、C、D3小组,将L-精氨酸组分为A、B、C、D四小组,每小组6只。1.1.3动物模型制作一氧化氮胶囊肝脏缺血再灌注动物模型的制作[1],称重后,5ml/kg20%乌拉坦溶液腹腔注射麻醉,大白鼠平卧于鼠台上,腹部高效碘消毒,铺无菌巾,参照Pringle's法,建立缺血再灌注模型:腹中线切口进腹,分离肝十二指肠韧带,解剖肝动脉、门静脉,用微血管夹钳夹肝十二指肠韧带,以阻断肝动脉、门静脉血流,肝缺血以据肝脏血运颜色消失,颜色苍白确定;动静脉夹闭后肠管送回腹腔,用无菌温盐水纱布敷盖腹部切口。阻断血流30min为缺血阶段,缺血30min后,去除肝十指肠韧带之血管夹分别再灌注30、60、120min,肝脏再灌注血流恢复以肝脏血运颜色恢复红润确定,为再灌注阶段。对照组除不夹闭肝十二指肠韧带外,其余操作同实验组。操作过程中所有动物腹腔注射37℃生理盐水10ml,以保持血液动力学的稳定。S组、Ⅱ组、Ⅲ组、肝十二指肠韧带分离前股静脉注射生理盐水5.0ml,Ⅳ组肝十二指肠韧带分离前股静脉注射15%的L-精氨酸0.5ml。1.1.4药品L-精氨酸由佳木斯大学基础医学院生化教研室提供,丙二醛(MDA)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒由南京建成生物工程研究所提供。1.2仪器上海二厂生产的722光删分光光度计,DY89Ⅰ型电动F(ALT)=16.32,P0.05F(AST)=19.78,P0.05注:与Ⅱ组比较,△P0.05,△△P0.01;Ⅲ、Ⅳ组同一时点比较,*P0.05;Ⅲ、Ⅳ组同一组内比较,#P0.05。图1各组血清中ALT、AST的比较结果见表1:Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的ALT、AST测定结果同S组比较,均有极显著差异(P0.01);与Ⅱ组比较,ⅢB、ⅢC、ⅣB显著低于ⅡA(P0.05),ⅣC明显低于ⅡA(P0.01);Ⅲ、Ⅳ组同一时点比较,ⅣC显著低于ⅢC(P0.05);Ⅲ、Ⅳ组内比较,ⅣC显著低于ⅣB(P0.05)。结果见表2:S组与ⅡA、ⅢB、ⅢC、ⅢD、ⅣA、ⅣB、ⅣD组比较均有差异(P0.05或P0.01),ⅣC与S组无差异(P0.05);同Ⅱ组比较,ⅢB、ⅢC、ⅣB均显著高于Ⅱ组的GSH-Px值或显著低于Ⅱ组MDA值(P0.05),ⅣC明显高于Ⅱ组的GSH-Px值或低于Ⅱ组的MDA值(P7伤,对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要的作用,保护细HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYAug.2003,Vol.26No.4・・0.01);Ⅲ、Ⅳ组同一时点比较,ⅣC显著高于ⅣB的GSH-Px值或低于ⅣB的MDA值(P0.05)。表2肝组织中GSH-Px、MDA含量测定结果(x±s,n=6)组别时点GSH-PX(K)MDA(NU/mgprot)S(假手术)组29.4±6.80.38±0.06Ⅱ(缺血)组A10.8±4.70.76±0.05肝脏缺血30min再灌注30min、60min两组GSH-Px显著升高(用药组I30min再灌注60min则明显升高),而MDA则显著降低(用药组I30min再灌注60min则明显降低),同S组比较无显著差异(P0.05);并且在肝脏缺血组及再灌注120min组,GSH-Px含量明显降低,而MDA含量明显升高(用药组亦然),同S组比较有明显差异(P0.01)。这提示Ⅲ(缺血再灌注)组BCDⅣ(用药)组AB21.4±7.2△23.5±6.5△11.5±5.211.1±5.223.5±7.2△0.55±0.08△0.50±0.06△0.70±0.040.75±0.040.50±0.04△在肝I/R缺血期及I/R晚期,大量氧自由基入血;激活中性粒细胞,导致机体氧化与抗氧化平衡失调,血液及肝组织中抗氧化物质GSH-Px等被大量消耗,而脂质过氧化产物MDA大量生成,这是造成肝损害的主要因素之一,可能与缺CD27.9±3.1△△*12.5±3.7#0.39±0.03△*#0.70±0.03血期内皮细胞功能障碍,NO产生与释放减少以及再灌注晚期L-精氨酸(NO供体)跨膜转运受抑[4]有关。而在肝F(GSH-Px)=32.45,P0.01,F(MDA)=2.76,P0.05图2-1肝组织中各组GSH-Px含量的比较图2-2肝组织中各组MDA含量的比较3讨论一氧化氮(NO)是一种具有多种生物活性的小分子物质,是近年来生命科学研究领域中热点课题之一,参与多种生理及病理过程。近几年的研究发现,NO与肝移植关系密切,涉及到缺血及再灌注损伤,排斥反应,血流动力学变化,移植后并发症等多个环节[2],因此研究NO在肝脏缺血再灌注致损伤中作用应是一件十分有意义的事情。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽(GSH),对过氧化氢的还原反应,保护细胞不受毒性氧自由基的损[3]胞膜结构和功能完整的作用。MDA的含量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤程度。MDA的测定与GSH-Px的测定相互配合,GSH-Px活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而MDA的高低又间接I30min再灌注30min、I30min再灌注60min两组GSH-Px含量显著升高,MDA含量显著降低,并且L-Arg组在肝I30min再灌注60min组GSH-Px明显升高,MDA含明显降低,接近假手术S组,这说明NO可以有效对抗氧自由基活性,提高机体的抗氧化能力,减轻膜结构的脂质过氧化损害,保护肝细胞结构与功能的完整,对肝脏起到保护作用。本实验以ALT、AST作为肝功能的检测指标,结果显示,在肝脏缺血及再灌注120min组(L-Arg组此期间亦然),ALT、AST值明显升高,同S组比较有明显差异(P0.01),表明在肝缺血期及再灌注晚期肝组织遭受氧自由基,中性粒细胞及炎性介质损伤,细胞膜通透性增加,胞浆内的各种生物酶类通过细胞膜入血,在肝缺血30min再灌注30min、再灌注60minALT、AST值同肝缺血组及再灌注120min组比较,有显著降低(P0.05),并且L-Arg组此期间同时点比较又有显著降低,尤其以L-Arg组再灌注60min时点降低明显(P0.01),这表明在肝脏I/R早中期,NO可改善与肝功能有关的各项酶学指标,说明NO可保护细胞膜性结构的稳定性,对肝I/R导致损伤有保护作用。以上实验说明,一氧化氮对肝缺血再灌注致损伤具有保护作用,其机制与抗氧自由基活性及其引发的脂质过氧化反应、改善细胞能量供给等有关。参考文献:[1]BenediktH.JPannen,FeridAL-Adili,MichaelBauter,etal.Roleofendothelinsandnitricoxideinhepaticreperfusioninjuryintherat[J].Hepatology,1998,27(3):755～764[2]YoshizumiT,Yanagak,Soejimay,etal.Ameliorationofliverin-jurybyischemicpreconditioning[J].BrJsury1998,85(12):1636～1640[3]MitsuokaH,SuzukiS,SakaguchiT,etal.Contributionofen-dothelintomicrocirculatoryimpairmentintotalhepaticischemiaandreperfusioninjury[J].Transplantation,1999,67(5):514～520[4]王万铁,林丽娜.脂质过氧化反应在家兔肝缺血再灌注损伤中的作用[J].中国应用生理学杂志,1998,14(3):214～216(2003-06-15收稿)反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。实验结果显示,作者简介:汪飞(1973～)男,黑龙江泰来人,在读硕士研究生。(下转第8页)8・・黑龙江医药科学2003年8月第26卷第4期额颞部继发性脑损伤病人临床救治分析顾志成1,刘长林2,杨丙铎3,李晓飞1(1.佳木斯大学一附院,黑龙江佳木斯154003;2.伊春市西林区人民医院,黑龙江伊春153000;3.鸡西市人民医院脑外科,黑龙江鸡西158100)关键词:额颞部;继发性脑损伤中图分类号:R651.1+5文献标识码:B文章编号:1008-0104(2003)04-0008-01额颞部继发性脑内血肿、水肿可造成脑组织移位,使垂体柄及门脉血管受到牵拉损伤。还因灰结节下移疝入鞍膈开口内,使门脉血管在鞍膈的游离缘受压而发生垂体前叶梗塞坏死;下丘脑移位使供给下丘脑的血管损伤而发生循环障碍,使下丘脑发生梗塞坏死。从而引起脑肿胀,颅内压进一步增高,形成恶性循环。故采用外科综合治疗,打断这一恶性循环,是改善预后的关键。我科于2002年共收治外伤性额颞部脑挫裂伤、脑内血肿病人共计37例,现报道如下。1临床资料1.1一般资料37例中男29例,女8例,年龄6～70岁。病因:车祸20例,坠落伤15例,他人打伤2例。受力部位枕部21例,额颞部13例,不详3例。格拉斯哥打分13分以上8例