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1桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死bFGF表达及微循环影响的实验研究专业:中医骨伤科学研究生:杜传宝导师:齐振熙教授摘要目的：通过观察桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactorbFGF）表达的影响，同时对比研究桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死模型兔股骨头局部微血管密度和血液流变学的影响，进一步阐明活血化瘀法对激素性股骨头缺血性坏死的防治机理，为该方法的临床推广应用提供理论依据。方法：60只健康成年新西兰大白兔，首先随机分为两组：正常组6只和实验组54只，实验组每周2次臀肌注射醋酸氢化泼尼松7.5mg/kg，经6周诱导出激素性股骨头缺血性坏死的早期模型；正常组每周2次臀肌注射同等剂量的生理盐水。6周后处死正常组6只和实验组6只，进行电镜观察，确定造模成功；将剩余实验动物随机分为中药治疗组和激素对照组：中药治疗组以桃红四物汤7ml/kg治疗，一日一次，激素对照组以生理盐水7ml/kg治疗，一日一次。并分别于治疗后第1、2、4周全部处死取材。进行组织病理观察、血液流变学、血清bFGF含量和股骨头局部微血管密度的检测。结果：①电镜观察：实验组骨细胞数量减少，退变固缩或出现脂滴，成骨细胞减少，髓内脂肪细胞增大，正常组骨细胞富含粗面内质网，多聚核糖体多，线粒体发达，嵴结构清晰,核异染色质丰富，核仁可见。②组织病理学观察：激素对照组空缺骨陷窝数明显增多，骨小梁稀疏，髓腔脂肪细胞增大、增多；中药治疗组空缺骨陷窝数减少，骨小梁增多、增密。③血液流变学检测：激素对照组全血高切和低切粘度、血浆粘度、红细胞压积、纤维蛋白原含量等明显高于中药治疗组，并且，随着中药治疗时间的延长，中药治疗组血液流变学趋于正常，与激素对照组的差异更明显。④放射免疫检测血清bFGF的表达：中药治疗组bFGF的表达增强，与激素对照组相比有明显差异(p0.01)。⑤免疫组化检测股骨头局部血管密度的改变：中药治疗组股骨头局部血管密度逐渐增高，激素对照组股骨头局部微血管密度较中药治疗组明显减低。结论：短期内大剂量使用激素，可以引起股骨头缺血性坏死，实验动物股骨头局部骨组织、骨细胞发生异常改变，血液流变学异常。桃红四物汤的使用可使激素性股骨头缺血性坏死模型兔bFGF的表达增强，从而可以有效促进微血管的再生，增加局部微血管密2度；同时，桃红四物汤可明显纠正激素性股骨头缺血性坏死模型动物血液流变学异常，降低血液粘稠度，改善局部微循环障碍状态，促进激素性股骨头缺血性坏死的修复，这可能是活血化瘀法防治该病的机理之一。基金项目：福建省科技三项费用重点项目（编号：2005K053）主题词：桃红四物汤/治疗应用股骨头坏死/中药疗法股骨头坏死/病理学碱性成纤维生长因子3TheEffectOnBasicFibroblastGrowthFactorandMicrocirculationofGlucocorticoid-inducedAvascularNecrosisofFemoralHeadinRabbitsByTreatmentofTaoHongSiWuDecoctionMajor:OrthopaedicsandTraumatologyofTCMPostgraduate:ChuanbaoDuTutor:QiZhenXiABSTRACTPurpose:Toinvestigatetheeffectonbasicfibroblastgrowthfactor、microvesseldensityandhemorheologyofglucocorticoid-inducedavascularnecrosisoffemoralheadinrabbitsbytreatmentoftaohongsiwudecoction.Tointerpretthemechanismoftheeffectonglucocorticoid-inducedavascularnecrosisoffemoralheadbyactivatingbloodcirculation,andofferaeffectivemethodtoclinical.Method:60rabbitswererandomlydividedinto2groups:6rabbitswereincommongroupand54rabbitswereinexperimentalgroup.therabbitsincommongroupwereasnormalcontrol;therabbitsinexperimentalgroupwereadministeredwithhydroxyprednisonethroughgluteusinjection(twiceaweek)for6weeksascontrol;therewere6rabbitswerekilledineachgroupafter6weeks,tobeassurethatthemodelweresucced.Allsurplusrabbitsweredividedintohealinggroupandcontrolgroup:thehealinggroupwereadministratedwithtaohongsiwudecoction7ml/kgperday,thecontrolgroupwereadministratedwithsodiumchloride7ml/kgperday.then,after1、2and4weeks,killedtheanimal.anddetectedallindexes.Results:①theresultelectronmicroscopeshowed:intheexperimentgroup,bonecelldecreased,cataplasisedandpyknosised,lipiddropletemerged,thenumberofosteoblastdecreased,adipocytesinthecamerapulpiaccreted,bonecellsinthecommongroupcontainedlargenumberofroughendoplasmicreticulumandpolysome,bioblastbecameprosperous,thearchitectureofthecristawaslampros,kernelheterochromatinwereplentiful,nucleoluscouldbeseen.②histomorphologicmeasurementsshowedthatemptylacunaincreasedandtrabeculaofbonedecreasedmoresignificantlyincontrolgroupsandthanthoseinhealing4groupandthemedullarycavitylipocytesincontrolgroupshowedlargersizeandmoreamountthanthoseinhealinggroup.③wholebloodviscosity,plasmaviscosityandfibrinincontrolgroupsincreasedsignificantlycomparedwiththoseinhealinggroups.④theexpressionofbFGFinserummeasuredbyradioimmunityreinforcedsignificantlyinhealinggroupscomparedwithcontrolgroups.⑤microvesseldensity(MVD)detectedbyimmunohistochemistry:theMVDoffemoralheadinhealinggroupsincreaseddaybyday,theMVDoffemoralheadincontrolgroupsdegradedsignificantlycomparedwithhealinggroups.Conclusion:Theadministrationoflargedoseglucocorticoidcaninducedavacularnecrosisoffemoralhead.thebonetissueandthebonecellofthefemoralheadandthehemorheologywerechangedabnormality.theconditioncouldbeimprovedandtheexpressionofbFGFcouldbereinforcedbytaohongsiwudecoction,atthesametime,itfacilitedtheregenerationofcapillaryvesselandimprovedtheconditionofmicrocirculation,maybethatwasonereasonwhytaohongsiwudecoctioneffectonglucocorticoid-inducedavacularnecrosisoffemoralhead.MeSHWord:TaoHongSiWuDecoction/therapeuticuseAvascularNecrosisofFemoralHead/ChineseherbAvascularNecrosisofFemoralHead/pathologyBasicFibroblastGrowthFactorMicrovesselDensity5桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死bFGF表达及微循环影响的实验研究专业:中医骨伤科学研究生:杜传宝导师:齐振熙教授前言自1957年Pietrogrande和Mastromarino报告首例由于治疗天疱疮，连续四年服用肾上腺皮质类固醇激素（以下简称激素）而发生股骨头软骨下骨坏死的病例以来，长期使用或间断大量使用激素引起的骨缺血性坏死已逐渐为人们所重视。激素引起的股骨头缺血性坏死病例日益增多，有超过创伤性因素而占成人特发性股骨头坏死首位的趋势，加之损害大，后果严重，因此对本病的早期防治研究是目前骨科界重大课题之一[1]。该病有显著的临床特征，多发于年轻人，常累及双侧，早期隐袭性发病，无典型的症状、体征及X线表现，误诊率高，到出现明显的关节疼痛和活动受限时，往往已发生不同程度的股骨头变形及骨关节炎，可导致终生残废，严重影响患者的生活质量和劳动力。因此，积极的病因预防、早期正确诊断和早期有效治疗有非常重要的意义，采取一切有效措施，改善股骨头的血液循环，阻止骨坏死，促进骨修复，消除或改善患者的功能障碍，使患者在医学、社会、职业和经济能力上获得恢复。现代医学以手术治疗为主，如股骨头髓芯减压术、滑膜切除术、血管束植入术、带血供的骨瓣移植术、异体骨软骨移植术、粗隆间旋转截骨术、人工髋关节置换术等，但手术创伤大，并发症多，方法虽多，但尚没有一种比较理想的方法。祖国医学认为，激素性股骨头缺血性坏死是由于正气不足，邪气侵袭，引起瘀血阻滞，湿热浸淫，最终导致肾精亏虚，筋骨失养而成，属“骨痹”、“骨痿”、“骨蚀”的范畴。治疗上从整体观念出发，辨病与辨证结合，内外兼治，采用活血化瘀、补肾壮骨、渗湿化痰、通气行痹，温通法、温补法等方法取得了良好的疗效，积累了丰富的临床经验。实践证明，中医药疗法在早期防治激素性股骨头缺血性坏死方面有很大的优势，可明显降低其远期危害，是一种无损伤、疗效确切的方法。相关动物模型的实验研究也表明，中药能够确实有效地阻止和逆转早期激素性股骨头缺血性坏死的发生和发展。我们既往的研究也已经证实[2]，活血化瘀法对激素性股骨头缺血性坏死早期有明显的防治作用，因而我们进一步研究活血化瘀法对碱性成纤维细胞生长因子的影响，探讨活血化瘀法防治激素性股骨头缺血性坏死的机理。6材料和方法1.实验动物及饲养健康成年新