β-乳球蛋白修饰

β-乳球蛋白修饰将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1MNaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。3-羟基-邻苯二甲酸酐修饰乳清蛋白南方医科大学学报第31卷P1176乳清蛋白（OVA），3-羟基-邻苯二甲酸酐HP，二甲基亚飒DMSOHP-OVA的制备（化学修饰）配制20mg/ml的OVA溶液（pH8.50.1mol/L的磷酸钠溶液），将饱和的3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶液分成5等分，每间隔12分钟加入OVA中，振荡混匀，滴加1MNaOH调节溶液维持pH为8.5，置室温1小时，然后pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。专利修饰种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：将3-羟基-邻苯二甲酸酐（3-hydroxyphthalicanhydride，缩写HP）溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠（应该是磷酸盐缓冲液）溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，每次加完后用1MNaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4磷酸缓冲溶液PBS在4度透析过夜，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可制得成品。1.一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是包括以下步骤：将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1MNaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可按照常规方法制成各种剂型的成品。2.根据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白从牛奶中分离及纯化得到。3.根据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白用鸡血清蛋白OVA、兔血清蛋白RSA、猪血清白蛋白PSA、冷水鱼皮明胶G-FS、猪皮明胶G-PS代替。4.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的3-羟基-邻苯二甲酸酐用3-羟基-邻苯二甲酸酐的衍生物、琥珀酸酐、马来酸酐代替。5.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的剂型为凝胶制剂、膏霜剂、喷雾剂、搽洗剂、盥洗剂。ChemicalmodificationofB-LG.B-LG(111.1or11.1uMin0.1MphosphatepH8.5)wastreatedwith3HP(1.19Mindimethylformamide),addedinfivealiquots(finalconcentration,60mM)in12-minintervalsandthepHwasmaintainedat8.5.Themixture(10ml)waskeptforanother1hat25℃,dialyzedagainst4Iof0.15MNaCl,10mMphosphate,pH7.4(PBS)overnight,redialyzedfor4hwithfreshbuffer,andfilteredthrough0.45-umsyringefilters.2,4,6-trinitrobenzenesulfonicacid(TNBS)(28.4mM)wascarriedoutatpH9.0inphosphatebufferfor3hat25℃.ProteinconcentrationweredeterminedusingtheBCAProteinAssayReagentToquantitatelysineintheoriginalandthechemicallymodifiedpreparation,theyweretreatmentwithTNBSanddialyzedagainst0.1MNaHSO3.Theabsorbanceat420nm(A420)ofthedialyzedpreparationandtheirappropriatedilutionsin0.1MNaHSO3weremeasured.Quantitationoflysine,determinedfromcalibrationcurversrelatingA420valuestolysineconcentrationsinstandard,revealedthat11to14ofthe15B-LGlysinesweremodified,dependingonthe3HP/B-LGrations.Thepreparationshansimilarproperties.专利制剂配方及制法JB-蛋白千分之0.05—1卡波姆1—3%绿茶提取物0.5—2%三氯生0.1—0.3%甘油1—5%加水总蛋白测定一.合成的酸酐修饰蛋白浓度按照BCA蛋白浓度分析试剂盒的操作步骤测定，具体方法如下:(1)稀释BSA蛋白标准品，使终浓度为0，25，125，250，500，750，1000，2000ug/mL，标准品的稀释与待测蛋白样品溶液相同;(2)分别将25ul各浓度标准品和25ul待测样品加入96孔圆底细胞板中，复孔对照;(3)制备反应工作液，将ReagentA与ReagentB按50:1比例混匀;(4)每孔200ul反应工作液，轻柔震荡30s，混匀;(5)37℃孵育30min，冷却至室温，680型酶标仪测定OD562nm吸光度;(6)绘制蛋白质浓度标准曲线，根据标准曲线，计算待测样品浓度。二．TNBS法及p-HPG法测定蛋白的酸酐修饰比率，及检测正电荷氨基--酸赖氨酸和精氨酸残基的被修饰率赖氨酸残基检测采用2，4，6一三硝基苯磺酸(TNBS)检测修饰后蛋白末端的赖氨酸残基被相应酸酐修饰的比率。（1）系列稀释的待测酸配修饰蛋白样品与阴性对照未修饰的蛋白各25ul加入96孔圆底细胞培养板中，空白对照孔加入25ul/孔0.1M磷酸钠溶液;（2）25ul/孔的0.1M四硼酸钠Na2B4O7:与各待测样品室温混匀5min;各孔加入10ul的，TNBS，室温混匀，5min;（3）加入100ul/孔的终止液(0.1MNaH2PO4;和l.5mMNa2SO3)，终止反应，测OD420nm值，根据其与阴性对照蛋白OD值差异，计算赖氨酸的修饰率。（4）赖氨酸修饰率%=[1-(OD450nm样品-OD450nm空白)/(OD450nm阴性-OD450nm空白)]x100精氨酸残基检测采用p-HPG（p-phydroxyphenylglyoxal(p-HPG)）检测合成的修饰蛋白末端的精氨酸残基被相应酸酐修饰的比率。（1）系列稀释的待测酸配修饰蛋白样品与阴性对照未修饰的蛋白各90ul加入96孔圆底细胞培养板中，空白对照孔加入90uL/孔0.1M磷酸钠溶液，调节各孔溶液pH为9.0;（2）10uL/孔50mMp-HPG，pH9.0，与各样品室温避光反应90min;（3）测0D340nm值，计算精氨酸的修饰率。（4）精氨酸修饰率%=[1-(OD450nm样品-OD450nm空白)/(OD450nm阴性-OD450nm空白)]x100