分子生物学9

四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶I（polymeraseI）位于核仁RNA聚合酶II（polymeraseII）位于核质RNA聚合酶III（polymeraseIII）位于核质四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（1）三种RNA聚合酶对转录抑制剂的反应-鹅膏蕈碱（-amanitin）抑制polymeraseII（低浓度）抑制polymeraseII和polymeraseIII（高浓度）放线菌素D（actinomycinD）抑制polymeraseIhnRNA:heterogeneousnuclearRNA(核不均一RNA)snRNA:smallnuclearRNA(核小分子RNA)四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（2）真核RNA聚合酶的亚基组成PolymeraseI、II、III都由多个亚基组成均有两个较大的亚基（100kD）另有多个较小的亚基（大部分50kD）三种聚合酶都有一些共有亚基（commonsubunit）以酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的PolII为参照：Rpb5、Rpb6、Rpb8、Rpb10、Rpb12LargesubunitsCommonsubunits四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构研究得比较清楚的一种有12个亚基（Saccharomycescerevisiae中）Rpb1、Rpb2、Rpb3、Rpb4、Rpb5、Rpb6、Rpb7、Rpb8、Rpb9、Rpb10、Rpb11、Rpb12Rpb:RNApolymeraseB(II)Stoichiometry:化学计量（当量）Principleofepitopetagging抗原决定部位（表位）标签法四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构核心亚基（coresubunits）Rpb1,Rpb2,Rpb3，对聚合酶的活性必不可少分别与原核RNA聚合酶的’,和亚基同源，且功能也基本相同（Rpb3在聚合酶中也是有2个拷贝）RegionsofhomologybetweenyeastRpb1andE.coli’andbetweenRpb2and四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构共有亚基（commonsubunits）与Rpb5,Rpb6,Rpb8,Rpb10,Rpb12相应的亚基，在3种RNA聚合酶中都存在在3种聚合酶中都存在，说明它们是起着十分重要的作用，但具体的功能不很清楚四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构非必需亚基（nonessentialsubunits）Rpb4,Rpb9，其基因的突变体在正常温度下仍有活力，但在较高或较低温度下则失去活力Rpb4和Rpb7（必需的亚基）与启动子的识别有关（有点像因子）Rpb9的功能不甚清楚四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构Rpb7和Rpb11另类亚基（不属于上述3类）RNA聚合酶的活性所需（Rpb7与启动子的识别有关）四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构核心亚基Rpb1的特殊之处不均一性（heterogeneity）在细胞内，有210kD和240kD两种形式（IIa和IIo）；在体外，还有180kD这种形式（IIb）与对-鹅膏蕈碱的敏感性有关RelationshipsamongthedifferentformsofRpb1Carboxylterminaldomain,CTD（羧基末端域）：ArepeatingstringofTyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-SerGeneproduct四、真核生物的基因转录及其调控1.真核生物的RNA聚合酶（3）RNA聚合酶II的结构在体内，含IIa的聚合酶II为RNApolymeraseIIA；含IIo的聚合酶II为RNApolymeraseIIORNApolymeraseIIA是与启动子结合时的形式RNApolymeraseIIO是延伸时的形式3-DstructureofyeastRNApolymeraseII