分子生物学实验课PPT--曾令江-XXXX1116

LOGO分子生物学实验课生物工程与生物技术教研室2010年11月主讲人：曾令江[e-mail]13640581292内容提要分子生物学实验----课程介绍1分子生物学实验----课程内容2分子生物学实验----课程要求3分子生物学实验----课程考核4分子生物学实验----课程准备5一、分子生物学实验—课程介绍分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快，内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课，是生命科学中公认的核心学科。分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其重要性，现已独立成一门单独学科，主要围绕能更好培养学生的动手能力和创新能力。我院从1997年开始开设本科生的分子生物学课程及其实验课，2006年该课程已列为学校重点课程建设。大三上期开设，学分1.5，27学时。二、分子生物学实验—课程内容实验一、DNA的提取及检测实验二、PCR扩增目的基因及检测实验三、目的基因片段的回收、连接实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测实验六、质粒DNA的抽提、酶切（生工专业选作）实验七、RNA的抽提与检测（生科专业选作）技术路线甘薯材料（幼苗）提取甘薯总RNA反转录成cDNA第一链提取甘薯DNAPCR扩增adk基因核心片段胶回收adk片段PCR检测筛选阳性转化子送测序及生物信息学分析连接T载体转化大肠杆菌DH5a引物设计三、分子生物学实验课—课程要求2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果，包括电泳图片、照片、电子资料等。3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。如:离心机、移液器(枪)的使用。1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间，要求准时到实验课堂。4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁小组最后收拾整理。四、分子生物学实验课—课程考核1、本课程为考查科目。总成绩为100分，由考勤、实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的20﹪、20﹪、20﹪、40﹪。2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一份实验报告。五、分子生物学实验课—课程准备1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（5班）2、分装10ul（白色）、200ul（黄色）、1000ul（蓝色）枪头并高压灭菌（2班）3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。（2班）4、配置100mlCTAB抽提液：配方见黑板。（5班）5、配制LB液体培养基400，LB固体培养基+AMP抗生素6006、研钵、液氮，抗生素配制等。实验一：甘薯DNA的提取采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。收集电泳图片实验二：PCR扩增adk基因及检测第一链cDAN的合成—用试剂盒反应体系：1:DEPC-treatedwater9ul2:oligo(dT)18primer1ul3:TemplateRNA2ul4:5×Ractionbuffer4ul5:RNaseinhibitor1ul6:10mMDntpMix2ul7:MVReverseTranscriptase1ultotalvolume20ul反应条件：1:42℃-60min;2:70℃-5min每个小组做2个50ul体系反应体系：1：MiniQH2O36.5ul2：10×PCRbuffer5ul3：25mMMgCl23ul4：10mMdNTPmix1ul5：引物1(10μM)F-ADK1ul6：引物2(10μM)R-ADK1ul7：Taq(2to5units/ul)0.5ul8：模板（cDNA）2ul终体积为50ul反应条件：I）94℃5minII）94℃45S56℃45S72℃1min（33个循环）III）72℃8min实验二：PCR扩增adk基因及检测胶回收TIANGEN公司：普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒—-离心柱型操作步骤按照试剂盒说明做。回收DNA片段与T载体连接1、连接体系：T-载体0.5ul回收片段2ul灭菌蒸馏水2.5ulSolutionⅠ5ul总体积：10ul2、连接条件：16℃连接过夜LOGO生物工程与生物技术教研室