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－－1《医用基因工程》复习思考题第一章基因和基因组及基因工程的概念一、名词概念①移动基因(插入序列；转位子)；②断裂基因；③RNA剪辑；④内含子(间隔序列)与表达子；⑤重叠基因；⑥重复序列；⑦假基因；⑧启动子与终止子；⑨起始位点、终止位点。二、讨论题1.什么叫基因?何谓基因的新概念?基因的主要功能是什么?2.一种基因一种酶的提法妥否？3.基因密码子三联体间是否存在着逗号？4.基因表达的产物中，氨基酸序列相同时，基因密码子是否一定相同？为什么？5.何谓转位子和转位作用?转位的后果如何?6.基因中最小的突变单位和重组单位是什么？7.基因工程应包括哪些内容？何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明?8.真核细胞基因组中常有内含子存在，能否在原核细胞获得表达？能，为什么？不能，为什么？第二章基因工程中常用的工具酶1.什么是限制性核酸内切酶？2.什么是R/M现象？如何解释？3.II型核酸内切酶的基本特点有哪些？4.影响II型核酸内切酶活性的因素有哪些？如何克服和避免这－－2些不利因素？5.DNA连接酶有哪两类？有何不同？6.甲基化酶有哪两类？有何应用价值？7.什么叫同尾酶、同裂酶？在基因工程中有何应用价值？8.平末端连接的方法有哪些？(图示)9.Klenow酶的特性和用途有哪些？举例说明。10.反转录酶的特性有哪些？有何应用价值？11.列举碱性磷酸酶BAP/CAP的应用之一。12.列举末端核苷酸序列转移酶的应用之一。13.质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？14.基因片段与载体的平末端连接的方法有哪些？15.用寡核苷酸和衔接物DNA的短片段连接时为使基因内部的切点保护，常用何种办法解决？第三章基因克隆载体1.基因工程常用的载体有哪5种？其共同特性如何？2.什么是质粒？质粒分哪几种？有哪两种复制类型，质粒的分子生物学特性有哪些？3.质粒存在的三种形式是什么？4.分离质粒的基本步骤有哪些？5.分离纯化质粒的方法有哪几种？简述CsCl密度梯度(浮密度)分离法、碱变性法的原理，如何选择合适的分离方法？6.作为理想质粒载体的基本条件有哪些？7.什么叫插入失活，举例说明之。8.构建pBR322质粒载体的亲本质粒有哪些？9.什么叫插入型和替换型噬菌体载体?插入型和替换型入噬菌体－－3Cosmid容纳外源DNA的最大容量是多少？10.将外源性DNA克隆到-半乳糖苷酶失活的插入型入噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？11.简述细线状噬菌体M13在基因工程中的应用。12.什么是Cos质粒、Cos位点和Cos细胞？13.什么叫cccDNA和ocDNA？14.酶母载体有哪三种类型？它们构成的成分各有哪些？什么叫穿梭载体？15.改造后的SV40载体有哪几种类型？各举例说明之。第四章目的基因的分离和克隆一、名词解释①基因组文库；②cDNA文库。二、问答1.目的基因克隆时常用哪些方法分离和获得基因？2.构建基因组库的意义及构建过程？3.构建cDNA文库的意义、常用载体及构建过程？4.目的基因与载体的连接方法有哪些？各有哪些优点？基因重组时在两个酶切位点中其中有一个不相匹配时，你如何解决连接问题？5.试述T-A克隆法的原理和用途？第五章重组DNA导入宿主细胞与转化子的筛选一、名词解释①转化；②转染；③转导；④-互补。二、问答1.重组DNA向宿主细胞的导入方法有哪些？－－42.影响CaCl2转化率的因素有那些？3.如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？4.如何利用LacZ标记基因筛选阳性克隆？5.如何从所克隆到的基因重组载体中鉴定目的基因的存在和正确性第六章外源基因在大肠杆菌中的表达调控一、名词解释①基因表达；②启动子；③操纵子；④Lac启动子；⑤Trp启动子；⑥Tac启动子；⑦RNA聚合酶；⑧转化的弱化作用；⑨核糖体结合位点(SD序列)；⑩起始密码子。二、问答1.原核表达系统常采用的启动子有哪些？Lac、Tac、trp其特点如何？2.强终止子如何发挥终止作用？弱终止子如何发挥作用？3.克隆的外源基因在大肠杆菌中表达需要的条件有哪些？4.影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？5.构建原核表达载体应具备哪些基本要素？第七章外源基因在真核细胞中表达及调控一、名词概念原病毒；锌指结构；亮氨酸拉链；RNA编辑；tk基因二、问答1.真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？2.真核表达调控的反式作用因子有哪些？其作用特点是什么？3.真核表达载体所必备的条件有哪些？真核表达载体常采用的选择标记基因有哪些？－－54.什么叫tk基因？在作选择标记基因的克隆筛选中有何应用价值？5.常用的真核病毒载体有那些？并简述其特点？6.真核细胞基因表达的过程是什么？主要有哪些调控机理？7.简述真核、原核两大表达系统的优缺点。第八章基因突变一、名词概念①突变；②基因突变；③突变体；④突变基因；⑤野生型基因；⑥无义突变；⑦错义突变；⑧同义突变；⑨区域随机诱变二、问答1.寡核苷酸介导的点突变技术的原理是什么？简述其诱变程序（最好结合图示说明之）。2.什么叫Kunkel定点诱变法？什么叫硫代磷酸的核苷酸诱变法？什么叫大引物PCR诱变法？（最好结合图示说明之）。3.基因突变技术在分子生物学研究和蛋白质工程研究中的有哪些应用?第九章基因工程技术与国民经济的关系及作用（自学从略）第十章基因工程药物的研究开发及其产业化一、名词概念①基因拼接；②基因确失；③比活性；④IFNs类似物；⑤IFNs杂合体；⑥重组病毒载体；⑦重组质粒型载体；二、问答1.基因工程药物包括哪几大类？2.基因工程药物的基本操作程序有哪几步？－－63.基因改造常用的技术手段有哪些？举例说明之。4.如何获得基因？常用的载体有哪几种？5.目的基因表达系统有哪几种？其特点如何？6.如果目的基因的基因结构中有内含子存在，而且要采用原核表达系统，你应如何分离克隆基因？7.基因工程药物的纯化常用哪些方法？杂蛋白来自何方？8.基因工程药物质量控制点要点包括哪些？第十一章基因工程疫苗的研究与开发一、名词概念①基因工程多肽疫苗；②基因重组病毒活疫苗；③基因缺失活疫苗；④基因重组多价疫苗。二、讨论题1.基因工程疫苗研究开发应遵循的原则是什么？2.基因工程疫苗有哪几种？举例说明之。3.基因工程疫苗的研究开发常用的途径是什么？(最好采用示意图回答)第十二章基因工程抗体和导向药物一、名词概念①CDR；②嵌合抗体；③单链抗体(ScFV)；④FV片段；⑤重组Fab片段。二、讨论题1.CDR1、CDR2、CDR3分别由Ig的H链及L链中哪些基因片段组成？2.人ScFV的基因组成、功能有哪些？有何优点？3.基因工程的人源化抗体的导向药物包括哪些？在疾病诊断和－－7生物治疗中有什么应用价值？4.何谓基因工程抗体的噬菌体表面呈现技术？有何价值？主要程序包括哪些？第十三章基因治疗一、名词概念①基因置换；②基因修正；③基因修饰；④基因失活；⑤基因治疗；⑥抑癌基因的基因疗法；⑦反义RNA基因疗法；⑧核酶药物自杀基因疗法；⑨反基因疗法；○10肽核酸；○11瘤苗基因疗法；○12多重耐药性(MDR)基因疗法.二、讨论题1.基因治疗所采用的基因转移方法有哪些？简要说明之。2.病毒载体转移基因有何特点？3.肿瘤基因治疗有哪些方法？简要说明之。4.药物自杀基因的基因治疗原理、种类和应用如何？5.抗病毒基因治疗的方法有哪些？简要说明之。6.有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其作用原理。7.基因治疗的策略包括哪些？第十四章转基因动物和动物克隆一、名词概念转基因动物；转基因的“动物药厂”；乳腺反应器；动物克隆；基因敲除；ES细胞二、讨论题1.何谓转基因动物？举例说明。2.转基因动物在培育新物种和基因制药方面有什么应用价－－8值？3.靶向性基因敲除小鼠模型实施步骤有哪些？4.何谓动物克隆技术？有何应用价值？5.你对“克隆人”有何看法？