北京清大天一生物技术有限公司北京清大天一生物技术有...

低低低低低低低低血血血血血血血血清清清清清清清清MMEEMM培培培培培培培培养养养养养养养养基基基基基基基基使使使使使使使使用用用用用用用用手手手手手手手手册册册册册册册册2008北京清大天一生物技术有限公司北京清大天一生物技术有限公司北京清大天一生物技术有限公司北京清大天一生物技术有限公司BEIJINGTSINGHUASKYWINGBIOTECHCo.,LTD.IIttiissnnoottjjuusstttthheemmeeddiiuumm,,iittiisstthheesseerrvviiccee..TTMM目目目目录录录录低血清MEM培养基简介........................................................................................................................................1低血清MEM培养基使用范围................................................................................................................................1低血清MEM培养基使用特点................................................................................................................................2低血清MEM培养基使用效果................................................................................................................................2低血清MEM培养基配制程序................................................................................................................................5低血清MEM培养基配制注意事项........................................................................................................................5低血清MEM培养基低血清培养BHK21细胞程序..............................................................................................6低血清MEM培养基低血清培养BHK21细胞注意事项......................................................................................6附录1.低血清MEM培养基使用说明书..............................................................................................................8附录2.低血清MEM培养基pH/渗透压对照表...................................................................................................9附录3.参考文献...................................................................................................................................................10牛血清在细胞培养中的作用及产生的常见问题..........................................................................................10BHK21细胞低血清培养基的适应和低血清培养.......................................................................................15接种密度对BHK21细胞在MEM-SLM培养液中生长的影响..................................................................18不同血清浓度的低血清培养基培养BHK21细胞繁殖口蹄疫病毒的试验研究.......................................22Vero细胞、BHK21细胞的低血清培养和高密度培养研究........................................................................25不同培养基在猪伪狂犬病活疫苗生产中的应用研究..................................................................................31低血清低血清低血清低血清MEM培养基简介培养基简介培养基简介培养基简介低血清MEM培养基（产品序号：MD611）是北京清大天一生物技术有限公司，为BHK21细胞培养设计开发的个性化低血清细胞培养基，可支持BHK21细胞的低血清生长。使用MD611低血清MEM培养基培养BHK21细胞，血清含量可降低到3％～4％，细胞传代分种比例和生长状况良好，可实现低血清培养BHK21细胞工业化转瓶生产，是目前国内唯一一种企业大规模使用的产业化的BHK21细胞低血清培养基。MD611低血清MEM培养基是基于传统MEM培养基配方的改良培养基，通过调整培养基中主要营养成分的种类、比例、含量，支持BHK21细胞低血清培养。MD611低血清MEM培养基配方成分中，不含任何血清替代物、动物来源蛋白、植物蛋白，具有良好的使用安全性。使用MD611低血清MEM培养基低血清培养BHK21细胞，降低培养细胞的血清使用量，有益于减少血清成分以及血清中潜在外源病毒对产品质量的危害，可提高产品质量。使用MD611低血清MEM培养基低血清培养BHK21细胞，在降低血清的情况下，能提高细胞传代分种比例，并提高病毒产率，可降低产品生产成本。MD611低血清MEM培养基为粉末培养基，包装规格为50L/包。与传统的MEM培养基比较，配制使用方法基本相同，使用方法简单方便。MD611低血清MEM培养基的生产、检验严格执行GMP和ISO9001管理体系，产品质量符合国家化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》要求，产品质量稳定可靠。低血清低血清低血清低血清MEM培养基使用范围培养基使用范围培养基使用范围培养基使用范围MD611低血清MEM培养基为BHK21细胞低血清培养的专用个性化培养基。MD611低血清MEM培养基可用于口蹄疫疫苗、兽用狂犬病疫苗等疫苗生产中BHK21细胞制备，BHK21细胞可使用方瓶、3L转瓶、以及15L转瓶培养。与传统MEM培养基比较，使用MD611低血清MEM培养基培养BHK21细胞，培养血清含量可降低为3％～4％，可提高细胞传代分种比例、减少细胞培养时间、提高BHK21细胞活力，适用于BHK21细胞建库、种细胞复苏传代、以及细胞生产制备。MD611低血清MEM培养基可用于口蹄疫疫苗生产中口蹄疫病毒制备，用MD611低血清MEM培养基替代传统的口蹄疫病毒培养维持液（乳欧液），可提高口蹄疫病毒滴度，适用于口蹄疫病毒种毒制备，以及病毒培养液的生产。MD611低血清MEM培养基可用于兽用狂犬病疫苗生产中狂犬病毒制备，适用于狂犬病毒毒种制备，以及病毒培养液的生产。MD611低血清MEM培养基支持高密度BHK21细胞悬浮培养，可使用摇瓶或生物反应器悬浮培养BHK21悬浮适应细胞株，细胞生长良好。MD611低血清MEM培养基支持生物反应器微载体贴壁培养BHK21细胞，细胞能良好生长。低血清MEM培养基可用于各种基于BHK21细胞的科研和检验，用MD611低血清MEM培养基培养制备BHK21细胞，细胞具有生长旺盛、活力强等优点，有利于提高科研和检验工作的方便性和可靠性。MD611低血清MEM培养基还适用于其他用MEM培养基培养的细胞，如鸡胚成纤维细胞的低血清培养，用于猪伪狂犬病活疫苗生产。低血清低血清低血清低血清MEM培养基培养基培养基培养基使用使用使用使用特点特点特点特点MD611低血清MEM培养基为BHK21细胞低血清培养的专用个性化培养基，其培养BHK21细胞具有以下特点：
支持低血清培养，血清含量可降低到3％～4％，降低了培养液成本。
减少血清使用量，降低接种副反应，提高产品质量。
不含血清替代物、动物来源蛋白、以及植物蛋白、酵母水解物，具有使用安全性。
细胞生长旺盛，生长速度快。
细胞培养形态健壮、稳定，细胞活力强。
具有较高分种比率，方瓶静止培养分种比例可达1:10～1:12，转瓶培养分种比例可达1:8～1:9，甚至更高，提高细胞产量50%。
减少BHK21细胞培养时间，细胞培养48小时即可传代。设备利用率得到提高，增加了生产能力。
细胞易培养，可提高细胞培养的稳定性。
提高病毒产率和产量。
细胞培养阶段不需要使用水解乳蛋白。低血清低血清低血清低血清MEM培养基培养基培养基培养基使用使用使用使用效果效果效果效果采用分阶段驯化法驯化BHK21细胞适应MD611低血清MEM培养基，经5～6代后细胞逐渐适应，可建立生产用细胞种子库。已适应MD611的BHK21细胞在血清含量大于2％的情况下均能稳定传代，连续传代均在30代以上，能够满足生产需要。MD611低血清低血清低血清低血清MEM培养基培养基培养基培养基低血清低血清低血清低血清方瓶培养方瓶培养方瓶培养方瓶培养BHK21细胞细胞细胞细胞使用MD611低血清MEM培养基，在T75细胞培养瓶中，低血清（3％血清含量）培养BHK21细胞，细胞轮廓清晰并具有较强立体感，形态良好，细胞生长旺盛，可以大分种比例进行细胞传代培养。以1:10分种比例进行细胞传代培养，接种培养4小时，细胞开始贴壁伸展；培养18小时，细胞进入快速生长期；培养24小时，生长为单层细胞；培养48小时，细胞生长为致密单层。细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养4小时小时小时小时BHK21细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养18小时小时小时小时BHK21细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养24小时小时小时小时BHK21细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养48小时小时小时小时MD611低血清低血清低血清低血清MEM培养基培养基培养基培养基低血清培养低血清培养低血清培养低血清培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗细胞生产口蹄疫疫苗细胞生产口蹄疫疫苗细胞生产口蹄疫疫苗以MD611低血清MEM培养基低血清培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗，BHK21细胞可连续传代30代以上，培养细胞生长数量与传统MEM（10％血清含量）培养基培养效果相当。（见表1）接种口蹄疫病毒后，MD611低血清MEM培养基