ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验

ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验1.实验目的1.1了解多功能酶标仪的应用范围和基本结构及其操作方法1.2掌握ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验原理2实验原理：2.1仪器基本原理酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本，该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上。光电检测器将透射过待测标本后强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大、对数放大、模数转换等处理后，送入微处理器进行数据处理，转换成相应的浓度，最后由显示器和打印机输出结果。2.2ORAC实验原理ORAC是氧自由基吸收能力（oxygenradicalabsorbancecapacity）的缩写，也被称为抗氧化能力指数，ORAC分析法中的自由基主要来源于偶氮化合物2，2'-偶氮-双-（2-脒基丙烷）氯化二氢[2，2'-azobis（2-amidinopropane）dihydrochloride，AAPH]热分解产生的过氧化氢自由基，也可以是芬顿(Fenton)反应过程中产生的羟自由基，以荧光素钠（sodiumflourescein，FL）为荧光探针，观察自由基与荧光探针作用后，探针荧光强度的衰退过程，以水溶性维生素E类似物(6-hydro-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid，Trolox)作为抗氧化标准物质，检测体系中各种抗氧化剂延缓探针荧光强度衰退的能力，以此评价抗氧化剂的抗氧化能力。3仪器及试剂3.1仪器及配件Enspire多功能酶标仪，96孔荧光板3.2试剂3.2.1磷酸盐缓冲液的制备：精密量取适量磷酸，以高纯水稀释得到75mmol/L磷酸溶液；称取8.56g磷酸氢二钾以高纯水500mL溶解，以磷酸溶液调pH7.4，即得75mmol/LpH7.4的磷酸盐缓冲液。3.2.2AAPH溶液的制备：精密称取AAPH207mg，以磷酸盐缓冲液溶解并定容至5mL量瓶，即得浓度为153mmol/L的AAPH溶液。3.2.3FL溶液的制备：精密称取FL40mg，以磷酸盐缓冲液溶解，制成4125mmol/L的FL溶液，记为FL母液a。精密吸取FL母液a50uL置50mL量瓶中，以上述缓冲液定容至刻度，记为FL母液b；FL母液a，b均于4℃冷藏。实验时精密吸取FL母液b500uL置25mL量瓶中，以上述缓冲液定容至刻度，即得8*10-5mmol/L的稀释液。3.2.4样品溶液的制备：精密称取虾青素样品适量，以甲醇溶解，配制成1mg/mL的化合物母液，继而以缓冲液稀释制成10，50，100ug/mL的化合物溶液。4实验内容4.1样品量效曲线的确定：精密吸取FL稀释液100uL于96孔荧光板中，随后加入不同浓度样品溶液50uL振荡5min，37℃温育10min后迅速加入AAPH液50uL启动反应。以激发波长485nm，发射波长535nm进行测定并记录荧光值，反应过程中每隔1.5min测定一次荧光值（记为Fn）。以测定时间为横坐标，荧光值为纵坐标绘制不同浓度虾青素荧光衰变曲线。5仪器操作步骤5.1开机5.2设定程序5.3放置样品5.4结果分析6实验报告内容：1）目的2）原理3）简单操作步骤4）实验结果5）心得体会（多功能酶标仪的应用）