搜索
福林酚测定法标准操作规程文件编码：SOP·ZL·09·QC·005·02第1页共2页1目的建立福林酚测定法，保证蛋白质含量检查有章可循。2范围适用于福林酚测定法的标准操作。3内容3.1制定依据《中华人民共和国药典》2015年版四部附录第96页3.2简述3.2.1本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。3.2.2本法灵敏度高，测定范围通常可达20～250g。本法干扰物质较多，对双缩脲反应产生干扰的离子，同样容易干扰福林酚反应，且影响还要大。还原物质、酚类、枸橼酸、硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。3.3试药氢氧化钠、碳酸钠、酒石酸钾、硫酸铜、钨酸钠、钼酸钠、磷酸、硫酸锂、盐酸、溴3.4仪器恒温水浴箱3.5用具具塞试管3.6试液详见《试液与试纸配制标准操作规程》3.7操作法3.7.1对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液。3.7.2供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备（蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致）。福林酚测定法标准操作规程文件编码：SOP·ZL·09·QC·005·02第2页共2页3.7.3测定法精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml(对照品溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整)，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液[取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16]4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照《紫外-分光光度法标准操作规程》在650nm的波长处测定吸收度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液适量，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。4附件无5培训培训部门：质量部培训对象：QC成员6变更历史变更前版本号变更后版本号变更原因变更批准日期SOP·ZL·09·QC·005·01SOP·ZL·09·QC·005·02执行2015年版药典2015年10月30日