PCR仪检测操作规程

1/3PCR仪检测操作规程第001版编制：一审：二审：批准：受控状态：文件分发号：发布日期：生效日期：2/3PCR仪检测操作规程1目的规范PCR仪检测方法和过程。2范围适用于PCR仪的检测。3实验仪器3.1PCR仪：ABI2720，伯乐T-100。3.2移液器：单道：10ul，100ul，200ul，1000ul。八道：10ul。3.3电泳仪；3.4凝胶成像仪；3.5离心机：5810R4实验试剂、耗材4.196孔板，酶标板，封口膜，橡胶垫。4.2超纯水、DNTP、rTaq酶、10*buffer、扩增模板（约30ng）、正向引物（5p）、反向引物（5P）、琼脂糖、TAE、溴酚黄。5实验流程5.1配置MIX，配置比例如下：（100个孔）试剂名称使用量10*buffer50μlDNTP40μlrTaq酶2.5μl扩增模板（约30ng）10μl正向引物（5p）10μl反向引物（5P）10μl超纯水377.5μl注：事先把要用的试剂4度解冻后使用。5.2将配置好的MIX充分混匀后加入96孔板内，每孔5ul，加封口膜，3000rpm1min离心。5.3查看加液量是否足够，将离心后的96孔板更换橡胶垫，上待检测的PCR仪。程序如下：3/3温度时间备注95℃5min95℃30s30cs55℃30s72℃2min72℃10min4℃∞5.4程序完成后，将96孔板取下，3000rpm离心1min，查看是否有蒸干现象。注：如有蒸干现象做好记录，本次检测忽略此孔结果。如蒸干空位较多，则重新操作5.1-5.35.5向96孔板内加入溴酚黄，每孔5ul。混匀后，取混合液6ul加入酶标板内，200rpm短离心5s。5.6按照《电泳操作规程》跑电泳，照相。5.7结果判定：所有孔位条带清晰可见、亮度均一，判定为PCR仪合格；反之则不合格。6相关文件7相关记录8本文件变更情况名称版次（修订后）修订内容