PCR技术原理与方法

主要内容PCR概念PCR原理PCR技术参数PCR操作步骤PCR应用PCR维护与保养一、PCR概念PCR又称聚合酶链式反应（polymerasechainreaction)，是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。二、PCR的原理在微量离心管中,加入适量的缓冲液,微量的模板DNA，4种脱氧核糖单核苷酸，耐热性多聚酶，一对合成DNA的引物，通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环，每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍，一般样品是经过30次循环，最终使基因放大了数百万倍；扩增了特异区段的DNA带。20001500100070040020012341.反应体系总体积25~100lDNA分子模板dNTP原料Primer引物Buffer缓冲液Taq酶DNA聚合酶2.循环参数94℃30”50~60℃30”~1’72℃n’94~96℃30”~5’72℃3~7min4~10℃forever25~30循环模板DNA95℃3.PCR原理动画PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点95℃50℃引物1引物2DNA引物PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第1轮结束95℃第2轮开始PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点95℃50℃72℃TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第2轮结束PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增三、PCR技术参数（以本实验PCR仪为例）杭州朗基科学仪器有限公司型号：A200序列号：001-60380模块类型：9677温度范围：0~99.9℃热盖温度：0~112℃最大升温（降温）速度：0.5℃/s旋钮热盖触摸屏通风口USB-A口手柄开关电源接口通风口USB-B口网络接口使用注意事项热盖：热盖可以降低温度来压紧反应容器，并通过加热使反应容器上部保持在比样品更高的温度以防止反应样品冷凝。（43℃）。打开热盖：关闭热盖：样品台的更换：开机与关机：（......）仪器长时间不用时拔掉电源插头。开机几秒后出现主界面。五、PCR操作步骤（以本实验室PCR仪为例）生物样品DNA片段基因诊断基因治疗基因工程产品法医学检测人类学研究……PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要五、PCR应用基因组DNA获取特定DNA片段扩增特定DNA片段1)基因克隆重组DNA质粒DNA基因片段大肠杆菌胰岛素重组体+胰岛素基因基因工程产品2)基因检测A’内源性病变基因正常人A病人病原微生物基因正常人(-)病人(+)遗传病的诊断基因缺失、插入或置换等地中海贫血珠蛋白链合成不平衡A正常人病人正常病人六、PCR维护与保养1.定期检测：半年至少1次2.温度：反应温度、实际温度；降温时间。2.样品池的清洗3.热盖的清洗4.仪器外表面的清洗5.使用注意事项：热盖、PCR管、样品台、电源、环境