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《PCR技术及其应用》课程考试试卷（硕士研究生）班级：硕士12班学号：20141100043姓名戴鹏辉得分：一、下页试题为单项选择题，请将每题的正确答案填在试卷首页的答题栏内（共50题，每题1.8分，总分90分）题号12345678910答案题号11121314151617181920答案题号21222324252627282930答案题号31323334353637383940答案题号41424344454647484950答案二、简述RACE的原理和技术(10分)21、PCR反应的五个要素是：（）①引物②dNTP③Mg离子④模板⑤水⑥TaqDNA聚合酶⑦水请选择A、①②③④⑤B、①②③④⑥C、②③④⑤⑥D、①③⑤⑥⑦2、PCR产物鉴定常用的方法是：（）A、凝胶电泳法B、杂交法C、免疫法3、PCR反应中随着复性温度升高，扩增的特异性：（）A、升高B、下降C、不变4、原位PCR技术中对组织和细胞进行固定的目的是：（）A、维持细胞形态B、创造一个既便于试剂进入细胞，又能减少产物渗出的内环境C、防止操作中的细胞移动5、增效PCR包括（）轮PCR扩增A、1B、2C、3D、越多越好6、增效PCR第一轮扩增的目的是（）①增加引物量②增加模板量③延长作用时间，降低聚合酶作用速度，以提高忠实性④阻止过多引物间的作用的二聚体的形成，提高特异性A、①③B、②④C、①②③D、④37、增效PCR第二轮扩增的目的是（）①增加模板量②提高特异性③延长非特异性条带④增加特异靶序列产量A、①③B、②④C、①②③D、④8增效PCR第一轮扩增时要求引物的量比通常其它PCR方法（）A、高B、一样C、低D、无所谓9增效PCR反应总的循环次数比其它PCR方法多的原因是（）A、为了得到更大量的产物B、为了提高特异性C、为了提高敏感性D、虽然引物总量未变，但由于分两次加入，使每次反应浓度降低了，为了得到相同的扩增产物必须增加循环次数10、膜结合PCR之所以可以对很少的模板或污染比较严重的样品进行扩增，其主要依据是：A、模板与膜固定后可以作彻底漂洗B、模板与膜结合后可以提高PCR扩增效率C、模板与膜结合后，可用不同引物先后对不同区段进入扩增D、薄膜可以吸附其它杂质从而消除污染物的影响提高信噪比11、对模板进行固定以前首先应使样品变性，其原因是：（）A、为PCR反应作准备B、使样品中的杂质变性后除去C、薄膜结合单链DNA的能力强D、提高Taq聚合酶的活力12、膜结合PCR的扩增效率比液相扩增法为：（）A、低B、高C、相同D、不一定413、膜结合PCR必须（0A、适当减少循环次数B、适当减少引物用量C、适当延长延伸反应时间D、适当增加循环次数14、膜结合PCR不能减轻下列（）样品的污染：A、蛋白质和肽类B、核酸C、脂类物质D、小分子代谢产物15、反向PCR扩增到的序列与通常PCR的差别在于：（0A、反向PCR扩增的是已知序列之间的未知，而通常PCR反应扩增的是已知序列两侧的已知序列。B、反向PCR扩增的是已知序列两侧的未知序列，而通常PCR反应扩增的是已知序列之间的序列。C、反向PCR扩增的是未知序列两侧的已知序列，而通常PCR扩增的是已知序列两侧的已知序列。D、反向PCR扩增的是已知序列，而常规PCR扩增的是未知序列。16、反向PCR之所以能扩增未知序列的原因在于：（）A、通过限制性酶切然后环化改变了序列的拓扑关系B、通过控制反应条件改变了聚合酶的聚合方向C、通过限制性酶切然后环化，改变了序列的内外关系D、设计的特殊引物改变了延伸反应方向17、反向PCR中为何要将环化的DNA分子切成结状（）A、环状双链DNA分子易于形成超螺旋结构不利于进行PCR反应B、DNA聚合酶不能有效结合环状分子C、环状双链分子使扩增的非特异性太强D、环状双链无法解链，也就无法与引物结合18、将环状DNA分子切成线性分子时要求限制性内切酶位点位于：（）A、已知序列外侧B、未知序列内侧C、已知序列内侧D、不易判断19、可在成环的DNA分子中引入切割的方法有：（）①煮沸法5②限制性酶切法③EDTA-寡核苷酸介导的特异裂解法④机械剪切法A、①③B、②④C、①②③D、④20、重组PCR的重组过程实质上发生在：（）A、体外B、体内C、体外体内都有关D、不易判断21、重组PCR能实现重组的原因在于：（）A、将要重组的核酸分子共同转化细胞，细胞自身就具有使其发生重组的功能B、将要重组的分子酶切后以人工方式拼接到一起实现重组C、在要重组的两个扩增产物端部设计上同源序列以实现同源重组D、重组实质上是一种随机交换DNA的过程，无法人为控制22、用重组PCR进行定点诱变时，通常将错配位点设计在引物的（）A、3’端B、5’端C、中部D、无法人为控制23、用重组PCR进行定点诱变时，突变位点的局限性在于：（）A、只能位于序列中部B、只能位于序列的两侧C、只能引入单个突变碱基D、只能引入两个突变碱基24、重叠延伸法不能（0A、将突变引入序列中部B、实现基因拼接C、引入多个突变碱基D、扩增未知序列并引入突变25、一般来说巢式PCR分为（）扩增循环。A、1个B、2个C、3个D、多个626、巢式PCR之所以要用两对引物分别进行扩增，原因是（0①提高扩增效率②节约试剂用量③保证反应的高特异性④简化常规PCR操作A、①③B、②④C、①②③D、④27、有关巢式一步PCR的说法中正确的是：（）①第一轮PCR引物较第二轮PCR引物短②第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度高③第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度低④第一轮PCR引物较第二轮PCR引物长A、①③B、②④C、①②③D、④28、固着PCR是：（）A、将模板与固相的琼脂糖珠相连B、将引物与薄膜固定C、将DNA聚合酶用耦联剂固定到琼脂糖珠上D、将引物用耦联剂固定到琼脂糖珠上29、固着PCR的主要优点在于（）A、扩增产物处于溶液中易于分离纯化B、便于聚合酶在高忠实性条件下进行扩增C、扩增产物与固定化的琼脂糖珠相连，便于分离D、因为引物与琼脂糖珠相连，所以可以容易把扩增产物同引物分开30、与膜结合PCR相比，固着PCR的不同点在于（0①膜结合PCR将膜板结合到膜上，而固着PCR使引物固相化②膜结合PCR便于纯化样品，而固着PCR便于纯化分离扩增产物③膜结合PCR所用引物无特殊要求，而固着PCR所用引物应能与固相底质发生耦联④两种PCR对聚合酶有不同要求A、①③B、②④C、①②③D、④731、单一特异引物PCR的通用引物可与（）配对结合。A、载体中的特定序列B、插入片段的特异序列C、载体中的非特异序列D、插入片段的非特异序列32、单一特异引物PCR的特异引物可与（）配对结合。A、载体中的特定序列B、插入片段的特异序列C、载体中的非特异序列D、插入片段的非特异序列33、单一特异引物PCR的特异性扩增体现在（）A、通用引物可与载体中的特定序列特异结合B、通用引物可与插入片段的特异序列特异结合C、特异引物可与载体中的特异序列特异结合D、特异引物可与插入片段的特异序列特异结合34、重复DNA序列引物扩增法对重复序列的要求是（）A、序列为低度重复B、序列为串边重复C、序列为散布重复D、序列为高度重复35、重复DNA序列引物扩增法得到的产物是（）A、均一的B、不均一的C、不特异的D、难以判断36、下列关于逆转录PCR的说法中不正确的是（）A、样品中混有少量DNA对扩增结果无影响B、需要将RNA逆转录成cDNA才能进行PCRC、逆转录PCR方法比其它许多RNA研究方法的灵敏度高D、逆转录PCR要求RNA比较完善37、逆转录PCR对RNA样品的要求是（）①RNA分子完整②不含DNA③不含蛋白质和其它杂质④RNA的来源有限制A、①③B、②④C、①②③D、④838、逆转录PCR反应中合成cDNA需要的引物种类有（）①随机六聚体②下游引物③寡聚（dT）④寡聚（dA）A、①③B、②④C、①②③D、④39、有关引物设计中哪一个不正确（）A、引物的跨度以180-500KB为宜B、5’和3’无回文结构C、引物最好跨越一个内含子D、上下引物的Tm值应有较大差异40、一步逆转录扩增法所依据的是（）A、新一代Taq聚合酶既具有聚合酶活性也有逆转录酶活性B、适当控制反应条件C、特殊的离子浓度D、特殊的扩增对象41、常规PCR存在的问题是（）A、加热太慢，反应不能恰开始B、PCR反应前升温过程中聚合酶产生非特异性扩增C、缓慢的升温过程使聚合本科活力不能有效出现D、加热过程破坏了引物和靶序列的结合影响聚合反应42、热启动PCR克服常规PCR问题的办法是（）①高温时加入必须的反应成份②加快加热过程③加入无活性的酶然后高温激活④改变扩增对象A、①③B、②④C、①②③D、④43、在提取核酸过程中，除去大量蛋白质的操作是（）A、煮沸B、蛋白酶KC、酚/氯仿抽提D、乙醇沉淀944、RNA应保存于：（）A、水中B、TE缓冲液C、DEPC处理的离子水中D、冻干保存45、如何监制PCR实验的污染情况？（）①设立阴性和阳性对照②重复实验③合成新引物④消毒试剂A、①③B、②④C、①②③D、④46、下列说法不正确的是：（）A、放射线不会造成核酸分子结构的破坏B、多数放射性核素半衰期较短，必须随标随用C、放射性核素与相应的元素具有完全相同的化学性质D、放射性核素的检测具有极高的特异性47、PCR进行DNA的生物素标记错误的是（）A、反应中生物素化dUTP浓度不能太高B、以重组质粒为模板，模板DNA量不能太多C、一般标记生物素化探针长度小于500bpD、琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，标记的DNA较未标记的产物泳动快48、欲减少成套寡核苷酸筛选cDNA文库的杂交阳性克隆总数应（）A、采用杂交溶剂如氯化四甲铵B、设计较短的寡核苷酸C、改变探针G+C含量D、增加简并性49、体外转录生成的RNA探针与单链DNA探针相比（）A、与靶序列杂交的效率低B、放射性标记RNA的合成效率较低C、合成高比活度全长探针的成本相对较低D、必须用凝胶电泳进行纯化50、用M13噬菌体载体合成单链DNA探针时（）A、反应中4种dNTP的浓度均大于各自的Km值时，DNA合成速率最慢10B、反应液中多种前体浓度处于低限时，增加模板量可延长产物C、为使模板分子的使用效率达到最高，引物的摩尔数必须减少D、引物延伸反应总是使用过量的酶