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XXXX医院检验科AU全自动生化仪磷SOP文件编号:页码/Pages:生效日期:版本/Revision:仪器序列号：XXXXXX起草人:日期：修改人：日期：SOP标准操作程序PHOS磷（货号：OSR6122，OSR6222）一、目的：规范磷测定的操作程序，确保磷测定的结果准确二、适用范围：在BeckmanCoulterAU分析仪上定量测定人血清中的磷（PHOS）三、临床意义在血浆和血清中，大多数磷以无机形式(Pi)存在，大约15%与蛋白结合，其余以复合物和游离形式存在。血清磷浓度取决于膳食和激素（例如甲状旁腺激素）分泌的变化。在细胞内，磷主要以磷酸酯的形式存在；一小部分，但却是很重要的一部分以无机磷酸盐的形式存在，因为它是氧化磷酸化的底物，参与与代谢能量产生有关的反应。大约85%的细胞外磷以羟基磷灰石的无机磷形式存在，因而在骨结构中发挥了重要的作用。在住院患者中，低磷酸盐血症（磷酸盐消耗）相对较为常见，高达30%的手术患者都存在该病症。低磷酸盐血症的原因包括：磷的摄入或吸收减少（例如在维生素D缺乏、吸收功能障碍、使用口服磷酸盐结合剂和原发性甲状旁腺激素过量）；排泄增加（例如在继发性甲状旁腺激素过量，肾移植后、饥饿患者重新进食）；磷的重新分布（例如静脉输入营养液，糖尿病酮症酸中毒和呼吸性碱中毒后的康复）。高磷酸盐血症的原因包括：摄入增加（例如静脉注射治疗和磷酸盐灌肠）；排泄减少（例如急性和慢性肾衰竭，低甲状旁腺激素或对甲状旁腺激素抵抗以及维生素D中毒）；磷的重新分布（例如肿瘤消散，横纹肌瘤和中暑）。四、方法原理无机磷与钼酸盐发生反应，形成杂多酸复合物。使用表面活性剂，则无需制备不含蛋白的滤液。在340/380nm处的吸光度与样本中的无机磷浓度成正比。反应原理分析参数：样本体积2.5ul吐水量0ulR1体积25ul吐水量100ulR2体积25ul吐水量100ul波长340/380方法END反应方向+读点10/27读点20/10五、标本的采集与处理5.1.受检者的准备：空腹，采集前静坐5min，如有输液，应在停止输液3min后在另一侧肢体静脉采集。5.2.静脉采血：除非是卧床病人，一般取坐位从肘部静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。5.3.抗凝剂：本室采用带分离胶的真空采血管，其中包含促凝剂。5.4.标本处理：血标本应该尽快送到实验室，室温下放置20min后即可离心，可直接用分离胶管上机。分离的血清在2-8℃可保持稳定4天；在15-25℃，可保持稳定1天。六、标本拒收标准1）严重溶血、脂血2）标本标识不明3）采血量不足2ml七、仪器与材料7.1.仪器：BeckmanCoulterAU生化分析仪7.2.试剂：BeckmanCoulterAU专用磷（PHOS）试剂【货号OSR6122或OSR6222】A.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。B.储藏和稳定性：在2-8℃不开封储藏时，试剂可保持稳定到声明的失效期；开封后，XXXX医院检验科AU全自动生化仪磷SOP文件编号:页码/Pages:生效日期:版本/Revision:仪器序列号：XXXXXX起草人:日期：修改人：日期：在分析仪上储藏时，可保持稳定30天C.参与反应成分的最终浓度：硫酸200mmol/L七钼酸铵0.35mmol/L甘氨酸50mmol/LD.此试剂作为体外诊断用；不要入口，吞下有害；如果溅入眼睛，请立即用大量清水冲洗，然后就医；避免接触皮肤，带上适当的手套；必须将试剂及其容器作为有害废物处理带上适当的手套；必须将试剂及其容器作为有害废物处理。7.3.定标品：BeckmanCoulterAU多项系统校准液SystemCalibrator，货号OE663007.4.质控液：BeckmanCoulterAU血清质控液ControlSera，货号ODC0003和ODC0004八、定标SystemCalibrator，货号OE66300。定标品PHOS的值可溯源到BeckmanCoulterMasterCalibrator详细操作步骤参见仪器操作规程定标周期30天。当发生下列情况时，重新定标分析：试剂批号改变或质控值显著变化；仪器提示需要定标时；对分析仪进行了重要的预防性维护，或更换了关键部件。九、质控在BeckmanCoulterAU生化分析仪上测定ControlSera，货号ODC0003和ODC0004按照优良实验室规范（GLP）建议，在每天检验患者样本、以及在每次进行定标/空白测定时，均应检验质控品。每天测定两个水平的质控血清。本实验室获得的结果，可能与给定的均值不同，因此实验室在根据要求运行多次后，得出特定于被分析物的质控目标值，这些目标值应在相关产品文献提供的相应可接受范围内。如果发现新的趋势或数值突然变化，应检查全部工作参数当发生下列情况时，需要再次质控：重新定标、仪器保养后十、定标及质控达不到要求10.1.查看定标报告，根据提示采取相应的措施10.2.质控达不到要求：A.对同一份质控血清进行进行重新测定B.同批号内更换质控血清进行重新测定C.更换不同批号质控血清进行重新测定D.对失控项目进行重新定标E.检查仪器参数，进行仪器保养和维护F.请示上级主管，向专家请教十一、参考范围期望值可能随着年龄、性别、样本类型、饮食和地理位置的不同而有所差异。各实验室应验证期望值对其人群的可转移性，必要时应按照优良实验室规范（GLP），测定自己实验室的参考范围。用于诊断时，应始终结合患者病史、临床检查和其他发现来评估结果。本实验室综合评估后采取以下参考范围：血清成人0.81–1.45mmol/L(2.5–4.5mg/dL)儿童1.29–2.26mmol/L(4.0–7.0mg/dL)十二、具体性能特征线性：在0.32-6.40mmol/L(1-20mg/dL)的浓度范围内，本实验呈线性。XXXX医院检验科AU全自动生化仪磷SOP文件编号:页码/Pages:生效日期:版本/Revision:仪器序列号：XXXXXX起草人:日期：修改人：日期：精密度：通过对3份血清混合物长达10天得分析，获得下列数据N=60批内检测总计平均值mmol/LSDCV%SDCV%0.960.011.030.011.551.640.010.630.021.333.360.020.610.041.23灵敏度：灵敏度为最低可检测水平代表非零PHOS的最低可测量水平。本实验室通过重复测定不含被分析物的样本20次，将其绝对平均值加上三倍标准差，得出PHOS灵敏度可达到0.10mmol/L。干扰物质：研究发现，本方法对干扰物质具有如下敏感性：黄疸：浓度达40mg/dL（合684μmol/L）的胆红素，干扰小于3%溶血：浓度达3.5g/L的血红蛋白，干扰小于10%脂血症：浓度达800mg/dL的Intralipid®，干扰小于10%十三、参考文献1、SmithAF,BeckettGJ,WalkerSW,RaePWH,eds.Lecturenotesonclinicalbiochemisty,6thed.Oxford:BlackwellScience,1998:75pp.2、EndresDB,RudeRK.Mineralandbonemetabolism.In:BurtisCA,AshwoodER,eds.Tietztextbookofclinicalchemistry.Philadelphia:WBSaundersCompany,1999;1406-1441.3、FraserD,JonesG,KoohSW,RaddeIC.Calciumandphosphatemetabolism.In:TietzNW,ed.Fundamentalsofclinicalchemistry.Philadelphia:WBSaundersCompany,1987:706pp.4、ThomasL.Phosphate.In:ThomasL,ed.Clinicallaboratorydiagnostics.Useandassessmentofclinicallaboratoryresults.Frankfurt/Main:TH-BooksVerlagsgesellschaft,1998:241-247.5、DalyJA,ErtingshausenG.Directmethodfordetermininginorganicphosphateinserumwiththe“CentrifiChem”.ClinChem1972;18(3):263-5.6、GamstO,TryK.Determinationofserum-phosphatewithoutdeproteinizationbyultravioletspectrophotometryofthephosphomolybdicacidcomplex.ScandJClinLabInvest1980;40(5):483-6.7、EhretW,HeilW,SchmittY,TöpferG,WisserH,ZawtaB,etal.Useofanticoagulantsindiagnosticlaboratoryinvestigationsandstabilityofblood,plasmaandserumsamples.WHO/DIL/LAB/99.1Rev.2:39pp.8、NCCLS.Urinalysisandcollection,transportation,andpreservationofurinespecimens;approvedguideline.NCCLSDocumentGP16-A2,2nded.Pennsylvania:NCCLS,2001.9、YoungDS.Effectsofdrugsonclinicallaboratorytests,5thed.AACCPress,2000.