TACE联合索拉非尼治疗兔VX2肝癌的实验研究

TACE联合索拉非尼治疗兔VX2肝癌的实验研究秦立东1，李金鹏21山东泰安新汶矿业集团中心医院肿瘤科，山东新泰2712332山东省医学科学院山东省肿瘤医院外九科，山东济南250117【摘要】目的探讨肝动脉化疗栓塞(TACE)联合索拉非尼治疗兔VX2肝癌的疗效。方法建立30只兔VX2肝癌模型，将其随机分成A、B、C三组，每组10只。A组为生理盐水对照组，B组为单纯TACE组，C组为TACE+索拉非尼组。分别于术前1天及术后3、7、21天行肝肾功能检查，比较治疗前后ALT及UREA的变化；分别于术前1天和术后7、21天测量肿瘤的最大径和最小径(超声)，计算肿瘤体积及肿瘤体积增长率；术后21天处死实验动物，行病理和免疫组化染色，计算肿瘤微血管密度（MVD）。结果各组干预前后UREA值差异无显著性；术后第1~3天B、C两组ALT升高明显，与A组相比有统计学差异(P0.01);治疗后7天和21天，C组肿瘤体积生长率与对照组比较，差异具有统计学意义(P0.01)。术后21天A、B、C3组肿瘤MVD分别为47.94±8.20、25.46±5.57、12.87±3.76,3组两两相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论TACE联合索拉非尼治疗兔VX2肝癌，能够抑制肿瘤生长，并提高TACE治疗的疗效，疗效优于单纯TACE。【关键词】肝肿瘤；兔X2肿瘤；肝动脉化疗栓塞；索拉非尼；瘤体积增长率；微血管密度TranshepaticArterialChemoembolizationCombinedWithSorafenibfortheTreatmentofRabbitVX2HepatomaQinLidong1，LiJinpeng21CentralhospitalofXinwenMiningGroupCo,LTD，Xintai271233，ShandongP.R.China2ShandongAcademyofMedicalSciences,TheNinthSurgicalDepartment，ShandongTumorHospital，Jinan250117，ShandongP.R.China【Abstract】ObjectiveToanalyzetheeffectivenessoftranshepaticarterialchemoembolization(TACE)combinedwithsorafenibforthetreatmentofVX2hepatomamode.MethodsTherabbitVX2hepatomamodelswererandomlydividedintothreegroups．GroupAwastreatedwithphysiologicalsalineviahepaticartery．GroupBwastreatedwithTACEonly．GroupCwastreatedwithTACEplussorafenib.Kidneyandliverfunctionweredetectedrespectivelybeforethetreatmentand1days,3daysand7daysafterthetreatmenttoanalyzetheALTandUREAchanges.Tumorvolumewasmeasuredrespectivelybeforeand7days，21daysaftertreatment.AlltherabbitswithVX2tumorwereexecutedforroutinepathologicalexaminationandCD34stainingafter21daysaftertreatment.ExpressionofCD34wasdetectedandanalyzed.ResultsChangesofUREAbeforeandaftertreatmentwerenotstatisticallysignificantineachgroup．ALTlevelroseapparentlyonthe1stdayandthe3thdayafterthetreatmentingroupBandgroupC．Comparedwiththecontrolgroup(groupA)，thedifferenceswerestatisticallysignificant(P0.05).Thesizeandgrowthrateoftumorweresignificantdifferentbetweendifferentgroups(P0.01).MVDinthegroupCwasmorelowerthantheothergroups，andthedifferencesbetweenthemwerestatisticallysignificant.MVDintheeachgroupwasasfollows:GroupA47.94±8.20，GroupB25.46±5.57，GroupC12.87±3.76.Thedifferencebetweeneachgroupwasstatisticallysignificant(P0.05).ConclusionIntreatingrabbitVX2hepaticcarcinomaTACEcombinedwithsorafenibcansignificantlyinhibittumorangiogenesisandimprovethetherapeticeffectoftheTACE.Keywords：hepatoma;RabbitVX2LiverTumor；transcatheterarterialchemoembolization；Sorafenib;grosstumorvolumegrowthrate；microvesseldensity；TACE（transcatheterarterialchemoembolization）已成为不能手术患者的首选治疗，虽在一定程度上改善了患者的预后，延长了生存期，但远期疗效并不满意[1]。有关研究表明，除术中栓塞不够彻底外，肝癌栓塞残留癌组织内VEGF的表达显著升高，从而促进MVD增高，使肿瘤得以存活，继而成为肿瘤生长、复发和转移的重要原因[2,3]。索拉非尼是一种多靶点分子靶向药物，具有抑制肿瘤细胞增殖和新生血管生成的作用。本实验采用兔VX2肝癌模型为研究对象，通过TACE联合索拉非尼治疗兔VX2肝癌，比较实验动物治疗后肝肾功能、肿瘤体积增长率、微血管密度变化情况，对其疗效进行评估。1材料与方法1.1材料健康的新西兰大白兔30只，体重2.2~2.6kg，雌雄不限（购自山东省农科院）。后腿肌肉VX2荷瘤兔2只，雌雄各1只，体重1.5～1.8kg(购自协和医科基础医学院)。索拉非尼(拜耳公司，德国)，抗CD34抗体(武汉博士德生物工程有限公司),抗兔/鼠通用型免疫组织化学检测试剂盒(上海基因技术公司提供)。1.2方法实验动物的分组及治疗方法:VX2HCC的模型建立及介入治疗方法参照文献[4]进行操作。将30只建立的VX2模型荷瘤兔，在建模成功后第21d随机分成A、B、C三组，每组10只，行TACE治疗。A组（对照组）：经皮股动脉穿刺导管内灌注等量2ml生理盐水；B组（单纯TACE组）：经皮股动脉穿刺导管内灌注表阿霉素5mg+超液态碘化油混合液lml；C组（TACE+索拉非尼组）：经皮股动脉穿刺导管内灌注表阿霉素5mg+超液态碘化油混合液1ml+口服索拉非尼(20mg/（kg.d)，持续口服给药7d。术后所有实验兔每天均经耳缘静脉注入青霉素8万单位，连续3d。术后21d后处死所有实验动物，取出肿瘤标本，将取出的肿瘤标本用10%福尔马林溶液固定，从肿瘤的周边选取生长最旺盛的部分进行石蜡包埋，制成厚度为4µm连续的切片，行HE染色及免疫组织化学(MVD)染色。肝肾功能的检查：治疗后1~3d观察建模动物有无精神不振，嗜睡，纳差拒食等现象。分别于术前1d及术后1、3、7d抽血检测谷丙转氨酶(ALT)和血清尿素(UREA)。肿瘤体积增长率：分别于术前1d和术后21d，用超声实时监测肿瘤大小、有无坏死等，测量肿瘤的长径（a）和短径（b），计算肿瘤体积V=0.5xaxb2[4]，及体积生长率VGR（%）=（V2-V1）/V1。MVD计数：参照Weidner等[5]的方法：从中选取代表性的组织切片，排除肿瘤坏死组织，凡呈现棕黄色单个或成簇无管腔的内皮细胞均作为1个微血管，低倍镜(40X)取切片中3个微血管最高区即“热点区”，高倍镜(200X)下选取每“热点区”内5个视野，计算微血管数目，其平均值作为MVD。1.3统计学方法所有数据采用均数加减标准差(x±s)的形式；其中组间均数比较采用t检验或方差分析，分类变量比较采用Χ2检验。P0.05代表差异具有统计学意义。采用SPSS16.0统计软件进行分析。2结果2.1治疗前后一般情况30只兔肝VＸ2瘤模型均建立成功，所有瘤兔均在最初的1~3d内出现嗜睡，精神萎靡，拒食等现象，但随时间的延长这些症状渐好转。2.2肝肾功能的变化情况：术前1d各组的ALT水平差异无统计学意义（P0.05）；术后的第1、3、7d，B、C两组各检测时间点相比，差异无统计学意义(P0.05)；术后第1dB、C两组ALT水平达到高峰，与A组相比有统计学意义(P0.01)；术后第3dB、C两组ALT水平开始下降，与A相比仍有统计学意义(P0.01)；术后第7d基本降至术前水平，各组间的比较无统计学意义(P0.05)。结果见表1.表1三组术后1、3、7dALT变化情况（(x±s)）术前1d术后1d术后3d术后7dA（n=10）45.21±1.6853.28±3.8752.35±4.2755.7±3.14B（n=10）45.37±1.83359.4±25.08136.8±6.4154.36±1.34C（n=10）46.37±1.54375.3±13.67141.7±12.3155.24±2.78F值1.321218.2376.380.69P值0.290.0040.0010.054术前1d及术后第1、3、7d三组瘤兔的UREA水平无明显变化，各时间段各组间相比及组内相比都无统计学意义（Ｐ值分别为0.36、0.25、0.43)。2.3肿瘤的生长情况接种后2周，在超声下示全部瘤兔均于肝左叶检测到孤立结节影。术后7d，C组肿瘤体积生长率与A组比较，差异具有统计学意义（P0.05）。术后21d，B组和C组的肿瘤体积和肿瘤体积生长率均明显小三组治疗前后肿瘤大小变化。结果见表2表2不同时期各组肿瘤体积治疗后体积(cm3)的变化(x±s,n=10)分组体积/cm3VGR%术前1d术后7d术后21d术后7d术后21dA组1.14±0.574.43±2.9615.87±3.32249.5±85.91497.3±493.5﹡B组1.24±0.413.17±2.289.85±4.59﹡204.1±25.57743.2±389.4﹡C组1.19±0.323.08±1.148.77±5.54﹡152.1±27.3﹡545.2±273.7﹡P0.05，与对照组相比。2.4MVD的检测术后第21d处死所有瘤兔,行免疫组织化学检查。A、B、C三组肿瘤的MVD分别为47.94±8.20、25.46±5.57、12.87±3.76，经ONEWAYANOVA分析各组之间MVD计数有显著性差异(P0.05)，进一步多重比较显示(LSD法)：A与B组、A与C组、B与C组两两相比,P值分别为0.037、0.009、0.006,差异均有统计学意义(P0.05)。3讨论TACE自Goldstein等[6]1975年首例报道以来，在临床上获得普遍承认和推广，已经成为不能手术切除肝癌患者首选治疗。虽能有效缩小肿瘤,提高患者的生存质量，延长生存期。然而，单纯的TACE治疗的远期疗效不尽如人意，据报道[7]患者3年生存率仅为14%~30%，因为