ripa裂解液

ripa裂解液RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。1.基本信息组成：50mMTris-HCl(pH7.4),150mMNaCl,1%NP-40,0.1%SDS.(配有一支PMSF).使用RIPA裂解达到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去污剂，不能用Bradford法测定RIPA裂解后的蛋白浓度。保存：4℃；避光2.简介RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是RadioImmunoprecipitationAssay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。3.使用方法对于培养细胞样品：1.融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。2.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。对于组织样品：1.把组织剪切成细小的碎片。2.融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。5.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NFκB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。5.用途品名称Western及IP细胞裂解液RIPA裂解液（强）RIPA裂解液（中）RIPA裂解液（弱）NP-40裂解液SDS裂解液有效裂解成分1%TritonX-1001%TritonX-100,1%deoxycholate,0.1%SDS1%NP-40,0.5%deoxycholate,0.1%SDS1%NP-40,0.25%deoxycholate1%NP-401%SDS裂解强度温和强中温和温和强对膜蛋白的提取一般很好较好一般一般很好对胞浆蛋白的提取很好很好很好很好很好很好对核蛋白的提较好很好较好较好较好很好取胞浆磷酸化蛋白提取很好很好很好很好很好很好细胞核转录因子提取很好很好很好很好很好很好含蛋白酶抑制剂是是是是是是含磷酸酯酶抑制剂是是是是是是主要用途WB,IP,co-IPWB,IPWB,IPWB,IP,co-IPWB,IP,co-IPWB,ChIPPMSF中文名称：苯甲基磺酰氟1.使用介绍1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）；2）10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中；它对异丙醇没有特殊要求，分析纯即可，它也可以用DMSO进行配置，储存浓度同样为100mM3）在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.；4）工作浓度：17~174ug/ml（0.1~1mM），储存液浓度为100或200mM；5）在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入）2.注意事项1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。2.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。3.PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20℃