RNA干扰-是一种阻抑基因表达的新方法,是一种简单有效的代替基因敲除的遗传工具

RNA干扰-是一种阻抑基因表达的新方法，是一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具RNA干扰-是一种阻抑基因表达的新方法，是一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具，已成为基因功能研究极其重要的工具。学术术语来源---RNA干扰对成肌细胞系L6中FOXO3a基因表达的影响文章亮点：1FOXO3a是不久前发现与肌萎缩有密切联系的重要因子，是调节蛋白降解与合成的中心枢纽。通过对其进行研究，可进一步探讨肌萎缩分子机制，以便为今后的基因治疗选择提供参考。2RNA干扰是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法，课题采用RNA干扰技术来下调在失神经后表达上调的FOXO3a的表达，抑制失神经后骨骼肌中蛋白的高分解代谢，探讨延缓骨骼肌萎缩的疗效，为失神经骨骼肌萎缩寻找新的治疗方法。3鉴于骨骼肌再生分化的特殊性，提出阻断FOXO/MAFbx信号通路的治疗思路，应用FOXO3a-siRNA基因作为目的基因进行基因治疗，在理论及方法上有一定的创新性。关键词：组织构建；组织构建细胞学实验；肌萎缩；FOXO3a；L6；失神经；RNA干扰；基因表达；国家自然科学基金摘要背景：最近的研究发现，一些因子在失神经骨骼肌萎缩的过程中发挥关键性作用，其中“feak-headbox”(Foxo)转录因子是调控骨骼肌萎缩最关键的分子。目的：探讨RNA干扰技术体外抑制FOXO3a基因表达的效果。方法：6孔细胞培养板中培养大鼠成肌细胞系L6，使用pEGFP-N1与siRNA重组质粒等比例在Lipofectamine2000介导下转染，优化与检测系统的转染效率；将2μgFOXO3a基因siRNA重组质粒转染L6，转染48h与72h。结果与结论：①pEGFP-N1与siRNA重组质粒转染后48h，荧光显微镜下可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达，显示系统有较高的转染效率。②实时定量PCR分析结果显示，转染后48h和72h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3amRNA的抑制率与未转染对照组相比差异均有显著性意义(P0.05)，转染72h与48h相比，抑制效应更为明显，并以FOXO3a-Ⅰ的抑制效果最为明显。③Western印迹灰度分析结果显示，转染后48h和72h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a蛋白表达的抑制率与对照组相比差异有显著性意义(P0.05)，转染72h与48h相比，抑制效应更为明显，与mRNA水平的影响一致。结果可见RNA干扰技术在体外能够明显抑制叉头蛋白转录因子FOXO3a基因的表达，FOXO3a基因siRNA重组质粒转染其干扰序列对FOXO3a的mRNA和蛋白抑制效果尚不明确，这可为RNA干扰介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗提供一种新的思路。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程全文链接：