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1《人体解剖与生理学》实验实验一四种基本组织的自制临时装片及观察（必做）※目的及内容1．学习上皮组织和结缔组织及骨骼肌新鲜材料的平铺片的制作方法。2．学习神经组织涂片的制作方法。3．观察自制临时装片，了解四种基本组织的结构特征。※材料与用具材料：青蛙或蟾蜍、猪膈肌、新鲜牛脊髓（以腰段粗大最好）用具：常用解剖器械一套、载玻片、盖玻片、光学显微镜染液：１％甲基蓝、１％醋酸溶液1、单层扁平上皮组织的平铺片制作用尼龙网袋装好青蛙或蟾蜍放入桶中加水，在水中浸泡０.５小时，表皮自然脱落。用镊子将黏附在尼龙网袋格子上的表皮夹入培育皿中存放备用。取一小块表皮放置载玻片上，用解剖针将其展平，待铺片干后，用１％的甲基蓝染色３分钟，将多余的染液用吸水纸从边缘吸干即可镜检。特点：上皮细胞为多边形，细胞与细胞之间边界清晰，细胞核扁圆形，位于细胞中央。2、疏松结缔组织的平铺片制作将蟾蜍处死，剪开皮肤剪取一小块皮下结缔组织置一载玻片上，然后左右各持一解剖针，将组织撕开平铺载玻片上，用甲基蓝染色１５分钟，盖上盖玻片即可观察。特点：①成纤维细胞—数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察细胞呈梭形或扁的星状，胞核大,多为椭圆形，染成蓝紫色。②巨噬细胞——数量多分布广，细胞不规则，胞体圆形或卵圆形；胞核小，为圆形、椭圆形或肾形，核染色为深蓝色。③胶原纤维——排列成束彼此交织吻合,纤维束常有分支。2④弹性纤维——在疏松结缔组织中略呈黄色，折光性强，富有弹性，一般较胶原纤维细,纤维有分支，排列散乱。3、神经组织涂片制作将解剖针在脊髓灰质前角挑取半米粒大小的组织，置于洁净的载玻片上,涂成均匀而薄的一层，晾干后加２-３滴甲基蓝，约２-３分钟，用清水清洗后镜检。特点：神经组织由神经元细胞和神经胶质细胞组成。神经元由胞体和突起组成。胞体—有圆形、梨形、梭形、锥体形及星形等。神经元树突：多个，呈树枝状突起，内含尼氏体。突起（胞质内许多被染成深蓝色的小块）轴突：每个神经元只有1个轴突，轴突从胞体发出的部位呈圆锥形隆起，着色较浅，称轴丘，没有尼氏体。4、骨骼肌平铺片制作取猪横隔肌剪成小块,用纯甘油浸泡3-4天，待用。取猪横隔肌一小块,用解剖针将肌纤维分离,放到载玻片上,滴上一滴醋酸,在显微镜下观查。特点：肌原纤维表面有肌膜，是多核细胞,呈细丝状。每条肌原纤维有明暗相间的横纹，而且明暗横纹皆整齐地排列在同一水平上，所以整个肌纤维显示出明暗相间的带。【实验一】作业：1．绘图说明蟾蜍单层扁平上皮细胞在平铺片上的形态。2．绘图说明蟾蜍疏松结缔组织的纤维在平铺片上的形态特征及其细胞形态。3．绘图说明骨骼肌的结构特点。4．绘图说明多极神经元的形态特征。3补充知识：单毁髓、双毁髓蛙的制备※单毁髓——只刺毁蛙的脑，保留完好的脊髓，就是脊蛙。※双毁髓——刺毁蛙的脑和脊髓。1．左手握蛙，背部向上，用食指下压其头部前端，使头前俯，中指抵住其胸部，拇指按其背部，使头与脊柱相连处凸起。右手持毁髓针自两眼之间沿中线向后端触划，当触到一凹陷处即枕骨后凹。2．将毁髓针由凹陷处垂直刺入，再将针尖从枕骨大孔向前刺入颅腔，并在颅腔内搅动，捣毁脑组织。如针确在颅腔内，则可感到针触及颅骨（图16－1）。3．将针退回至枕骨大孔，然后针尖转向后方与脊柱平行插入椎管，一边伸入，一边旋转毁髓针以毁髓。当蛙四肢僵直而后又松软下垂时，即表明脑和脊髓完全破坏。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，则必须重新毁髓。4．拔出毁髓针，用一小干棉球将针孔堵住，以止其出血。图：枕骨大孔的位置枕骨大孔蛙眼4实验二坐骨神经——腓肠肌标本的制备（必做）一、目的要求1．学习捣毁蛙脑和脊髓的方法。2．熟悉制备蛙类坐骨神经——腓肠肌标本的方法，为后面的实验打下基础。二、实验原理蛙或两栖类的一些基本生命活动及生理功能与温血动物近似，而且其离体组织需要的生活条件非常简单，易于控制和掌握。因此在生理学实验中，坐骨神经——腓肠肌标本是研究神经肌肉生理最常用的对象，经常用来研究神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律、肌肉收缩的特点、兴奋性的周期性变化等。三、实验器材和药品实验对象：蟾蜍或蛙实验器材：蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀，尖头镊子、眼科镊子各1把，玻璃分针2根），蛙板1块，培养皿，滴管，废物缸、锌铜弓，丝线，棉花；任氏液。四、实验步骤（见课本）五、实验要求与注意事项1．熟悉蟾蜍手术器械的使用，了解蟾蜍腿部的局部解剖及坐骨神经的走行。2．避免损伤蟾蜍背部的腺体（尤其是眼后的大腺体），防止其分泌物溅入眼内或污染标本。3．勿剪破蟾蜍内脏，并及时清洗手及用过的器械；已剥去皮肤的组织应避免接触蟾蜍皮肤或其他不洁物；以防标本被污染。4．游离神经、肌肉时不可过度牵拉，应避免用手指、金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，更不能用自来水冲洗标本。5．制备过程中应经常向标本上滴任氏液，防止神经因干燥而失去正常兴奋性。标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟，使标本兴奋性稳定。6．移动制备好的标本时，先将游离的神经搭在腓肠肌上，再用双手分别提拿跟键和股骨断端，防止神经受力过重。7．检查标本的兴奋性：用被任氏液浸湿的锌铜弓接触坐骨神经，如腓肠肌迅速收缩，则表示标本的兴奋性良好，可供有关神经肌肉生理实验用。5六、分析与思考1．通过制备坐骨神经-腓肠肌标本，你对生理学实验有何感想？2．损毁脑和脊髓后的蟾蜍有何表现？若破坏脊髓不彻底，蟾蜍的四肢会有什么表现？为什么？3．为什么在本实验中应经常给标本滴加任氏液？4．锌铜弓为何能用来检查标本的兴奋性？若无锌铜弓，能否用其他方法来检查标本的兴奋性？※七、注意事项1．制备标本过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性。2．已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物，也不要用水冲洗，以免影响组织机能。3．分离神经时，一定要用玻璃分针。不得用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，以免造成损伤。4．分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离于净。5．实验要迅速，以免时间过长影响标本活性(兴奋性)。八、作业：1.制备蛙坐骨神经——腓肠肌标本时，如何保持标本的机能正常？2.锌铜弓刺激检测标本活性的原理是什么?6实验三反射弧的分析与反射时的测定（必做）一、实验目的观察某些脊髓反射，学习测定反射时的方法，分析反射弧组成部分的功能及其完整性与反射活动之间的关系。二、实验原理在中枢神经系统参与下，机体对刺激产生的规律性反应称为反射。反射过程中生物信号经反射弧传递需要一定时间，从刺激开始至反射出现所需的时间为反射时，即兴奋通过反射弧而引起外周效应所需要的时间。反射时可通过简单的方法初步测定。同时，反射只有在反射弧结构和功能完整的基础上才能进行，若组成反射弧的感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分中的任何一部分受到破坏，反射均不会发生。三、实验器材和药品实验对象：蟾蜍或蛙实验器材：BL－410生物机能实验系统，蛙类手术器械一套，蛙板，玻璃板，铁支架，肌夹，双凹夹，刺激电极，培养皿，滴管，线，干棉球，秒表；药品：任氏液，0.3﹪、0.5﹪稀硫酸，食盐结晶颗粒纸，普鲁卡因四、实验方法和步骤1．制备脊蟾蜍取蟾蜍一只，用纱布裹紧蟾蜍的上下肢和躯干，露出头部。用剪刀开口的一侧伸入蟾蜍口裂根部，另一侧置于背部，齐鼓膜后缘剪去动物的头部，保留下颌和脊髓，即成脊蟾蜍。用棉球作创口止血。2．固定用肌夹固定蟾蜍下领，将其悬挂在铁支架上。3．仪器调试打开计算机，进入BL－410生物机能实验系统操作界面，选择输入信号→1通道→肌电信号。调整刺激参数为：波宽1ms，强度3－6V，频率50－70Hz，连续单刺激。74．观察项目(1)反射时测定：将蟾蜍右下肢的趾尖浸入稀硫酸液中，同时开动秒表记录从浸入至肢体反射的时间。反射发生后用清水反复洗去皮肤上的稀硫酸，用棉球擦去清水。重复测定三次，求时间平均值，此值即为反射时。(2)反射弧的分析：①在右下踝关节上方作一环行皮肤切口，将趾部皮肤剥去，再用硫酸分别刺激左右两侧趾尖，观察两侧肢体各有何反应。②剪开左侧大腿内侧皮肤，在股二头肌和半膜肌之间找出坐骨神经，游离1cm后做双结扎，并在两结扎线中间剪断神经，再用稀硫酸刺激该侧脚趾，观察反应如何。③启动BL－410生物机能实验系统的电刺激器，以重复电刺激坐骨神经中枢端观察同侧和对侧肢体的反应有何不同。④用金属探针破坏脊髓后，重复步骤③，观察反应。⑤重复电刺激坐骨神经外周端，观察同侧反应。⑥直接电刺激左侧腓肠肌，观察反应如何。五、实验要求与注意事项1．制备脊蛙时，颅脑离断的部位要适当，太高因保留部分脑组织而可能出现自主活动，太低又可能影响反射的产生。2．剥掉趾部皮肤时，一定注意趾尖不要残留皮肤，否则刺激仍能引起反射。3．每次用稀硫酸刺激时，浸入部位应限于趾尖，浸泡范围也应一致，切勿浸入太多；而且浸入时间最长不超过10秒。4．每次用硫酸刺激后，均应迅速用水洗去蛙趾皮肤上的硫酸，以免皮肤受伤。洗后应沾干水渍，防止再刺激时硫酸被稀释。8六、分析与思考1．记录：脊蛙的反射时序刺激刺激部位项目结果（s）平均值（s）12310.3%硫酸右后肢最长趾屈反射20.5%硫酸右后肢最长趾屈反射30.5%硫酸蛙背部搔趴反射40.5%硫酸蛙腹部搔趴反射51%硫酸蛙背部搔趴反射2.剥净长趾上的皮肤后用硫酸刺激去皮的长趾反射现象？（有没有）3.分离出坐骨神经后，在细棉条上滴普鲁卡因溶液后用硫酸刺激有皮肤的趾（有没有）反射现象？4．取浸有硫酸溶液的滤纸片贴于蛙的腹部（有没有）擦或抓反射的现象？结论：6．思考题：1．反射弧由哪几部分组成？分别起什么作用？2．反射的生理意义及种类有哪些？3．反射时的长短与哪些体内外因素有关？4．右侧坐骨神经被剪断后，动物的反射活动发生了什么变化?这是损伤了反射弧的哪一部分?5．剥去趾关节以下皮肤后，不再出现原有的反射活动，为什么?9实验四蛙心起搏点的观察与分析（选做）一、目的要求1．学习暴露蛙心脏的方法，熟悉蛙心脏结构。2．观察心脏各部分活动情况及搏动的先后次序。3．通过结扎阻断静脉窦与心房之间、心房与心室之间兴奋的传导，观察分析蛙心节律性活动的起源，以及正常心脏的传导系统在心搏活动中的作用。二、实验原理心脏活动具有自律性，但各部分的自律性高低不同。窦房结的自律性最高。其每次兴奋依次激动心房、心室，引起心脏各部分的顺序活动。正常生理情况下窦房结为心脏的正常起搏点，其他部位的自律细胞称为潜在起搏点，当窦房结的兴奋传导受阻时，潜在起搏点可取代窦房结引发心房或心室活动。两栖类动物的心脏起搏点称静脉窦。三、实验器材和药品实验对象：蟾蜍或蛙实验器材：蛙类手术器械一套，蛙板，玻璃板，蛙腿夹，滴管，细线，秒表；任氏液。还需盛有约40℃温水的小试管，盛0℃冰水的小试管。四、实验方法和步骤1．暴露心脏(1)将双毁髓蛙背位置蜡盘中，展开四肢，用大头针于腕部钉入，以将蛙固定在蜡盘中。★为什么用双毁髓蛙进行心搏起源的分析？(2)左手持镊提起胸骨后方腹部皮肤，右手持剪剪开一小口，然后将剪刀由切口处伸入皮下，向左右两侧锁骨的外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。(3)再用镊子提起胸骨后方的腹肌，用金冠剪在腹肌上剪一小口后，沿皮肤切口方向剪开胸壁，★剪时剪刀尖紧贴胸壁，以免损伤内脏和血管，剪断左右乌喙骨和锁骨，剪去胸壁，使创口成1个倒三角形，此时可见到心脏在心腔内搏动。10(4)左手持眼科镊提起半透明围心膜，右手用眼科剪剪开围心膜，暴露心脏。★实验中应不时用任氏液保持心脏湿润。为什么？2．观察心蛙心结构如图16－2，从心脏腹面识别静脉窦、心房、心室，然后用玻璃分针将心尖翻向头端，再从背面辨认。可见心房与静脉窦之间有一半月形白线，即窦房沟。用眼科镊子在主动脉干下穿线备用。3．观察心搏过程观察静脉窦、心房和心室收缩的顺序，并用秒表记录心搏频率。★注意心室收缩时容积和颜色的变化。4．不同温度刺激蛙心各部位用盛有约40℃温水的小试管底部分别接触心房、心室和静脉窦1min，重复3次并记录每次温度刺激时心脏各部位的搏动频率。换用盛冰水的小试管，重复上述试验并记录。★小试管底部接触所刺激部位时，不能接触到心脏其他部